人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的 :研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法 :抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白 ,双向凝胶电泳 (2 DE)分离、银染显色 ,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的 2 DE图像 ;根据获得的 2 DE凝胶图像 ,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点 ,用胰蛋白酶原位水解 ,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹 (PMF) ,通过PepIdent软件搜索SWISS PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果 :建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法 ,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的 10个点相应的蛋白质。结论 :本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的 2 DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料 ,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。

上调miR-34c-5p对鼻咽癌细胞HONE-1增殖和侵袭的影响

目的探讨上调mi R-34c-5p对鼻咽癌细胞HONE-1增殖和转移能力的影响。方法利用定量PCR分析mi R-34c-5p在鼻咽癌细胞株HONE-1和正常鼻咽细胞株NP69中的表达情况;利用克隆形成实验和Transwell实验分析上调mi R-34c-5p表达对mi R-34c-5p mimic转染组、mi R-34c-5p对照序列组和未处理组增殖和侵袭能力的影响。结果 mi R-34c-5p在鼻咽癌细胞株HONE-1的表达水平低于正常鼻咽细胞株NP69;mi R-34c-5p mimic转染组鼻咽癌细胞HONE-1的克隆形成和侵袭能力明显低于mi R-34c-5p对照序列组和未处理组(均P<0.05)。结论 mi R-34c-5p的下调与鼻咽癌的生物学功能增殖和侵袭能力相关,是鼻咽癌治疗的潜在靶点。

基于Met/PI3K/Akt信号通路研究五味子甲素对人鼻咽癌细胞HONE-1增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究五味子甲素对人鼻咽癌细胞HONE-1增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法:以HONE-1细胞为研究模型,使用不同浓度[0(空白对照)、10、20、40μmol/L]的五味子甲素处理后,分别采用CCK-8试验、划痕试验和Transwell小室试验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力变化;通过计算机分子对接分析五味子甲素与酪氨酸蛋白激酶(Met)蛋白的结合能力;采用Western blotting法检测细胞中磷酸化酪氨酸蛋白激酶(p-Met)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的相对表达量。结果:与空白对照比较,10、20、40μmol/L五味子甲素处理后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著减弱(P<0.05);分子对接结果显示,五味子甲素能与Met蛋白的活性口袋稳定结合;Western blotting试验结果显示,与空白对照比较,10、20、40μmol/L五味子甲素处理后细胞中p-Met、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2和N-cadherin蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论:五味子甲素可通过抑制Met/PI3K/Akt信号通路的活化来抑制HONE-1细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-516b-5p靶向ATM调控鼻咽癌细胞HONE1 DNA修复的机制研究

目的探讨鼻咽癌细胞HONE1中抑制DNA修复的潜在机制。方法使用ETP处理鼻咽癌细胞HONE1造成DNA损伤后,通过高通量测序检测鼻咽癌细胞HONE1中miRNA的表达谱。过表达差异miRNA后,通过基于I-PpoI的可诱导DSB系统检测DNA双链断裂处(DNA double-strand breaks,DSB)的DNA-PKcs含量。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过荧光素酶报告系统检测miRNA靶向mRNA。结果ETP处理后hsa-miR-9983-3p、hsa-miR-4731-5p、hsa-miR-3675-5p、hsa-miR-516b-5p、hsa-miR-4437、hsa-miR-7114-5p、hsa-miR-637、hsa-miR-5008-5p的表达水平上升至少8倍。miR-516b-5p mimics导致DSB的DNA-PKcs含量减少(P<0.05),而miR-516b-5p inhibitor导致DSB的DNA-PKcs含量增加(P<0.05)。在鼻咽癌细胞HONE1中过表达miR-516b-5p后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平下降,DNA-PKcs的磷酸化水平下降;而抑制miR-516b-5p表达后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平上升,DNA-PKcs的磷酸化水平上升。同时,miR-516b-5p靶向ATM的3端非编码区。过表达ATM后,DSB的DNA-PKcs含量上升(P<0.05),而敲低ATM后,DSB的DNA-PKcs含量下降(P<0.05)。结论miR-516b-5p通过靶向ATM mRNA的3端非编码区,降解了ATM mRNA,抑制了ATM的翻译,随后DNA-PKcs的磷酸化水平下降,DNA-PKcs与DSB的结合减少,最终抑制了鼻咽癌细胞HONE1的DNA修复。

Brutal Honesty

In reality,it is easier and better to be honest.One of my favourite,and least favourite characteristics of my Chinese friends is that they are extremely honest.In the West,we spend a lot of time being extremely care-ful what we say to each other,and we also like to make sure that we are always

