糙海参(Holothuria scabra)胚胎发育观察

对糙海参的胚胎发育至幼体发生进行显微观察。结果表明:受精45 min开始出现第一次卵裂,随后经过4、8、16等裂细胞,4 h后进入不等裂多细胞期,6 h后出现可游动囊胚期,10 h后进入原肠期,24～26 h成为耳状幼体。经历10～11 d的生长与发育,变态为樽形幼体,幼体经历由小变大再由大变小的过程。樽形幼体2～6 d后再次变态为较大体形的五触手幼体,开始转入底栖,五触手期2～8 d后,幼体最终以稚参形态附着下来。整个发育过程时间为16～25 d。

壳寡糖对热带糙海参(Holothuria scabra)体腔细胞吞噬活性影响

本研究首先比较了健康海参和患病初期糙海参的体腔细胞吞噬活性,发现正常健康糙海参吞噬率和吞噬指数变动范围分别在66%至10%之间(平均值为31%),0.7至0.1之间(平均值为0.45)。患病糙海参(化皮症感染初期)吞噬活性略低于健康海参,其吞噬率变动范围在38%至5%之间(平均值为24%),吞噬指数变动范围0.9至0.1之间(平均值为0.42),但随着病症加重,糙海参体腔细胞吞噬活性逐渐降低。然后对健康海参和患病初期糙海参投喂壳寡糖,发现壳寡糖可以提高细胞吞噬活性,且对健康糙海参效果更明显。

Triterpene Glycosides from Sea Cucumber Holothuria scabra with Cytotoxic Activity

Objective To study the new triterpene glycosides from sea cucumber Holothuria scabra with cytotoxic activity. Methods Triterpene glycosides from H. scabra were separated and purified by chromatography on DA-101, silica gel, and reversed-phase silica gel column, as well as RP-HPLC. Their structures were elucidated on the basis of spectral data and chemical evidence. Results Three triterpene glycosides were identified as scabraside D (1), fuscocineroside C (2), and 24-dehydroechinoside A (3). Their inhibition on P-388, A549, MKN-28, HCT116, and MCF-7 cells were significant. Conclusion Scabraside D (1) is a new triterpene glycoside, and compounds 2 and 3 are isolated from H. scabra for the first time. The glycosides 1-3 show the in vitro cytotoxicity against five human tumor cell lines in comparison to 10-hydroxycamptothecin.

5种饲料对糙海参幼参生长和营养成分的影响

为探讨不同饲料间的营养搭配,优化热带海参配合饲料及提高糙海参(Holothuria scabra)人工养殖技术,本研究分析了5种饲料对糙海参幼参生长和营养成分的影响。试验采用虾料、螺旋藻粉、马尾藻粉、配合饲料和发酵饲料[由配合饲料、马尾藻粉、丁酸梭菌(Clostridium butyrate)、海洋红酵母(Rhodotorula benthica)和螺旋藻粉按一定比例混合发酵]分别投喂幼参[体质量为(1.06±0.20) g],养殖周期40 d,最后测定幼参的体质量、特定生长率(SGR)及体壁营养成分。结果显示,40 d时配合饲料组幼参体质量、SGR最高,发酵饲料组次之,均显著高于其余饲料组(P<0.05)。虾料组、配合饲料组幼参体壁粗蛋白含量显著高于马尾藻粉组、螺旋藻粉组(P<0.05),发酵饲料组与其余组间均无显著差异(P>0.05);配合饲料组、发酵饲料组和虾料组幼参含水率显著高于螺旋藻粉组、马尾藻粉组以及试验初始时幼参的含水率(P<0.05);马尾藻粉组幼参灰分含量显著高于对虾组、配合饲料组以及试验初始时幼参的灰分含量(P<0.05);虾料组幼参能值显著高于其余组(P<0.05),马尾藻粉组、螺旋藻粉组幼参能值显著低于其余组(P<0.05)。在幼参总氨基酸(TAA)、必需氨基酸(EAA)、半必需氨基酸(SEAA)和呈味氨基酸(FAA)含量方面,配合饲料组、发酵饲料组和虾料组间均无显著差异(P>0.05),且显著高于马尾藻组和螺旋藻组(P<0.05)。综上所述,投喂配合饲料和发酵饲料的糙海参幼参生长效果最佳,可为糙海参幼参养殖管理以及其饲料研发提供数据支撑。

