Homerla的研究进展

Homerla是一种短型Homer蛋白，为突触后密度（postsynapic density，PSD）蛋白家族成员，即早基因（immediately early gene，lEG）表达产物，神经活动可诱导其快速而短暂的增加表达。组成型表达的长Homer与Shank蛋白一起将代谢型和离子型谷氨酸受体及其他受体连接成复合体，各受体的结构和功能通过长Homer发生联系，Homerla拮抗长Homer的这种功能。因此，活性诱导的Homerla表达增加具有重要的生理意义，在信号转导、受体在细胞的定位和突触形成、功能及可塑性方面起重要作用。其中Homerla对疼痛信号传递过程的影响及其对疼痛的治疗作用日益受到重视。

MAPK特异性抑制剂SB203580对弥漫性脑创伤大鼠海马区Homerla表达及学习记忆的影响

目的探讨SK03380对弥漫性脑创伤大鼠海马区nmrmla表达及学习记忆的影响。方法 雄性Sprague-DawUey大鼠分为对照组、弥漫性脑创伤（diffuseh.ainiiy，DBI）组和DBI ＋ SB203580干预 组（腹腔注射，0.01应用电镜观察海马区神经细胞形态变化；免疫组化法检测Homerla和磷酸化P38MAPK表达水平；水迷宫测试动物学习记忆功能。结果与对照组比较，DBI组大鼠海马区神经细胞及 突触损伤明显，Hotwrla蛋白表达增加（6.2.96上12.74,1.28±0.10，P＜0.05）,磷酸化P38MAPK表达增加 （76.98± 16.64,2.28J：0.40. P＜0.05），动物潸伏期延长[（7＜1.64± 8.96） s, （2,4.96＋ 4.98） s, P＜0.05]，穿台次数 减少（4.48±U2,12.65±2.36. P＜0.05）,与DBI组比较，DBI＋SB203580组中大鼠海马K神经细胞及突触损 伤程度减轻，Homerla表达显著增加（79.82± 16.64，02.96土 12.74，P＜0.05）,磷酸化P38MAPK表达降低 （54.82±12.48,76.98±16,64, P＜0.05）,动物潜伏期缩短[（46.72±6.58）s, （74.64±8.96）s,p＜0.05]，穿越平台 次数增加（7.56±1.20,4.48：t1.12，p＜0-05）结论SB203580可促进DBI大鼠学习记忆功能恢复,其机制与 抑制P38MAPK磷酸化提高Homerla表达有关。

重型弥漫性颅脑损伤大鼠海马区Homer1a表达与神经细胞丢失的关系

目的 Homer1a是惟一在外来刺激后高表达的Homer家族蛋白。文中观察弥漫性颅脑损伤(diffuse brain injury,DBI)大鼠海马区Homer1a蛋白表达变化、凋亡神经细胞动态变化,以探讨重型DBI大鼠海马区Homer1a表达与神经细胞丢失的关系。方法按随机数字列表法将SD大鼠分为对照组(n=35)、DBI组(n=69)。Marmarou's法建立大鼠DBI模型。对照组不致伤。应用光镜和电镜下观察伤后脑组织形态变化;免疫组化及Western blot法检测海马区Homer1a表达,原位缺口末端标记法(in situ nick-end labeling,TUNEL)检测神经细胞的凋亡。结果 DBI组大鼠死亡率49.3%;其海马区神经元内细胞器、轴索及毛细血管等超微结构较对照组明显受损;伤后1 h DBI组存活神经细胞百分率较对照组显著降低[(94.4±5.6)%vs(99.4±0.6)%,P<0.05],伤后72 h降低最为显著[(54.7±33.8)%vs(99.2±0.8)%,P<0.05];Homer1a伤后1 h表达显著增高(0.136±0.024),6 h出现峰值(0.178±0.028),高表达状态持续至24 h(0.176±0.027)、48 h(0.145±0.02)和72h(0.117±0.012)表达下降,各时间点与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL阳性细胞凋亡指数,72h较对照组明显升高[(41.78±3.96)%vs(1.92±0.22)%,P<0.05]。相关分析显示1~24h Homer1a蛋白表达与存活神经细胞百分率呈负相关(r=-0.726,P<0.05),与TUNEL阳性细胞数量呈正相关(r=0.738,P<0.05);24~72 h Homer1a蛋白表达与TUNEL阳性细胞数量呈负相关(r=-0.898,P<0.05),与存活神经细胞百分率呈正相关(r=0.842,P<0.05)。结论重型DBI后海马区Homer1a蛋白动态表达可反映神经细胞丢失。