海带多糖和茶多酚对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖的影响

目的:观察海带多糖(LJP)和茶多酚(TP)单独及联合应用对鼻咽癌(NPC)细胞HONE1和CNE2增殖的影响,了解LJP对体内移植瘤的抑制作用,探讨其抗癌机制。方法:以NPC细胞HONE1和CNE2为研究对象,绘制两者生长曲线,计算倍增时间确定对数生长期细胞,采用MTT检测LJP和TP单独及联合应用对两组细胞的增殖抑制率,运用Annexin V加PI双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响;以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验。结果:LJP和TP均对两组细胞有增殖抑制作用,LJP和TP联合应用对两组实验细胞抑制作用均高于两者单独应用的效果,且这种作用呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用,凋亡率随着LJP浓度的增加而增高,320mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)%(P<0.01)。体内实验中,25.0mg/kg LJP组、50.0mg/kg LJP组的抑瘤率分别为33.7%(P<0.05)和47.0%(P<0.01),具有明显抑制移植瘤的作用,而12.5mg/kg LJP组的抑瘤率仅为16.4%(P>0.05)。结论:LJP和TP对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖均有抑制作用,两者联合应用更具有显著效果,LJP作用机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的。

冬凌草甲素影响细胞外排功能增加HONE1细胞对米托蒽醌的敏感性

目的观察非毒性剂量冬凌草甲素是否增加鼻咽癌细胞株HONE1对米托蒽醌的敏感性。方法采用MTT法使用不同浓度的冬凌草甲素处理HONE1细胞株,确定冬凌草甲素的非毒剂量区间;然后用非毒性剂量冬凌草处理细胞后用流式细胞术进行侧群表型检测,探索能显著降低侧群表型的冬凌草甲素浓度;参考冬凌草甲素非毒性剂量和能降低侧群表型的剂量得到冬凌草甲素用于联用米托蒽醌的浓度。结果 5μmol/L冬凌草甲素并未对HONE1细胞产生明显毒性,该浓度处理细胞24 h后,细胞侧群比例由3.32%降低至0.55%;米托蒽醌联用5μmol/L冬凌草甲素组HONE1细胞存活率较单用米托蒽醌组低(P<0.05);流式细胞术分析显示膜外排蛋白ABCG2含量降低。结论冬凌草甲素可以通过影响细胞ABCG2外排功能增加鼻咽癌细胞株HONE1对米托蒽醌的敏感性。

基于电子齿轮箱的内啮合强力珩齿同步误差补偿方法研究

电子齿轮箱作为一种特殊的多轴联动控制技术,是齿轮展成加工机床数控系统中的控制核心,其同步控制精度决定齿轮加工精度。内啮合强力珩齿作为一种重要的齿轮精密加工工艺,其展成加工精度很大程度上由电子齿轮箱的控制精度决定。文章结合强力珩齿加工的运动学模型,建立了内啮合强力珩齿的电子齿轮箱模型,将强力珩齿加工各运动轴跟踪误差的相对差值定义为同步误差,并将其映射到齿距偏差、齿廓偏差和螺旋线偏差上;提出一种基于电子齿轮箱的同步误差补偿控制方法,建立了同步补偿控制模型;在dSPACE半实物多轴运动仿真平台上,进行内啮合强力珩齿加工的运动控制实验。实验结果表明:所提出的基于电子齿轮箱的同步误差补偿方法可以有效降低内啮合强力珩齿的同步误差。

船用柴油机气缸套内孔平台网纹珩磨加工工艺

针对某船用柴油机气缸套内孔平台网纹珩磨加工工艺,对气缸套加工时的网纹形成机理进行分析,制定平台网纹珩磨工艺路线,并确定相应的珩磨工艺参数和加工设备,以保证平台网纹达到要求。柴油机试车结果证明采用该平台网纹珩磨加工工艺可满足缸套网纹加工高精度要求。

内啮合强力珩齿工件齿面珩削纹理预测与控制方法研究

以内啮合强力珩齿工艺为对象,研究工件齿面珩削纹理的形成机制,并对珩削纹理进行预测,提出一种珩削纹理的主动控制方法。建立工件齿面接触线模型,模拟珩齿加工过程;研究珩磨轮修整工艺原理,得到珩削速度与加工纹理的映射关系。由于珩削速度受制于工件齿轮与珩磨轮的中心距和轴交角等参数,提出以轴交角和中心距为控制对象,对珩削工件齿面纹理的分布情况及纹理变化趋势进行控制的方法;采用不同工艺参数进行齿轮加工,并对齿面进行三维形貌检测。被加工齿轮齿面检测结果与预测模型高度吻合,表明采用该方法可以实现对珩齿加工纹理的控制。