糙海参中三萜皂苷活性成分的研究

目的:研究糙海参(HolothuriascabraJaeger)的三萜皂苷类抗癌活性成分。方法:应用大孔树脂柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和HPLC进行三萜皂苷成分的分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构。并对提取到的化合物进行了稻瘟霉和体外细胞毒(针对MKN45人胃癌肿瘤细胞和HCT116人肠癌肿瘤细胞)的活性检测。结果:分离鉴定了5个三萜皂苷化合物,分别为24dehydroechinosideA(1),echinosideB(2),echinosideA(3),holothurinB(4)和holothurinA(5)。化合物1～5对稻瘟霉的最小活性浓度分别为<7.9、<15.7l、<7.9、<15.7、<7.9μg/ml,对MKN45人胃癌肿瘤细胞的IC50值分别为1.60、0.18、1.86、1.59、2.37μmol/L,对HCT116人肠癌肿瘤细胞的IC50值分别为1.46、3.31、1.98、1.60、0.24μmol/L。结论:化合物1为首次以原生产物形式得到的单体天然产物,2～5为首次从糙海参中分离得到。5个化合物均显示显著的体外细胞毒活性。

不同水温和水质理化因子对糙海参摄食、生长影响研究

分别以不同水温15、20、25、30℃为4个试验组,研究糙海参成参的摄食和生长。试验结果表明：糙海参体重的增长与水温的变化密切相关;糙海参的最适生长水温为20-30℃,在25℃时生长最快,日增重量和日增重率分别为7.667 g和1.48%,而且显著高于其他试验组。在水温15℃时,日增重量和日增重率分别为0.1 g和0.022%,有时会出现负增长。当水温达到15℃时,糙海参摄食活动减少,停止摄食,体重不再增加。在水质因子研究方面,分为不换水试验组、换水1/3试验组（每日）、全部换水试验组（每日）,研究了不同水质对糙海参生长的影响。经过15 d养殖,结果表明：其他水质指标波动在正常范围,3个试验组间无明显差别,只有NO^-2含量有明显的差异。不换水组、换水1/3组和全部换水组的亚硝酸盐质量浓度分别是1.34 mg/L、0.55 mg/L和0.23 mg/L。亚硝酸盐质量浓度大小与海参生长有密切关系,两者呈负相关。全部换水组亚硝酸盐质量浓度显著低于其他试验组,糙海参生长最快;不换水试验组,部分糙海参日增重量和日增重率呈负增长,部分已经吐脏。

糙海参胚胎和幼体发育的形态观察

为提高糙海参育苗技术,研究描述了糙海参从受精卵发育到稚参的形态变化,在显微镜下测定了受精卵、胚胎和幼体的大小,确定了糙海参胚胎发育的过程。结果表明,通过利用阴干、流水刺激法对成熟亲参进行人工催产,得到大量的受精卵,其受精率为90%以上。糙海参胚胎和幼体发育可分为受精卵、卵裂期、囊胚期、旋转囊胚期、原肠期、初耳状幼体、中耳状幼体、大耳状幼体、樽形幼体和稚参等阶段;在平均水温29℃,平均盐度34条件下,糙海参受精卵经3 h发育形成囊胚,4 h进入旋转囊胚期,5 h进入原肠期,19 h完成胚胎发育变态为耳状幼体;并经过7 d的生长与发育进入樽形幼体;第15天变态为稚参。观察发现,多精入卵现象则会导致胚胎发育不正常,最终使胚胎发育停止并死亡。在糙海参幼体发育过程中,大耳状幼体期幼虫臂的大小及其球状体的形成均可作为判断其幼体发育健康状况的重要指标:幼虫臂越大,球状体出现率越高,其幼虫的变态率和成活率也越高。对比发现,位于糙海参尾部的突出结构——尾突,为仿刺参和新西兰刺参所没有,这一结构差异同时导致了其骨片位置也不同;并且,糙海参胚胎和幼体与其他种类的海参在发育时间上存在一定差异。