弥漫性脑创伤大鼠海马区Homer1a表达与p38MAPK激活的关系

目的探讨弥漫性脑创伤(DBI)大鼠海马区Homer1a表达与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的关系。方法将雄性SD大鼠149只分为对照组、轻度DBI组、重度DBI组。参照Marmarou′s法制作大鼠DBI模型。应用光镜和电镜观察脑组织形态变化;免疫组化及Western blot法检测海马区Homer1a和磷酸化p38MAPK表达。结果重度DBI组大鼠死亡率(49.3%)明显高于轻度DBI组(22.2%)(P<0.05)。电镜下,重度DBI组中神经元内细胞器、轴索及毛细血管等超微结构的损伤程度明显高于轻度DBI组。与对照组比较,2组DBI组1、6、24、48、72 h Homer1a和磷酸化p38MAPK表达均增高(P<0.05),轻度DBI组中Homer1a和磷酸化p38MAPK 24 h达高峰,48 h和72 h下降,但仍明显高于对照组(P<0.05);重度DBI组中Homer1a表达在6 h出现峰值,高表达持续至24 h;磷酸化p38MAPK 24 h达高峰。重度DBI组中1 h、6 h和24 h Homer1a表达高于轻度DBI组,48 h和72 h低于轻度DBI组(P<0.05);各时间点磷酸化p38MAPK表达均高于轻度DBI组(P<0.05)。相关分析显示轻度DBI组Homer1a与磷酸化p38MAPK表达相关(r=0.942,P<0.05);重度DBI组Homer1a与磷酸化p38MAPK表达相关(r=0.896,P<0.05)。结论 DBI大鼠海马区Homer1a表达与p38MAPK激活有关。

SB203580对弥漫性脑创伤大鼠海马区Homer1a表达和神经细胞凋亡的影响及其作用机制

目的:探讨SB203580对弥漫性脑创伤(DBI)大鼠海马区Homer1a表达和神经细胞凋亡的影响,阐明DBI后p38MAPK和Homer1a作用机制及SB203580的脑保护作用。方法:96只雄性Sprague-Dawlley大鼠分为对照组(n=24,大鼠只进行乙醚麻醉而不致伤)、DBI组(n=40,Marmarou’s法建立大鼠DBI模型)和SB203580组(n=32,腹腔注射SB203580,0.01μg·kg-1)。采用电镜检测大鼠海马区神经细胞形态变化;采用免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区磷酸化p38MAPK和Homer1a阳性细胞率;采用TUNEL法检测各组大鼠海马区神经细胞凋亡指数(AI)。结果:与对照组比较,DBI组大鼠各时间点(伤后6、24、48和72h)磷酸化p38MAPK和Homer1a阳性细胞率增高(P<0.05),神经细胞AI升高(P<0.05),其中磷酸化p38MAPK和Homer1a阳性细胞率24h达高峰,神经细胞AI 72h达高峰;与DBI组比较,SB203580组大鼠各时间点磷酸化p38MAPK阳性细胞率下降(P<0.05),Homer1a阳性细胞率显著增加(P<0.05),神经细胞AI降低(P<0.05)。结论:SB203580可降低DBI大鼠海马区神经细胞凋亡,其机制与抑制p38MAPK激活、提高Homer1a表达有关。

