基于HPLC-Q-Exactive MS和网络药理学探讨红花清肝十三味丸治疗非酒精性脂肪肝的药效物质基础及作用机制

目的利用高分辨液相色谱-质谱联用仪,快速准确地对红花清肝十三味丸中复杂的化学成分进行分析鉴定,旨在明确其缓解非酒精性脂肪肝的有效成分,同时结合网络药理学和分子对接,探索红花清肝十三味丸潜在的作用机制。方法使用甲醇和含有0.1%甲酸的水溶液作为流动相,进行梯度洗脱;采用正负离子交替扫描模式切换扫描,扫描范围m/z 110~1200;通过与对照品、参考文献与自建数据库比对后对复方中化合物进行识别鉴定;基于液质联用数据,通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库进一步筛选活性化合物,并利用SwissTargetPrediction、GeneCards等在线数据库预测分析红花清肝十三味丸在治疗非酒精性脂肪肝可能的靶点并进行KEGG与GO的富集分析;利用蛋白质-蛋白质相互作用网络筛选核心靶点;最后运用分子对接技术验证活性化合物与靶点的潜在结合活力。结果从红花清肝十三味丸中共鉴定出75个化合物,其中黄酮类化合物31个,有机酸类化合物17个,鞣质类化合物9个,环烯醚萜类化合物8个,木质素类化合物3个及其他类化合物7个。利用网络药理学方法筛选出核心靶点5个:丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2/酪氨酸激酶受体2(HER2/ERBB2)、磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1(PI3KR1)及非受体酪氨酸激酶Src。KEGG富集通路主要为:PI3K-AKT信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂抵抗通路、ERBB信号通路。结论对红花清肝十三味的复杂化学成分进行了快速准确地分析鉴定,同时探讨其治疗非酒精性脂肪肝的可能作用机制,为红花清肝的质量控制及后续研究提供科学参考。

红花清肝十三味丸质量标准研究

目的建立红花清肝十三味丸的质量标准。方法采用薄层色谱法对红花、丁香、木香、诃子、栀子、紫檀香、人工牛黄进行定性鉴别,并采用HPLC法测定栀子中栀子苷、红花中羟基红花黄色素A、丁香中丁香酚。结果薄层色谱斑点清晰;栀子苷在0.106 5～2.236 5μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000 0),平均回收率为97.24%,RSD为1.2%;羟基红花黄色素A在0.064 66～0.775 89μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为96.75%,RSD为2.0%;丁香酚在0.227 8～4.783 8μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000 0),平均回收率为98.56%,RSD为1.8%。结论该方法简便易行,重复性好,可用于红花清肝十三味丸的质量控制。

揿针埋针联合红花清肝十三味丸治疗早期麦粒肿患者的临床疗效

目的探索揿针埋针联合红花清肝十三味丸治疗早期麦粒肿患者的临床疗效。方法选取2017年7月至2019年6月本院收治的126例早期麦粒肿患者作为研究对象,采用区组随机化法分为参照组和实验组,各63例。参照组接受常规抗感染治疗,实验组在参照组基础上并行揿针埋针联合红花清肝十三味丸治疗,比较两组治疗前后主观症状积分、首发非接触泪膜破裂时间(nonin-vasivefirstbreak-uptime,NIKF-BUT)、平均泪膜破裂时间(noninvasive averagebreak-uptime,NIKav-BUT)及临床疗效。结果治疗7、14 d后,两组主观症状积分均下降,且实验组低于参照组(P<0.05);两组NIKF-BUT和NIKav-BUT水平均延长,且实验组长于参照组(P<0.05);实验组治疗总有效率为96.83%,显著高于参照组的80.95%(P<0.05)。结论揿针埋针联合红花清肝十三味丸治疗早期麦粒肿效果显著,能有效改善患者临床症状,消除肿痛,延长泪膜破裂时间。

HPLC法测定蒙药红花清肝十三味丸(HHQG)的胆红素含量

目的:HPLC法测定蒙药红花清肝十三味丸(HHQG)的胆红素含量。方法:色谱柱C18(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相甲醇-乙腈-1%冰乙酸(88∶10∶2);流速1 mL·min^-1;测定波长453 nm。结果:胆红素0.0118~0.472μg成线性关系(r=0.999);胆红素平均质量分数0.104 mg·g^-1。结论:本法测定胆红素的含量,操作简便,准确可靠,可用于药品的质量控制。

