Homer1基因在人脑胶质瘤中的表达及意义

背景与目的:Homer1是一种与凋亡有关系的信号分子,其在人脑胶质瘤组织中的表达及作用尚未见报道。本研究旨在探讨Homer1在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学化方法、Westernblot和实时荧光定量RT-PCR检测Homer1蛋白在3株人脑胶质瘤细胞系(U251、U87和SHG-44)、60例人脑胶质瘤组织和5例正常人脑组织中的表达水平。结果:(1)免疫组化结果显示:SHG-44和U87细胞中Homer1a染色呈强阳性,在U251细胞中弱阳性染色,肿瘤细胞的阳性染色都呈颗粒状分布于胞核、胞浆、胞膜及突起结构。3株细胞系中Homer1b/c染色呈阴性;Homer1a蛋白在人脑胶质瘤及正常人脑组织中的阳性率及免疫反应评分(IRS)分别为61.8%、4.35±3.99和1.2%、0.09±0.35(P均<0.01);Homer1a蛋白阳性率和IRS与脑胶质瘤Ⅰ～Ⅳ级病理级别间呈"U"型关系,其中Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ级间差异非常显著(P<0.01),Ⅳ和Ⅱ、Ⅲ级间差异非常显著(P<0.01),Ⅰ和Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级间差异显著(P<0.05),良、恶性脑胶质瘤之间Homer1a蛋白阳性率差异显著(P<0.05);Homer1b/c在人脑胶质瘤标本中不表达。(2)Homer1a蛋白及其mRNA在SHG-44和U87细胞中高表达,在U251细胞中低表达。Homer1b/c蛋白及其mRNA在3株细胞系中均无表达;Homer1a蛋白表达水平与Homer1 mRNA表达水平无明显差异(P>0.05);其他结果,mRNA表达情况和蛋白表达情况一致。结论:Homer1a蛋白和mRNA在人脑胶质瘤中有表达,并与脑胶质瘤的发生和发展密切相关;Homer1b/c不参与人脑胶质瘤的发生和发展。

Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定

目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定。方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1%琼脂糖凝胶电泳分离后,将Homer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序。取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染。采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达。结果成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致。p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均<0.05),而p3×FLAG-CMV-10空载体组与空白对照组Homer1蛋白相对表达量比较P>0.05。结论本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础。