血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年糖尿病肾病患者肾脏损伤及预后的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)无远端同源框6反义RNA 1(Dlx6os1)、LncRNA牛磺酸上调基因1(TUG1)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的相关性。方法选取2019年1月—2021年1月西安交通大学第一附属医院榆林医院肾病学科收治的老年DN患者201例作为DN组,同期单纯T2DM患者112例作为单纯T2DM组,同期体检健康的老年人105例作为健康对照组,随访3年根据预后将老年DN患者分为不良预后亚组(61例)和良好预后亚组(140例)。检测血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1和肾脏损伤指标[计算肾小球滤过率(eGFR)、尿白蛋白肌酐比(UACR)]水平;采用Spearman相关系数分析血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年DN患者肾损伤的相关性;以老年DN患者预后为因变量,建立多因素非条件Logistic回归模型分析其影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平对其的预测价值。结果健康对照组、单纯T2DM组、DN组血清LncRNA Dlx6os1和UACR水平依次升高,血清LncRNA TUG1和eGFR依次降低(F/P=870.484/<0.001、566.671/<0.001、271.117/<0.001、196.722/<0.001);Spearman相关性显示,老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平与eGFR呈负相关、与UACR呈正相关(r/P=-0.816/<0.001、0.809/<0.001),血清LncRNA TUG1水平与eGFR呈正相关、与UACR呈负相关(r/P=0.832/<0.001、-0.806/<0.001);随访截至2024年1月,老年DN患者201例不良预后发生率为30.35%(61/201);多因素非条件Logistic回归显示,慢性肾脏病≥4期、UACR升高、LncRNA Dlx6os1升高为老年DN患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=5.758(1.480~22.401)、1.013(1.005~1.022)、1.426(1.201~1.693)],eGFR升高、LncRNA TUG1升高为保护因素[OR(95%CI)=0.958(0.939~0.978)、0.418(0.254~0.689)];ROC曲线显示,血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1及二者联合预测老年DN患者不良预后的AUC分别为0.774、0.777、0.852,二者联合预测的AUC最大(Z/P=2.930/0.003、3.335/0.001)。结论老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平升高、LncRNA TUG1水平降低,与肾脏损伤加重和不良预后风险增加有关,血清LncRNA Dlx6os1联合LncRNA TUG1水平预测老年DN患者不良预后的效能较高。

HOXA9和LRP6在甲状腺癌中的表达及其在预后评估中的价值

目的探讨甲状腺癌组织中同源盒基因A9(HOXA9)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)表达情况及其在预后评估中价值。方法收集山东省菏泽市立医院2018年1月至2020年1月150例甲状腺癌患者术中切除的癌组织(TC组),另以同期100例甲状腺瘤患者术中切除的组织为对照(腺瘤组)。免疫组化法检测组织HOXA9、LRP6蛋白表达,分析HOXA9、LRP6蛋白表达与临床病理特征关系。Kaplan-Meier法分析HOXA9、LRP6蛋白表达与生存率关系。甲状腺癌患者预后影响因素利用COX回归模型。结果TC组HOXA9阳性表达率(72.67%vs 16.00%)、LRP6阳性表达率(68.67%vs 14.00%)明显高于腺瘤组(P<0.05)。经卡方检验以及GEPIA数据库检索发现,甲状腺癌组织HOXA9与LRP6表达水平呈正相关(P<0.05)。HOXA9、LRP6阳性表达者临床分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、细胞低分化者占比高于HOXA9、LRP6阴性表达(P<0.05)。HOXA9阳性表达总生存率(72.48%vs 92.68%)、LRP6阳性表达总生存率(71.84%vs 91.49%)低于HOXA9阴性表达、LRP6阴性表达(χ^(2)=6.829、6.508,P=0.009、0.011)。COX回归分析显示,临床分期Ⅲ期、HOXA9阳性表达、淋巴结转移、LRP6阳性表达是甲状腺癌患者不良预后的影响因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中HOXA9、LRP6呈高表达,与临床病理特征及预后有关,可用于评估甲状腺癌预后指标。

Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。

SNHG6通过上调ZEB1表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的侵袭和转移

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6, SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法:使用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测36例ESCC组织及其癌旁组织(标本收集自河北医科大学第四医院2019年2月至8月外科手术的ESCC患者)中SNHG6表达水平;使用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ESCC细胞系(TE1、Yes-2、Eca9706和Kyse150)中SNHG6表达水平,选用SNHG6高表达的TE1细胞,通过转染SNHG6-siRNA敲低该细胞中SNHG6表达;通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测SNHG6敲低前后TE1细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SNHG6敲低前后TE1细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化。结果:SNHG6在ESCC组织和细胞系中均呈高表达状态(均P<0.01),且在TE1细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA后TE1细胞中SNHG6表达水平显著降低(P<0.01),si-SNHG6-1和si-SNHG6-2组TE1细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(均P<0.01),两组细胞中MMP-2、MMP-9和ZEB1表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论:ESCC组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1细胞的恶性生物学行为,其机制可能涉及ZEB1表达的上调。

