“一步法”检测HBsAg的“Hook”效应

“一步法”检测ＨＢｓＡｇ的“Ｈｏｏｋ”效应１０００４４北京医科大学肝病研究所张春英，冯百芳，殷珊，陶其敏随着免疫技术的进展，免疫学检测的方向是简便、快速、灵敏。目前检测ＨＢｓＡｇ多用ＥＬＩＳＡ＂一步法＂，该法虽简便、快速、但本身也带来了“Ｈｉｇｈｄｏ...

AFP酶免疫测定的HOOK效应

ＡＦＰ酶免疫测定的ＨＯＯＫ效应曹文飞，罗卜（第二军医大学长海医院实验科上海２００４３３）ＡＦＰ是原发性肝癌实验室诊断重要指标之一。利用杂交瘤技术，制备成功针对ＡＦＰ抗原分子上两个不同而且不紧密相邻抗原决定簇的单克隆抗体替代以往的多克隆抗血清，组建成的...

抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应及对策

目的探讨ELISA双抗原夹心法检测抗-HIV的HOOK效应及对策。方法分别使用双抗原夹心一步法、双抗原夹心二步法检测抗-HIV阳性高值标本及倍比稀释后的标本,比较结果的差异。结果双抗原夹心一步法的HOOK效应十分明显,双抗原夹心二步法无此现象。结论双抗原夹心二步法是减少HOOK效应的有效方法。血站系统检测HIV抗体时,至少应选用一种二步法试剂,以避免HOOK效应造成的强阳性标本漏检。

试论HOOK效应的分子基础

以ＩＲＭＡ、ＩＥＭＡ、ＥＬＩＳＡ和ＴＲ－ＦＩＡ等为代表的，在液相ＲＩＡ（Ｂｅｒｓｏｎ等，１９５９）基础上发展起来的新一代固相标记免疫测定法（ＳＬＩＡ），既敏感又便捷，加之普遍采用单抗（ｍＡｂ）替代多抗（ｐＡｂ），检测抗原的特异性更高。然而，由于ＲＦ、...

两种AFP药盒的方法学和‘Hook’效应的比较

两种ＡＦＰ药盒的方法学和‘Ｈｏｏｋ’效应的比较曹文飞国内市场供应的检测ＡＦＰ商品化药盒种类很多，近年推出的单克隆抗体（ｍＡｂ）组建的二步夹心酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）定量测定药盒已得到广泛应用。ＥＬＩＳＡ简便易行，成功应用报道很多，唯其可以导致...

尿白蛋白免疫比浊法的HOOK效应及与干化学法的一致性比较

目的:利用临床尿样本筛选出免疫比浊法检测尿白蛋白时,出现HOOK效应的白蛋白浓度范围,通过尿白蛋白干化学法与免疫比浊法的一致性比较,初步确立尿白蛋白免疫比浊法的复检条件。方法:采用等级随机抽样法选取解放军总医院海南医院检验中心2017年09月~10月期间门诊和住院患者进行尿常规检测且干化学u Alb>200 mg/L的随机尿标本,共计129例,采用西门子DCA Vantage检测仪对同一尿标本进行原倍和10倍稀释后u Alb检测。绘制10倍稀释前后白蛋白浓度的散点图,确定出现HOOK效应的白蛋白浓度范围。干化学法尿蛋白浓度值为200 mg/L、500 mg/L、1000 mg/L、2000 mg/L、5000 mg/L与免疫比浊法蛋白值对应关系为100~349 mg/L、350~749 mg/L、750~1499 mg/L、1500~3499 mg/L、>3500 mg/L,两者之间的一致性评价采用Kappa检验。结果:DCA Vantage测定u Alb产生HOOK效应的临界点为>2250 mg/L。干化学法与DCA Vantage白蛋白的一致性具有统计学意义,但是一致性较差(Kappa=0.15,P<0.001)。当干化学u Alb低于1000 mg/L时,未发现DCA Vantage u Alb高于2250 mg/L的样本;当干化学u Alb为2000 mg/L时,>2250 mg/L的尿标本占13.0%,当干化学u Alb为5000 mg/L时,u Alb>2250 mg/L的尿标本占95.2%。结论:DCA Vantage对于大量白蛋白尿的样本容易出现假阴性结果,需要与尿常规同步检测。DCA Vantage检测u Alb的HOOK效应临界点为2250 mg/L,当u Alb>2250 mg/L时需要进行尿液的稀释后复检。虽然u Alb干化学法不能预测真实的u Alb,但干化学法可以用来筛选出可能发生HOOK效应的尿标本。