海参科(Holothuriidae)中4种海参的营养成分分析

糙参、乌皱辐肛参、荡皮海参蛋白质含量69.61%～72.32%,总氨基酸57.47%～68.99%;脂肪0.41%～1.12%,不饱和脂肪酸40.92%～54.74%;灰分8.48%～18.33%,常量元素Ca含量最高,Mg、K、Na次之,微量元素中Fe最高,Zn、Cu、Mn、Mo、Se次之,Cr较低,Co未检出;粗多糖在2.56%～7.23%,乌皱辐肛参的粗多糖含量较高。黑乳参中蛋白质含量最高达80.73%,总氨基酸68.99%;脂肪仅含0.1%,不饱和脂肪酸在26.53%;灰分含量9.25%,常量元素由高到低顺序K、Mg、Ca、Na,而P的含量较低,微量元素中Zn含量最高,Fe、Mo次之,Co痕量;粗多糖含量较低为2.28%。分析发现黑乳参与其它3种海参营养成分有明显差异,属于高蛋白、低脂肪食用海参。

添加光合细菌对糙海参幼苗培育阶段的影响研究

以受精后24 h孵化出的糙海参(Holothuria scabra)耳状幼体为研究对象,探讨养殖水体不同量光合细菌对糙海参苗期生长、成活、消化道消化酶活性和养殖水体水质变化的影响。试验设4个处理,光合细菌(浓度为1×1011cfu·m L-1)添加量分别是0 m L(组1,对照组)、50 m L(组2)、100 m L(组3)和150 m L(组4),每个处理设3个重复,每个重复放养4×104尾幼体于室内水泥池(5 m×3 m×1.5 m)中,试验周期为41 d。结果表明,添加光合细菌组的糙海参出苗体质量和成活率均显著高于对照组(P<0.05),而组3和组4的体质量和成活率又明显优于组2(P<0.05),组3和组4之间的差异不显著(P>0.05)。添加光合细菌还能不同程度地影响糙海参苗体消化道蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性,试验组3种酶的活性均显著高于对照组(P<0.05),而组3和组4的蛋白酶活性和纤维素酶活性显著高于组2(P<0.05),淀粉酶活性在3个试验组之间无显著差异(P>0.05)。在试验第10天后,各试验组氨氮(NH3-N)和亚硝酸盐含量显著低于对照组(P<0.05),在试验第20天后,各试验组化学需氧量(COD)的值显著低于对照组(P<0.05),而总磷(TP)的差异不大(P>0.05)。表明光合细菌可以促进糙海参幼体的生长,提高消化酶活性和成活率,并改良育苗水体水质。

南方糙海参的人工催产与育苗初步试验

糙海参（Holothuria scbra）是中国南方优质的热带海参经济品种，试验首次成功在国内综合运用升温等多种刺激方法人工诱导糙海参产卵，并进行了批量人工育苗。2010年4—6月，共进行人工催产试验10次，催产亲参243头，5次试验产卵，催产成功率50％，共获得受精卵1652．72×10^4粒，孵出糙海参幼体1226．74×10^4头，总体孵化率74．23％；在水温27．5～30．0℃条件下，受精卯完成胚胎发育需要32．5h；利用其中部分幼体开展后期人工育苗，经过21d培育，获得糙海参早期稚参（0．1cm）19．43×10^4头，苗种培育成活率16．7％；经过32d培育获得大规格后期稚参苗（0．3～0．5cm）2，46×10^4头，培育成活率2．12％。试验的成功对下一步开展北部湾海域糙海参的天然种群恢复和在华南地区进行糙海参的人工养殖与开发具有重要意义。