丙戊酸钠对癫痫大鼠海马组织中Homer1a、mGluR5表达的影响

【目的】探讨在戊四氮(pentetrazole,PTZ)致癫痫大鼠海马组织中Homer1a、mGluR5的表达以及丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对其表达的影响。【方法】将SD大鼠分为正常对照组(NC)、PTZ组和VPA干预组。PTZ腹腔注射达到点燃标准,腹腔注入VPA 15mg/(kg·d),对致痫大鼠进行治疗;30min后,腹腔注射PTZ诱发癫痫发作;两周后分别于致痫大鼠发作后8h、24h处死大鼠;应用实时定量PCR(realtime-PCR)、Western blot技术检测海马组织Homer1a、mGluR5的表达。【结果】1)NC组无癫痫发作,VPA干预组癫痫发作较PTZ组减轻;2)PTZ组Hmoer1a于癫痫发作后8h明显升高,24h后则明显降低;VPA干预组Homer1a表达于癫痫发作后8h及24h均升高;3)PTZ组mGluR5表达于癫痫发作后8h无显著变化,而24h后明显升高;VPA干预组mGluR5表达于癫痫发作后8h无显著变化,24h后明显降低。【结论】1)丙戊酸钠可明显改善致痫大鼠发作表现;2)Homer1a在癫痫发作后早期短暂性升高;mGluR5在癫痫发作后早期无明显变化,而发作后24h升高;3)丙戊酸钠可能通过调节Homer1a表达进一步影响mGluR5而发挥抗痫作用。

两种不同mGluR5抑制剂对创伤后Homer1a蛋白表达水平影响的研究

目的:研究代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的激动剂依赖性活性和激动剂非依赖性对创伤性脑损伤后Homer1a蛋白表达水平的影响。方法:离体培养神经元2 w,采用mGluR5抑制剂2-甲基-6-苯基乙炔基嘧啶(MPEP)和α-甲基-4-羧苯基甘氨酸(MCPG)两种不同剂量预处理神经元细胞1 h,神经元机械性损伤模型划伤细胞;利用立体定向仪固定大鼠,在大鼠脑皮层注射两种不同剂量的抑制剂,1 h后采用自由落体损伤模型造成大鼠颅脑损伤。通过Western blot分别检测离体和在体Homer1a蛋白表达水平的变化。结果:两种不同剂量MPEP预处理后,大鼠脑皮层和离体培养的神经元细胞中Homer1a蛋白表达水平表达明显减少,具有统计学差异(P<0.05);而两种不同剂量的MCPG预处理后,Homer1a蛋白表达水平的改变不明显。结论:颅脑损伤后内源性Homer1a的产生是与代谢型谷氨酸受体激动剂非依赖性活性密切相关。

颅脑损伤患者Homer1a蛋白表达及其与神经元损伤、凋亡的关系研究

目的探讨颅脑损伤患者Homer1a蛋白表达及其与神经元损伤、凋亡的关系。方法选择武汉市第一医院神经外科自2012年5月至2016年3月收治的颅脑损伤患者42例（颅脑损伤组）和同期本院门诊的健康体检者50例（正常对照组），采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测受试者外周静脉血Homer1a蛋白和神经元损伤指标（神经元特异性雌烯醇化酶（NSE）、肝型脂肪酸结合蛋白（FABP）、胰岛素样生长因子（IGF-1）、S100B蛋白1的含量，采用放射免疫法检测神经元凋亡指标[可溶性凋亡相关因子（sFas）、可溶性凋亡相关因子配体（sFasL）、细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）]的含量。结果颅脑损伤组患者血清中Homer1a蛋白的含量[（113．27±12．19）pg／mL]明显高于正常对照组[（53．93±4．06）pg／mL]，差异有统计学意义（P〈0．05）。颅脑损伤组患者血清Homer1a蛋白含量中位数为115．302pg／mL，以此为界将颅脑损伤组患者分为高Homer1a蛋白组、低Homer1a蛋白组。统计显示低Homer1a蛋白组、高Homer1a蛋白组、正常对照组血清NSE、FABP、S100B、sFas、sFasL含量依次降低，IGF-1、Bcl-2含量依次增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论颅脑损伤患者血清Homer1a蛋白表达增加，其含量高低与神经元损伤、凋亡指标有关。