小干扰RNA-Pax6对人晶状体上皮细胞生物学行为和上皮-间质转化的抑制作用

目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率;转染后48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例;转染后24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F_(分组)=4.776,P<0.05;F_(时间)=13.535,P<0.05),其中转染后48 h和72 h,siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA-NC组比较,siRNA-Pax6组G_(0)/G_(1)期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(t=9.971、-5.063,均P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%,低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%,差异有统计学意义(t=-7.245,P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组,E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=-23.254、-5.294、6.062,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=5.521、8.270,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01,低于siRNA-NC组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-14.456,P<0.001);siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05,低于siRNA-NC组的1.14±0.10,差异有统计学意义(t=-4.458,P<0.001)。结论沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程,维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

PEBP4、CMTM6、HOXD10在脑胶质瘤中的表达水平及其临床价值

目的分析磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(PEBP4)、趋化素样因子超家族6(CMTM6)、同源异形盒基因(HOXD10)在脑胶质瘤中的表达水平及其临床价值。方法选取该院2019年6月至2020年6月收治的经病理活检确诊为脑胶质瘤的50例患者为观察组,另选取同期经手术治疗的50例脑外伤患者为对照组,获取两组脑组织标本。使用免疫组织化学染色方法和实时荧光定量PCR分别测定两组脑组织中PEBP4、CMTM6、HOXD10阳性率和表达水平,采用Pearson相关分析这3项指标之间相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析3项指标单独和联合检测对脑胶质瘤的诊断价值。结果与对照组相比,观察组脑组织中PEBP4、CMTM6阳性率和表达水平升高,HOXD10阳性率和表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与肿瘤最大径<3 cm、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、高分化程度的脑胶质瘤患者脑组织比较,肿瘤最大径≥3 cm、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、中低分化程度的脑胶质瘤患者脑组织中PEBP4、CMTM6表达水平较高,而HOXD10表达水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,PEBP4表达水平与CMTM6呈正相关(r=0.358,P<0.001);PEBP4、CMTM6表达水平与HOXD10均呈负相关(r=-0.412、-0.4330,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,PEBP4、CMTM6、HOXD10联合检测诊断脑胶质瘤的曲线下面积为0.909,高于PEBP4、CMTM6、HOXD10单独检测的0.815、0.746、0.870(P<0.001)。结论在脑胶质瘤组织中PEBP4、CMTM6表达水平升高,HOXD10表达水平降低,这3项指标间有一定相关性,其联合检测诊断脑胶质瘤的价值较高。

细胞分裂周期蛋白-6、同源异型盒基因-5蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性分析

目的:探讨同源异型盒基因-5(HOXA5)、细胞分裂周期蛋白-6(CDC6)蛋白表达水平与乳腺癌患者组织学分级的关联性。方法:选取乳腺癌患者119例与癌前病变119例患者为研究对象。所有乳腺癌患者均采取手术治疗,并于术中切取病变组织,用免疫组化法测定HOXA5及CDC6阳性表达情况。统计乳腺癌组与癌前病变组、乳腺癌组不同组织分化程度患者间HOXA5及CDC6阳性表达情况。结果:与癌前病变组比较,乳腺癌组CDC6(74.79%vs 19.33%,P<0.05))和HOXA5(68.07%vs 26.05%,P<0.05)阳性表达率显著增加;不同组织分化程度乳腺癌患者间HOXA5及CDC6阳性表达率存在显著差异(P<0.05),且高分化患者CDC6阳性率(53.85%)低于中分化(79.59%)及低分化患者(93.55%),高分化患者HOXA5阳性率(51.28%)低于低分化患者(87.10%)(P<0.05)。结论:乳腺癌患者肿瘤组织中HOXA5及CDC6过表达与乳腺癌组织学分级密切相关。

CDC6及HOXA5蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及临床病理分析

目的：探讨细胞分裂周期蛋白6（CDC6）和同源盒异型基因5（HOXA5）在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学 SP 法检测51例食管鳞状细胞癌组织和27例正常食管黏膜组织中 CDC6和 HOXA5蛋白的表达情况。分析 CDC6及 HOXA5蛋白的表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系及食管鳞状细胞癌中 CDC6与 HOXA5蛋白的相关性。结果 CDC6和HOXA5在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为66.7%（34/51）、60.8%（31/51），均明显高于正常食管黏膜组织中的阳性表达率18.5%（5/27）、22.2%（6/27）。两组 CDC6及 HOXA5的阳性表达差异有统计学意义（χ^2=16.370，P =0.000；χ^2=10.528，P =0.001）；CDC6和 HOXA5蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达与患者细胞分化程度（χ^2=9.031，P =0.011；χ^2=10.064，P =0.007）和肿瘤 TNM 分期（χ^2=10.474，P =0.015；χ^2=11.667，P =0.009）有相关性，与患者的年龄（χ^2=0.000，P =1.000；χ^2=0.001， P =0.972）、性别（χ^2=0.000，P =1.000；χ^2=0.107，P =0.743）及淋巴结转移（χ^2=3.186，P =0.074；χ^2=2.212，P =0.137）无相关性；两种蛋白在食管鳞状细胞癌中表达呈正相关（r =0.454，P =0.001）。结论CDC6和 HOXA5蛋白在食管鳞状细胞癌中的高表达均明显高于食管正常组织，且与肿瘤的 TNM 分期及组织分化程度密切相关，提示 CDC6及 HOXA5的高表达与食管鳞状细胞癌的发生、发展以及增殖密切相关。