糙海参酸性粘多糖的分离及特性研究

研究了糙海参酸性粘多糖酶水解及乙醇沉淀的分离纯化方法,通过GPC测定其重均分子质量为59 934u,研究了其光谱特性。其氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖、硫酸根含量分别为16.40%、19.40%、11.08%和28.15%,通过对其理化性质的研究,为更好地利用这一生物资源提供了依据。

微生态制剂对糙海参生长、消化酶活性及水质的影响

以受精后24 h孵化出的糙海参(Holothuria scabra)耳状幼体为研究对象,探讨养殖水体不同微生态制剂对糙海参苗期生长、存活、消化道消化酶活性和养殖水体水质变化的影响。实验设5个处理组,每隔5 d分别向4个试验组育苗池泼洒乳酸菌(浓度为1×108cfu·mL-1)15g(G1)、芽孢杆菌(总菌数为5×109·g-1)10 g(G2)、光合细菌(浓度为1×1011cfu·mL-1)50 mL(G3)和复合菌(G4,包含光合细菌30 mL、乳酸菌10 g和芽孢杆菌3 g),对照组(C)不添加微生态制剂。实验结果表明:试验组的糙海参出苗体重显著高于对照组(P<0.05),而G1的体重明显大于其余试验组(P<0.05),G3和G4之间的差异不显著(P>0.05);成活率由高到低依次为G4、G3、G2、C、G1,其中G2和C之间差异不显著(P>0.05),其余组之间差异显著(P<0.05)。微生态制剂的添加还能不同程度地影响糙海参苗体消化道的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性,G3和G4的蛋白酶和淀粉酶活性显著高于其它组(P<0.05),两组之间差异不显著(P>0.05);G1和G4的纤维素酶活性显著高于其它组(P<0.05),两组之间差异不显著(P>0.05)。各试验组苗池水质的氨氮、亚硝酸盐和COD值分别在实验第10天、20天和30天显著低于对照组,微生态制剂对糙海参苗期养殖池的总磷(TP)影响不大(P>0.05)。研究结果表明,糙海参育苗池中泼洒微生态制剂可以促进幼体的生长,提高消化酶活性和成活率,并有改善育苗水体水质的作用。

不同pH对糙海参消化酶活性的影响

研究了不同pH条件下糙海参前肠、中肠及后肠的蛋白酶和淀粉酶比活力的变化.结果表明:1)糙海参前肠和中肠在pH=3,后肠在pH=10时,其蛋白酶的比活力最高;糙海参前肠和中肠蛋白酶的最适pH值在酸性范围,后肠蛋白酶的最适pH值在碱性范围;2)糙海参前肠淀粉酶在pH=3,中肠和后肠淀粉酶在pH=7时,其比活力最高,前肠淀粉酶的最适pH值在酸性范围,中后肠淀粉酶的最适pH值在中性或偏碱性范围;3)糙海参的整个肠道均能消化蛋白质与淀粉,中后肠是淀粉消化的主要场所;4)淀粉酶的比活力高于蛋白酶的比活力,这与其摄食底栖藻与腐屑的食性相吻合.

糙海参酸性粘多糖的提取纯化工艺探讨

本文研究了糙海参多糖的提取纯化方法,提取的最适提取条件为:pH6.0,木瓜蛋白酶浓度为250U/g,水解温度为60℃,水解时间为9.0h。

糙海参苗种规模化繁育技术研究

为有效增殖糙海参资源,2014年6月—2015年5月,以采自海南陵水沿海的天然糙海参为亲参,通过探索糙海参亲参运输、培育、诱导精卵排放以及幼体和稚幼参培育等技术,建立糙海参苗种规模化繁育关键技术体系。试验结果显示,采用薄膜袋充氧干运法运输糙海参,亲参成活率可达99.8%;亲参培育成活率达97.1%以上;采用阴干与流水相结合诱导亲参排放精卵,成功率达93.3%。以培育的亲参进行了12批次初耳幼体和稚幼苗培育试验,共放养初耳幼体5474万个,培育出体长1.0~5.5 cm幼参445.9万头,初耳幼体培育总成苗率8.1%。初步实现了糙海参苗种规模化生产。

