大鼠弥漫性轴索损伤后Homer1蛋白表达的研究

目的:观察大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后Homer1蛋白的表达规律。方法:将45只SD大鼠随机分为对照组及DAI组,后者按DAI后处死大鼠的时间不同分为30min、1h、3h、6h、12h、24h、72h、7d组。建立大鼠DAI动物模型,运用免疫组织化学技术及图像分析方法观察脑组织Homer1蛋白的表达。结果:损伤后30min,Homer1蛋白染色阳性细胞数增多,染色增强(P<0.05),随着损伤时间的延长,阳性细胞数及阳性表达范围逐渐扩大,于伤后24h达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降。对照组可见少量Homer1蛋白表达。结论:Homer1蛋白是大鼠DAI后的灵敏指标,在不同时间段表达具有时序性变化规律,对于早期诊断DAI及损伤时间的推断具有一定的参考价值。

Homer1蛋白与Ⅰ组代谢型谷氨酸受体在神经病理性疼痛中的作用

神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)的既往研究中关于Homer1蛋白和Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor, mGluRs)在疼痛信号转导中的作用相对明确,但它们相互之间的关系并不清楚,在突触后膜中Homer1蛋白和Ⅰ组mGluRs可以相互作用并对疼痛信号转导和疼痛维持有重要影响,Homer1蛋白可能是其中的关键靶点。Homer1b/c作为重要的突触后致密物在突触可塑性调节和突触信号传递中起重要作用。文章综述了Homer1蛋白特殊的果蝇激活蛋白/血管舒张刺激磷酸蛋白同源结构域1(enabled protein of drosophila/vasodilator-stimulated phosphoprotein homology, EVH1)和螺旋卷曲(coiled-coil, C-C)结构在脊髓突触后膜通过与不同突触后蛋白结合产生NP作用,mGluRs在神经损伤模型的潜在作用机制中与上述作用可能存在共同的作用机制。

弥漫性脑损伤大鼠的神经功能改变及Homer1a蛋白表达

目的探讨弥漫性脑损伤(DBI)大鼠的神经功能及其皮层组织Homer1a蛋白表达改变及意义。方法选择成年雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组5只、假手术组5只、DBI组35只。DBI组采用Marmarou等方法建立DBI模型,分别于伤后30 min,3、6、12、24、48、72 h断头取脑;假手术组仅切开头皮开天窗,不致伤;正常对照组不做任何处理。对三组大鼠进行后肢抓持反射试验、触须诱发前肢定位试验、侧向垫步试验,评价其神经功能;采用HE染色观察各组皮层神经元细胞形态变化,免疫组化法观察Homer1a蛋白表达情况。结果与正常对照组、假手术组比较,DBI组大鼠神经功能评分降低,但其伤后3、24 h评分出现高峰(P均<0.05)。DBI组皮层神经元细胞出现变性、坏死和凋亡改变;DBI伤后30 min,Homer1a蛋白开始表达,持续至伤后72 h,以伤后3、24 h最多(P均<0.01)。结论大鼠DBI后神经功能评分降低,损伤前后皮层Homer1a蛋白表达有显著变化,提示Homer1a蛋白参与神经元的损伤过程。

过表达Homer1a对神经元机械性损伤模型的保护作用及可能机制

目的:探讨过表达Homer1a对神经元机械性损伤模型细胞凋亡和AMP活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响。方法:分离培养大鼠大脑皮层神经元,随机分组为对照组、模型组、空载组和Homer1a过表达(Exp-Homer1a)组。构建神经元机械性损伤模型,转染Homer1a过表达载体。采用MTT法检测各组细胞活力,qPCR检测各组细胞Homer1a的mRNA表达水平,使用乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定各组细胞上清液LDH活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组Hormer1a、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AMPKα和AMPKα蛋白的表达。结果:与对照组比较,机械性损伤神经元的活力显著降低,上清液LDH活性和神经元凋亡率显著增加(P<0.05),且Homer1a mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,Exp-Homer1a组的上清液LDH活性和神经元凋亡率显著降低,神经元中cleaved caspase-3和Bax的表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2和p-AMPKα的表达水平显著升高(P<0.05)。结论:过表达Homer1a可能通过促进激活AMPKα磷酸化及抑制神经元凋亡来提高机械性损伤神经元的存活率。