外周血HBsAb的酶联免疫吸附测定与“HOOK效应”

目的探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)中,"HOOK效应"对HBsAb测定的影响。方法分别采用ELISA法和化学发光分析仪检测标本原液的光密度(OD)值,并将标本分别作1∶10、1∶50及1∶100倍稀释,用ELISA法对稀释后标本进行检测。结果 HBsAb检测时,一步法的"HOOK效应"十分明显,而二步法无此现象。结论二步法是减少"HOOK效应"的有效方法。

血hCG高剂量HOOK效应1例报道及文献复习

人绒毛膜促性腺激素(hCG)在生殖妊娠过程中发挥了重要作用[1],主要是由合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白,相对分子质量为367×10^5,由α和β亚基组成,其α亚基与促甲状腺激素(TSH)、促黄体生成素(LH)等的α亚基几乎相同[2],但β亚基羧基端最后的24个氨基酸片段为hCG所特有,故临床实验室多利用β-hCG的特异性抗体来测定血液或尿液中的β-hCG,从而判定妊娠发生及异常情况[3]。从结果判定上,β-hCG的测定有定性和定量之分,但利用的都是免疫学抗原抗体反应。胶体金定性测定和化学发光免疫分析定量测定都存在假阳性或假阴性的风险,假阴性的重要原因之一就是钩状效应[4]。

ELISA法检测HBsAb产生钩状效应2例临床分析

ELISA检测抗原抗体因其成本低、灵敏度高、特异性强等优点被实验室广泛应用。由于目前多采用一步法检测，当血清中抗原抗体浓度过高时可能会产生钩状效应（HOOK效应），而引起假阴性[1-14]。在采用一步法检测时，钩状效应很难被发现。对此效应的报道主要集中在HBsAg的检测。本课题组在临床工作中遇到两例体检者，应用ELISA一步法检测结果均提示HBsAb阴性，但被检测对象均对结果表示异议，自述3个月前曾检测HBsAb为弱阳性，并于当时分别注射过10μg乙肝疫苗。后经倍比稀释[15]用ELISA一步法检测，确认其HBsAb为阳性，现报告如下。

排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术

目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验。方法:在既往G6ELISA的基础上建立血清HB-sAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较。结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5pg/ml。当被检标本HBsAg浓度在37.5μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2400μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗。对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA则未见Hooks效应的影响。结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰。

组织工程医疗产品中残留牛血清白蛋白的检验常见问题

胎牛血清既是大多数组织工程医疗产品生产中种子细胞培养和扩增时培养液的重要组分,也是许多组织工程医疗产品保存液中的必要组分之一。为降低残留牛血清成分可能引发的免疫反应,牛血清白蛋白残留量的检测已成为这类产品的质量控制以及风险评估的重要指标。文章简要介绍了牛血清白蛋白残留量的检测方法。根据以往对这类产品注册检验中积累的经验以及发现的问题,为保证组织工程医疗产品中牛血清白蛋白的有效清除以及检测结果的准确性及可重复性提出了相应的建议。

差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究

目的改进磁分离酶联免疫法（MEIA）。方法采取预加微量标本、将磁铁置于微孔侧壁和扣除上清液A值法，改进MEIA建立了差异磁分离酶联免疫法（DMEIA）。求DMEIA回归方程、线性范围、变异系数（CV），比较DMEIA和全自动电化学发光法（ECLIA）配对检测100份血清AFP结果差异。结果DMEIA检测AFP的回归方程Y=3．94X＋16．45，r=0．992，线性范围5～500ng／ml，批内CV=7．7％，批间CV一8．50A；DMElA和ECLIA测定血清AFP值差异无统计学意义（f检验，P〉0．05）；检测原倍高浓度AFP时（21460～501690ng／ml）两法均未出现hook效应。结论DMEIA可基本克服hook效应，可用普通微孔板和酶标仪比色，可省去洗涤，检测AFP结果接近ECLIA，但线性范围小于ECLIA。