室内养殖不同月龄糙海参营养成分分析

【目的】分析室内养殖的4、7和10月龄干、鲜糙海参的营养成分。【方法】用国标统一方法分析。【结果】随着生长发育,糙海参干体粗脂肪含量呈增加趋势,而粗蛋白和总多糖含量则呈下降趋势(P<0.05);不同月龄糙海参鲜体内水分、粗蛋白、总多糖、总皂苷和粗脂肪含量差异有统计学意义(P<0.05),粗脂肪含量低于检出限。在糙海参体内共检出17种氨基酸,其中8种必需氨基酸、1种半必需氨基酸和8种非必需氨基酸。4月龄糙海参干体各氨基酸含量显著低于7月龄和10月龄糙海参(P<0.05),各月龄糙海参氨基酸含量由大到小顺序较为一致,为谷氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、精氨酸、丙氨酸、脯氨酸,但鲜体蛋氨酸、亮氨酸,赖氨酸和组氨酸含量差异有统计学意义(P<0.05),而其他氨基酸含量差异无统计学意义(P>0.05)。不同月龄糙海参干体必需、非必需氨基酸比值和必需氨基酸占总氨基酸比例分别为0.36~0.38,26.58%~27.55%,鲜品的必需、非必需氨基酸比值和必需氨基酸占总氨基酸比例分别为0.33~0.36、26.06%~26.34%;不同月龄糙海参干体的鲜味、药用氨基酸占总氨基酸比例分别为60.74%~61.46%、66.29%~66.21%,鲜品的鲜味、药用氨基酸占总氨基酸比例分别为62.86%~64.03%、66.13%~66.46%。【结论】室内养殖糙海参品质和营养价值较高。

糙海参多糖纯化工艺优选及其产物的药理活性比较

通过正交实验发现糙海参多糖粘度和脱色时的温度、时间、多糖浓度和H2 O2 浓度有关。温度升高、时间延长、多糖浓度减小和H2 O2 浓度增大使产物粘度减小。并且不同粘度的糙海参多糖对小鼠急性脑缺血死亡时间的影响不同 ,在一定的范围内 ,随粘度减小 ,死亡时间延长 。

白沙参(斯里兰卡)人工繁育关键技术研究

研究了白沙参的人工繁育关键技术,观察了白沙参从受精卵到稚参的发育过程,并详细记录了各发育期距离受精的时间及各发育期完成发育的时间。确定角毛藻是其浮游幼虫期的主要饵料,发育成稚参后前5 d,开始施肥培育池壁上生长的底栖硅藻,在变为稚参10 d后投喂海藻磨碎液。发现桡足类的影响使稚参存活率、收获密度显著降低。

糙海参卵子发生及卵黄发生的超微结构

通过扫描与透射电镜观察了糙海参(Holothuria scabra)卵子发生及卵黄发生的过程。结果表明,糙海参卵子属于均黄卵,其卵子发生经历卵原细胞、卵黄发生前卵母细胞、卵黄发生期卵母细胞3个阶段。其中,卵黄发生期卵母细胞分别包括卵黄发生早期、中期、后期卵母细胞3个阶段。卵原细胞核大且呈椭圆形,胞质中只分布少量的线粒体;卵黄发生前卵母细胞内有一个空泡状的生发泡(卵核);卵黄发生早期,细胞器种类丰富,数量多;卵黄发生中期,卵黄合成旺盛,是内源性卵黄大量形成的阶段,多种细胞器活跃参与形成卵黄;卵黄发生后期,细胞体积最大,细胞核明显,且位于胞质中间或者靠近动物极突。高尔基体、线粒体及核糖体是形成内源性卵黄最主要的细胞器。卵质膜通过胞饮作用参与外源性卵黄的形成。本结果可为糙海参繁殖生物学和人工繁殖提供参考。