大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层Homerla蛋白改变及意义

目的探讨大鼠脑血再灌注损伤后皮层组织Homer1a蛋白的表达改变及其意义。方法选择成年雄性SD大鼠59只,随机分为正常对照组、缺血再灌注损伤后10min、1h、3h、6h、12h、24h、48h及72h共9组,每组6只。免疫组化染色法和Western blot法测定Homer1a蛋白含量,T-PCR法测定Homer1aRNA表达。结果在实验过程中5只动物死亡,54只进入结果分析。与对照组比较缺血再灌注损伤后Homer1a蛋白和mRNA灰度值表达出现3个峰值,分别在10min、6h和24h,但在72h仍维持较高水平;与对照组Homer1a蛋白免疫评分相比,缺血再灌注损伤后出现两个峰值,分别在6h和24h;Homer1a蛋白除神经元外,在胶质细胞也表达。结论在缺血再灌注损伤后,Homer1a出现3个表达高峰,可能在不同的机制的影响下对脑损伤发生发展起重要作用。

颅脑损伤患者Homer1a蛋白表达及其与神经元损伤、凋亡的关系研究

目的探讨颅脑损伤患者Homer1a蛋白表达及其与神经元损伤、凋亡的关系。方法选择武汉市第一医院神经外科自2012年5月至2016年3月收治的颅脑损伤患者42例（颅脑损伤组）和同期本院门诊的健康体检者50例（正常对照组），采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测受试者外周静脉血Homer1a蛋白和神经元损伤指标（神经元特异性雌烯醇化酶（NSE）、肝型脂肪酸结合蛋白（FABP）、胰岛素样生长因子（IGF-1）、S100B蛋白1的含量，采用放射免疫法检测神经元凋亡指标[可溶性凋亡相关因子（sFas）、可溶性凋亡相关因子配体（sFasL）、细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）]的含量。结果颅脑损伤组患者血清中Homer1a蛋白的含量[（113．27±12．19）pg／mL]明显高于正常对照组[（53．93±4．06）pg／mL]，差异有统计学意义（P〈0．05）。颅脑损伤组患者血清Homer1a蛋白含量中位数为115．302pg／mL，以此为界将颅脑损伤组患者分为高Homer1a蛋白组、低Homer1a蛋白组。统计显示低Homer1a蛋白组、高Homer1a蛋白组、正常对照组血清NSE、FABP、S100B、sFas、sFasL含量依次降低，IGF-1、Bcl-2含量依次增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论颅脑损伤患者血清Homer1a蛋白表达增加，其含量高低与神经元损伤、凋亡指标有关。

急性睡眠片段化对老年大鼠认知功能及海马Homer1a表达的影响

目的:探讨急性睡眠片段化(sleep fragmentation,SF)对老年大鼠认知功能的影响及海马Homer1a和突触可塑性的关系。方法:取108只22~24月龄SPF级雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为对照组(Control组)、非睡眠片段化组(NSF组)和睡眠片段化组(SF组),每组36只大鼠。采用睡眠剥夺杆法建立睡眠片段化模型。采用Morris水迷宫实验、新物体识别实验评估大鼠学习记忆功能;采用Western blot法检测海马组织Homer1a蛋白表达水平,免疫组化染色观察CA1区Homer1a表达分布;采用Golgi染色观察海马CA1区树突棘密度,离体电生理膜片钳实验检测海马CA3-CA1场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)斜率变化。采用SPSS 22.0和GraphPad Prism 9.3软件分析数据和制图,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey-Kramer检验。结果:(1)在行为学实验中,3组大鼠穿越原平台次数、目标象限停留时间、1 h和24 h新物体识别指数均差异有统计学意义(F=13.63,11.34,21.26,16.22,均P<0.01)。SF组大鼠穿越原平台次数[(2.00±1.27)次]低于Control组[(5.67±2.16)次]和NSF组[(6.50±2.35)次](均P<0.05),SF组的目标象限停留时间[(9.02±4.84)s]短于Control组[(24.73±7.37)s]和NSF组[(27.81±8.37)s](均P<0.05)。SF组在1 h和24 h两个时间点的新物体识别指数均低于Control组和NSF组(均P<0.05)。(2)在Western blot检测中,SF组大鼠海马Homer1a蛋白表达(0.91±0.13)高于Control组(0.70±0.05)和NSF组(0.74±0.04)(均P<0.05)。(3)在免疫组化染色中,SF组大鼠海马CA1区Homer1a蛋白的光密度值高于Control组和NSF组(P<0.05)。(4)在Golgi染色中,SF组大鼠海马CA1区树突棘密度低于Control组和NSF组(P<0.05)。(5)离体电生理实验显示:SF组海马CA3-CA1区fEPSP斜率均低于Control组和NSF组(均P<0.05)。结论:老年大鼠急性SF干预会引起认知功能损害,这可能与海马Homer1a过表达从而抑制海马突触可塑性相关。