基于数据挖掘的蒙药红花清肝十三味丸文献计量分析

目的:了解蒙药红花清肝十三味丸的研究现状及趋势,为后续研究提供思路和数据。方法:以CNKI、维普、万方、CBM、Pubmed数据库为资料来源,采用文献计量分析法,统计自建库至2020年5月20日发表的有关蒙药红花清肝十三味丸的文献,并对发文量、学科分布、出版物、关键词等进行分析。结果:共纳入88篇文献,被31种出版物收录;《中国民族医药杂志》收录文献最多(35篇);学科分布以临床研究的文献最多(42篇),占总文献量的47.73%。结论:蒙药红花清肝十三味丸的研究处于较低发展阶段,存在发文分散,文献质量有待提高,现有研究缺乏广泛性、系统性、权威性和规范性等问题。

蒙药红花清肝十三味丸治疗慢乙肝脂肪肝的临床观察

目的:观察蒙药红花清肝十三味丸治疗慢乙肝脂肪肝的临床疗效。方法:收集我院诊断为慢乙肝脂肪肝的患者60例,均进行抗病毒治疗后乙肝大三阳转为小三阳,随机分为治疗组(31例)和对照组(29例)。治疗组采用蒙药红花清肝十三味丸治疗;对照组选用西药复方甘草酸苷片治疗。结果:治疗组痊愈16例、显效7例、有效5例、无效3例,总有效率90.32%(28/31)。对照组痊愈11例、显效8例、有效6例、无效4例,总有效率86.21%(25/29)。比较两组临床疗效,治疗组明显优于对照组。结论:蒙药红花清肝十三味丸治疗慢乙肝脂肪肝,食欲减退、乏力、肝区疼痛、恶心等症状明显改善,疗效理想,副作用少,适合临床推广。

红花清肝十三味丸通过抑制JNK/c-Jun信号通路减轻大鼠急性肝损伤的研究

目的:研究红花清肝十三味丸治疗急性肝损伤的作用机制。方法:48只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟宾0.1 g/kg组和红花清肝十三味丸0.25、0.5、1.0 g/kg组,1次/d,连续灌胃给药8 d。末次给药1 h后,正常对照组大鼠腹腔注射1 m1/kg花生油,其余各组注射同等体积CCl_(4-)花生油溶液建立急性肝损伤模型。生化法检测大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽(GSH)活力,Elisa法检测肝组织总抗氧化力(T-AOC)活力;TUNEL法观察大鼠肝细胞凋亡;Western blot法检测大鼠肝脏c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、p-c-Jun蛋白表达;Western blot法和O-RT PCR法分别检测死亡相关因子配体(FasL)、死亡相关因子(Fas)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白-9(Caspase-9)的蛋白和mRNA表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清AST活力显著升高(P<0.01),血清GSH及肝脏T-AOC活力显著降低(P<0.01),TUNEL染色结果显示,模型对照组小叶中心带大部肝细胞核呈阳性,可见大量凋亡小体,部分已被Kupffer细胞吞噬;模型对照组大鼠肝脏p-JNK、p-c-Jun蛋白表达及p-JNK/JNK较正常对照组升高(P<0.01),FasL、Fas、Caspase-8、Bax、Cytochrome C、Caspase-9的蛋白和mRNA表达上调,而BCL-2的蛋白和mRNA表达下调(P<0.01)。与模型对照组比较,红花清肝十三味丸各组大鼠血清AST水平,肝脏p-JNK、p-c-Jun蛋白表达,p-JNK/JNK及FasL、Fas、Bax、Cytochrome C、Caspase-8、Caspase-9的蛋白和mRNA表达均明显下调(P<0.05),而血清GSH活力明显升高及肝脏BCL-2的蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05);此外,红花清肝十三味丸0.5、1.0 g/kg组大鼠肝组织T-AOC活力显著升高(P<0.01);TUNEL染色显示,红花清肝十三味丸各剂量组均不同程度减少凋亡小体的形成,抑制肝细胞凋亡,且红花清肝十三味丸1.0g/kg组效果最佳。结论:红花清肝十三味丸改善急性肝损伤的作用机制可能是通过抑制JNK/c-Jun信号通路的活化,调节下游凋亡基因和蛋白的表达来实现的。