EFFECT OF WARM ISCHEMIC INJURY ON MORPHOLOGY AND VIABILITY OF AORTIC VALVES IN RATS

Warm ischemia is one of the most important causes of valvular damage from death of donor to its valve harvesting. This study aimed at using qualitative and quantitative methods to characterize warm ischemic injury through models of SD rat's aortic valves and design to show the relationship among ultrastructural, biological and biochemical changes concerning with the length of warm ischemia time (WIT). 102 harvested SD rat's aortic valves were divided into 6 groups of different ischemic time for this study. 432 photomicrographs of transmission electron microscopy (TEM) were put into computer for analysis. The volume ratio of nucleus to plasma in cells (Vnp) and the ratio of extramembrane area to volume of mitochondria (S / V) were used to characterize the degree of valvular cell injuries. Valvular cells culture and biochemical metabolism including glucose degredation and H-3-TdR absorption rate were adopted. The valvular cells depicted a significant decrease and H-3-TdR taking-up also being inhibited under the influence of prolonged WIT.

再次液氮冷冻保存对猪主动脉瓣膜细胞活性及组织结构的影响

目的 了解再次冷冻保存对主动脉瓣膜细胞活性及组织结构的影响 ,探讨液氮冷冻保存的主动脉瓣解冻后再次冷冻保存使用的可行性。 方法 将猪主动脉瓣叶在抗菌处理后按随机数字表法分成三组 ,每组 6个瓣叶 ,组 作对照 ,组 、组 控制降温速率降至 - 80℃后在液氮中保存 ,1个月后融化解冻。组 解冻并在室温下放置 15分钟后更换保存液 ,再次降温至 - 80℃后放入液氮中保存 ,2个月后再融化解冻。采用 XTT比色法测定各组瓣膜细胞活性 ,用免疫荧光组织化学染色、光学显微镜、透射电子显微镜行组织学检测。 结果 组 冷冻保存后瓣膜细胞活性下降到组 的 6 3.97% ,组织结构一定程度受损 ;组 瓣膜细胞活性下降至组 的 38.6 0 % ,组织结构损害也进一步加重。 结论 液氮冷冻保存的猪主动脉瓣一经解冻融化 ,不宜再次冷冻保存使用。

大剂量^(60)Co γ照射加深低温保存对大鼠同种带瓣主动脉活性的影响

目的 研究大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活性与60 Coγ照射剂量之间的关系。方法 分别采用 30 0、6 0 0、90 0和 12 0 0Gy四种剂量对大鼠同种带瓣主动脉进行照射及在液氮中深低温保存三个月 ,观察不同剂量照射后同种带瓣主动脉的病理变化和内皮细胞活性。结果 大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活动度与照射剂量有关。在接受 30 0和6 0 0Gy照射时内皮细胞活动度分别为 (85 .6 7± 2 .5 8) %和 (83.5 5± 2 .75 ) % ,但它们与对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;在接受 90 0和 12 0 0Gy照射时内皮细胞活动度分别为 (72 .2 9± 1.96 ) %和 (32 .5 7± 3.4 8) % ,它们与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活动度与60 Coγ照射剂量有关 ,6 0 0Gy可作为参考剂量用于降低同种带瓣主动脉免疫原性的研究。

液氮超低温保存同种带瓣动脉活性实验研究

目的 探讨活细胞同种瓣的保存方法和应用 ,观察同种带瓣动脉的消毒和冷冻保存对动脉瓣膜活性的影响。方法 应用抗生素消毒、液氮超低温保存同种带瓣动脉 36个。采用O′Brien氏抗菌素灭菌法 ,速率降温后转入液氮液相中长期保存。解冻后进行细菌学检查、形态学检查 ,冷冻前、解冻后 ,均取部分二尖瓣和主动脉壁分别做糖代谢测定。其中 2个主动脉瓣和 1个肺动脉瓣分别于灭菌前 ,结冻后取样做电镜检查。结果 光镜检查 :灭菌后瓣叶及动脉壁组织大体结构 ,细胞形态无明显变化。带瓣动脉解冻后瓣叶组织细胞核清晰 ,弹性纤维结构完整 ,有轻度灶性粘变性和少数内皮细胞脱落 ,主动脉壁结构大致正常。电镜检查 :灭菌后及解冻后组织大多数细胞核清晰 ,核膜完整 ,染色质分布正常 ,线粒体和内质网轻度肿胀 ,线粒体嵴规则 ,偶见变性或坏死的细胞。糖代谢测定 :灭菌后动脉壁和二尖瓣组织葡萄糖消耗率平均为 54～56mg/dl/ 2 4h ;解冻后动脉壁、二尖瓣和主动脉瓣组织葡萄糖消耗率平均为 51～ 71mg/dl/ 2 4h。结论 抗生素消毒液氮超低温保存同种带瓣动脉获得了组织良好的活性 ,有自然结构 ,最佳血流动力学 ,无支架结构 。

不同复温方法对液氮保存人同种瓣活性影响的实验研究

寻找一种能最大程度保持液氮贮存人同种主动脉瓣活性的复温方法。方法同种主动脉瓣（ｎ＝３６）随机分为６组，Ⅰ组为新鲜同种主动脉瓣，Ⅱ～Ⅵ组经液氮保存３月后，分别采用①４２℃水浴复温（Ⅱ组），②（１．０±０．２）℃／ｍｉｎ（Ⅲ组），③（４．０±０．５）℃／ｍｉｎ（Ⅳ组），④（１０．０±２．０）℃／ｍｉｎ（Ⅴ组）；⑤（３０．０±４．５）℃／ｍｉｎ（Ⅵ组）。将同种主动脉瓣复温至４℃，对所有同种主动脉瓣进行台盼蓝染色活细胞计数、２４小时葡萄糖代谢率测定，氰化胸腺嘧啶脱氧核甙（３Ｈ－ＴｄＲ）参入、瓣膜组织培养。结果上述指标Ⅰ组显著优于其余各组（Ｐ＜０．０５），Ⅳ组优于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组（Ｐ＜０．０５）。组织培养Ⅰ组细胞生长优于其余各组，且早于各组３～４天。结论不同复温方法对同种主动脉瓣活性影响不同，以４℃／ｍｉｎ匀速复温法对同种主动脉瓣活性影响最轻。