ELISA法测定粪样中性激素含量的应用前景

目前的研究表明,从野生动物粪便中提取并测量性激素能取得较好的结果,这是由于该方法具有其他方法所无法比拟的独特优点。粪便激素测定的首要优点是安全无伤害性,能在不对动物进行镇静和限制的情况下收集数据;其次,粪、尿类固醇激素测定作为一种非侵害性的方法,在自然状态下监测野生动物生殖内分泌状态,具有简单、准确的优点。ELISA检测方法灵敏度高,特异性好,方便,简单,易于操作,检测结果可靠性高,已广泛应用于粪便临床检测和血液、尿液中的性激素检测。随着ELISA激素的不断发展完善,以及越来越多的应用粪便激素分析方法进行科学研究,运用ELISA方法进行粪便激素测定具有广阔的应用前景。

利用自制质控血清对HBsAg检测质量的初步评价

目的 :对乙肝表面抗原 (HBs Ag)的酶联免疫 (EIA)检测系统进行评价 ,以提高 HBs Ag的检测质量 ;方法 :收集新鲜无溶血、无黄疸、无细菌污染的阴性与阳性血清 ,经灭活处理后 ,阳性血清用定值 HBs Ag质控血清进行标定 ,制备临界值与强阳性血清 ,分装安瓿或离心管中 ,- 2 0℃保存 ,每批标本检测时用临界值血清做室内质控 ,绘制室内质控图 ,并进行试剂盒的敏感度评价。用阴性质控血清与强阳性质控血清进行特异性与“HOOK”效应的评价 ;结果 :通过室内质控观察 ,我科 EIA分析系统的稳定性或重复性良好 ,阴性血清检测试剂盒的特异性达 98% ,临界值血清检测试剂盒的敏感度达 95 % ,强阳性血清检测试剂盒未出现“HOOK”效应 ;结论 :EIA是检测 HBs Ag既敏感又特异的方法 ,但应加强室内质控 ,同时应参加室间质量评价 ,以提高 HBs Ag检测的可靠性 ,防止临床的误诊与漏诊。

血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策分析

目的观察分析血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策,总结其临床意义。方法选取我站2011年1—5月3414例自愿献血者(包括初筛HBsAg阳性),分别根据HOOK效应将血液标本分出HBsAg阳性的高值标本23例,低值标本45例,再分别采取ELISA双抗体夹心一步法和ELISA双抗体夹心二步法检测,观察比较其检测结果。结果检测20次后,两种方法检测的OD平均值、SD值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在进行HBsAg试剂盒时,应选择ELISA双抗体夹心二步法进行检测,对避免发生漏检、保障献血有效性具有重要的临床意义。

血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策

目的:目前大部分血站使用酶免生化仪,HBsAg初复检,使用的都是一步法试剂,但强阳性和低值标本容易漏检,为此,本文进行探讨。方法:分别使用双抗体夹心一步法、双抗体夹心二步法检测HBsAg阳性高值标本及倍比稀释后低值标本和原液低值标本,比较结果的差异。结果:双抗体夹心一步法的HOOK效应十分明显,双抗体夹心二步法无此现象。结论:双抗体夹心二步法是减少HOOK效应的有效方法。血站系统检测时,至少应选用一种二步法试剂,以避免HOOK效应造成的强阳性及低值标本检测为正常。

绒毛膜癌合并甲亢患者人绒毛膜促性腺激素检测“钩状效应”一例报道

绒毛膜癌是妊娠滋养细胞肿瘤的一种主要类型．妊娠滋养细胞肿瘤60％继发于葡萄胎，30％继发于流产．10％继发于足月妊娠或者异位妊娠。妊娠滋养细胞肿瘤分泌大量人绒毛膜促性腺激素（humanchorionicgonadotropin，hCG），hCGct亚基与TSHa亚基结构相同，能促进甲状腺分泌甲状腺素。检测hCG可作为早孕、病理妊娠及妊娠滋养细胞肿瘤诊断和治疗监测的可靠指标。hCG检测中经常出现高剂量“钩状效应”（hook效应）导致结果不准确。该效应是指被测抗原浓度过高超过抗原抗体反应的线性范围，反应曲线不呈平台状无限延伸，出现向下弯落型似钩状的现象。我们发现1例hook效应导致hCG假性低值的病例，报告如下。

微观应力和晶粒尺寸的X射线单峰傅立叶分析法

研究了傅立叶分析法必然存在"hook"效应的原因,提出解决此效应的方法,进而利用假设函数的方法,把推理严谨的多峰傅立叶分析法简化成单峰分析法。此方法引入参数m,不但能指出误差大小,而且能自动修正误差。单峰傅立叶分析法是一种简单且高精度的测定微观应力和晶粒尺寸的方法。