数控内齿珩轮强力珩齿珩削力的预测

文章建立了内齿珩轮强力珩齿珩削力的预测模型。首先推导珩齿加工啮合过程中接触线和切削厚度数学模型,并基于此模型将珩磨轮的磨削刃离散为微元磨削刃;然后由平面磨削模型构建珩磨轮的微元磨削刃模型,建立珩齿珩削力预测模型,并分析珩削力随工艺参数的变化规律;最后结合Fassler HMX-400数控内齿珩轮强力珩齿机及其内置的Kistler力传感器进行珩齿珩削力测量实验。实验结果表明,预测的珩削力的数值和变化趋势与实验测量结果相符,该珩削力预测方法有效。

立方氮化硼磨具磨削技术的试验研究

讨论珩磨的特点和珩磨油石的作用,通过采用立方氮化硼(Cubic Boron Nitride,CBN)珩磨条在TJ376Q发动机连杆大头孔珩磨中的试验,验证国内珩磨条的可应用性。结果表明,立方氮化硼磨料具有良好的磨削特性,可用于难加工材料、高效磨削以及精密磨削等领域。

基于滑模内模控制的珩磨恒速进给系统控制研究

针对传统PI控制策略下电机驱动珩磨恒速进给系统波动大、精度低的问题,提出一种新型的控制方法——滑模内模控制。基于进给系统结构,将对油石的恒速进给控制转换为对电机的恒转速控制,并对其系统进行仿真建模与实验验证。结果表明,基于滑模内模的控制方法比基于传统PI的控制方法响应速度快,转速波动和误差均较小,且没有超调量。传统PI控制策略下的转速和误差响应随着反向负载的增大变得不稳定,需要较长时间才能恢复,因此选用滑模内模控制策略更能满足珩磨恒速进给控制系统的要求。

16Cr3NiWMoVNbE航空齿轮弹振珩磨光整表面完整性试验研究

采用弹振珩磨光整工艺对16Cr3NiWMoVNbE渗碳航空直齿轮进行光整加工,研究了不同珩磨周期和未光整齿轮的齿廓几何特征、齿面形貌、横截面微观组织与显微硬度、残余应力等表面完整性特征参数。结果表明,与未光整齿轮相比,弹振珩磨能改善齿廓倒棱圆滑度,降低表面粗糙度并提高表面残余压应力;其指标改善程度随珩磨周期延长而增大。在2倍珩磨周期条件下,实现了齿顶倒棱圆弧过渡,获得了表面短且交叉的细网状条纹,面粗糙度从0.47μm降到0.20μm,齿面平均残余压应力提高了52%。试验研究为弹振珩磨光整工艺在难加工航空齿轮中的应用提供了参考。

基于电子齿轮箱的内齿珩轮强力珩齿轮廓误差补偿控制研究

多轴控制系统的轮廓误差具有强耦合特点,由于是多轴联动产生的结果,仅提高单轴的跟踪精度不一定能降低轮廓误差。为降低珩齿多轴控制系统的齿面轮廓误差,进一步提高珩齿的加工精度,文章提出一种简单有效的补偿控制策略。分析珩齿机的机床结构,根据珩齿多轴电子齿轮箱(electronic gearbox,EGB)控制系统的数学模型推导出基于齿轮啮合原理和坐标变换的齿面轮廓误差数学模型,并设计出一种简单的齿面轮廓误差补偿控制器。仿真和实验结果表明,所提出的补偿控制策略对降低齿面轮廓误差有显著的效果。该文方法对提高珩齿实际加工精度具有一定的指导意义。

缸套珩磨网纹模拟及流动特性分析

目的研究缸套珩磨网纹表面计算机模拟方法,对比缸套网纹表面确定性分析流量因子与Patir&Cheng高斯分布流量因子差异。方法采用快速傅里叶变换技术(FFT)及坐标变换,对高斯分布平台表面及具有任意方向的各向异性沟槽表面进行了计算机模拟,并叠加合成满足要求R_(pq)、R_(vq)及珩磨角度参数的双高斯缸套珩磨网纹表面。通过表面概率支承率曲线分析,验证该方法的精度。在此基础上,进行给定边界条件下网纹表面的流动分析,对比确定性分析流量因子与Patir&Cheng高斯分布流量因子差异。结果调整表面高度标准差、珩磨角度及自相关长度,可实现不同参数珩磨网纹的建模,生成的珩磨网纹表面参数与给定输入参数偏差较小。相比Patir&Cheng高斯分布流量因子,珩磨网纹确定性分析压力流量因子能更好地反映珩磨角度对不同方向流量的影响。同时,珩磨网纹沟槽对小间隙下剪切流量的影响更加明显。结论网纹表面的确定性分析流量因子与Patir&Cheng高斯分布流量因子存在较大差异,缸套网纹表面建模及流动特性分析可更好地反映表面粗糙度对表面润滑性能的影响,为进一步开展缸套-活塞环多尺度摩擦学分析及珩磨网纹参数优化奠定了基础。