Npas4在小鼠原代神经元体外氧糖剥夺/复氧损伤中的保护作用及其可能机制

目的:探讨神经元PAS结构域蛋白4(Npas4)在小鼠原代神经元体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤中的作用及其可能机制。方法:建立小鼠原代培养的皮层神经元OGD/R损伤模型,检测OGD/R损伤后Npas4及突触后膜骨架蛋白Homer1a的mRNA和蛋白表达水平;实验分为对照组、OGD/R组、无关序列(scramble)+OGD/R组和Npas4短发夹RNA(Npas4-shRNA)+OGD/R组,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的损伤程度,采用Westernblot法检测各组细胞Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3及Homer1a的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,OGD/R损伤早期Npas4及Homer1a的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);转染Npas4-shRNA可显著逆转OGD/R引起的Npas4蛋白水平上调;与scramble+OGD/R组相比,下调Npas4进一步加重OGD/R所致神经元活力降低、LDH释放及细胞凋亡(P<0.05),且神经保护分子Homer1a的蛋白表达水平也显著降低(P<0.05)。结论:Npas4可减轻小鼠原代培养的皮层神经元OGD/R损伤,且可能是通过上调神经保护分子Homer1a的表达发挥部分保护作用。

发育期铅暴露对仔鼠海马Homer表达和学习记忆影响

目的探讨发育期慢性低浓度铅暴露对仔鼠海马Homer1b/c蛋白表达变化与学习记忆能力的关系。方法 30只孕鼠按体重随机分为3组,分别给予双蒸水(对照组)、0.05%、0.20%醋酸铅饮水(低、高剂量染铅组),断乳后仔鼠自行饮用含铅水至生后28 d,生后56 d采用跳台试验测试仔鼠学习记忆能力;Western blot法检测仔鼠生后7、14、21、28 d海马Homer1b/c蛋白表达;血铅和海马脑铅含量用原子吸收光谱法测定。结果对照组、0.05%、0.20%醋酸铅组仔鼠跳台试验逃离潜伏期分别为(25.71±4.56)、(39.67±5.18)、(64.82±9.73)s,停留潜伏期分别为(234.89±25.85)、(147.15±19.26)、(83.56±14.52)s,与对照组比较,各剂量染铅组仔鼠逃离潜伏期明显延长、停留潜伏期明显缩短(P<0.05);与对照组比较,生后7、14、21、28 d时,0.05%和0.20%醋酸铅组仔鼠海马Homer1b/c蛋白表达分别为(0.607±0.022)、(0.825±0.054)、(0.583±0.015)、(0.557±0.011)和(0.540±0.021)、(0.574±0.018)、(0.471±0.009)、(0.412±0.007)明显降低(P<0.05)。结论慢性铅暴露可降低仔鼠被动回避反应的学习和记忆能力,其机制可能与染铅所致仔鼠海马Homer1b/c蛋白表达下降有关。

氯胺酮调控睡眠节律和突触内稳态的抗抑郁效应机制

氯胺酮单次滴注有7~10天的持续抗抑郁和显著降低自杀风险效应,但其具体机制尚不明确。本文对氯胺酮持续抗抑郁效应机制进行综述,发现氯胺酮可调控睡眠节律、突触修剪分子通路以及难治性抑郁相关神经环路变化,该作用可能与其持续抗抑郁效应关联。未来的研究方向是通过小动物在体成像和影像遗传学技术,揭示氯胺酮持续抗抑郁的遗传、分子机制及影像特征,探寻最佳用药时间点,为增强其抗抑郁持续效应提供精准科学依据。