珩磨缸套与活塞环表面弹塑性接触分析

缸套-活塞环表面接触分析,能够对船用发动机设计决策提供重要支持.由于缸套珩磨网纹表面具有双高斯分布特征,基于高斯分布假设建立的统计接触力学模型无法反映缸套-活塞环表面的真实接触状态.本文中基于边界元理论,采用快速傅里叶变换和共轭梯度法,开发了粗糙接触弹塑性接触数值仿真分析方法,并对缸套珩磨网纹表面与活塞环接触状态进行了仿真计算,获得了表面真实接触压力、接触面积、弹塑性变形和应力等接触特性参数,研究了不同载荷作用下珩磨网纹表面接触演变规律,为活塞环缸套摩擦学设计奠定了基础.

齿轮齿廓抛光方法研究进展

齿轮是现代机械传动系统中运用最为广泛的传动件,齿轮齿廓的精度和表面质量对齿轮传动的精度、平稳性、可靠性和噪声影响巨大。齿轮的加工过程通常要经历初切齿—热处理—初磨—精磨等工艺过程,然而,经磨削加工后齿廓仍然存在磨削横纹、表面粗糙度难以进一步降低、表面粗糙度沿齿廓分布不均匀等问题。目前,齿轮经磨削后进行齿廓抛光是解决上述问题的有效途径之一。为此,将现有主要齿轮齿廓抛光方法归纳为齿廓电化学机械抛光、齿廓磨料流抛光、齿廓磁流变抛光以及齿廓剪切增稠抛光等4大类。详细阐述了当前主要齿轮齿廓抛光方法的加工原理;列举了各种加工方法的加工实例;从加工的适应范围、加工效率、抛光后的齿廓表面粗糙度的改善率以及对加工设备的要求等方面归纳了各个加工方法的技术优势和存在的问题。结果表明,使用其他辅助能场(如超声、激光、磁场等)与传统抛光方法复合以实现高效、高精度、高表面一致性齿廓抛光将是未来的主要研究方向。

基于PI3K/AKT通路介导EMT程序启动探讨补肾活血汤对乳腺癌的骨转移影响

目的探讨补肾活血汤对裸鼠乳腺癌的骨转移影响及机制研究。方法建立裸鼠乳腺癌模型,分空白组、模型组、补肾活血汤组、LY294002(PI3K抑制剂)组、联合组(补肾活血汤+LY294002组)。给药期间记录裸鼠体质量变化,药物干预后处死动物,取裸鼠乳腺肿瘤和骨组织,X线、CT影像学观察裸鼠骨质影响;苏木素-伊红(HE)观察裸鼠乳腺癌和肿瘤骨转移情况;免疫组化、蛋白免疫印迹法(western blot)检测骨组织破骨细胞活化因子T转录因子(nuclear factor-active T cell NFATC1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙蛋白(N-cadherin)、锌指E盒结合蛋白1(zinc finger E-box binding Protein 1)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组活动少,精神状态差,体质量降低(P<0.05),骨质破坏明显,骨转移率87%,E-cadherin蛋白表达下调,NFATC1、N-cadherin、ZEB1、PI3K/AKT等蛋白表达提高;与模型组相比,补肾活血汤组、联合组裸鼠精神可、体质量增加(P<0.05),LY294002组体质量与模型组相比未见明显增重(P>0.05);各实验组骨破坏均减少,其中补肾活血汤组抑制NFATC1活化,与模型组相比,能减少24%骨转移;western blot结果提示LY294002和补肾活血汤提高E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin、ZEB1、PI3K/AKT等蛋白表达(P<0.05),其作用在联合组表现更为显著(P<0.01)。结论补肾活血汤对乳腺癌裸鼠有骨保护且预防骨转移作用;补肾活血汤预防副转移作用可能减弱PI3K/AKT的活化蛋白表达相关。

珩磨双金属曲轴孔同轴度超差的分析及处理

发动机曲轴在高速旋转过程中,会对曲轴孔产生较大的交变冲击载荷,并对连杆输出扭力,因此缸体曲轴孔的加工工艺要求极高;曲轴孔作为发动机缸体上的关键部位,珩磨后若产生位置等因素超差,必然会影响曲轴的安装精度、发动机性能和相关零部件的寿命;该文利用实际加工经验,分析了珩磨后曲轴孔同轴度超差的若干原因,提出解决方案,并进行有效性验证,该方案解决办法为珩磨异常问题的解决思路提供参考。