承德无角山羊耳成纤维细胞系的建立与冷冻保存研究

【目的】试验以甜菜碱作为冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行冷冻保存,旨在优化冷冻保护效果,以期在细胞水平上长期保存这一地方品种家畜的遗传资源。【方法】采用组织块培养法建立承德无角山羊耳成纤维细胞系,利用甜菜碱作为冷冻保护剂对其进行玻璃化冷冻,以不同浓度(5%、10%、15%、20%及25%)甜菜碱为试验组,以不同浓度(10%和20%)二甲基亚砜(DMSO)为对照组,对承德无角山羊耳成纤维细胞进行冷冻,复苏后检测细胞的存活率、增殖活力以及细胞中B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达量,同时评估甜菜碱的毒性。【结果】本研究建立的承德无角山羊耳成纤维细胞系生长态势良好,细胞纯度较高,细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性,生长曲线呈S型,达到了建立成纤维细胞系的要求;当甜菜碱浓度为15%时细胞存活率最高,达90.86%,极显著高于对照组(P<0.01),细胞增殖活力及Bcl-2/Bax基因表达量均显著高于对照组(P<0.05),且甜菜碱的毒性远低于传统冷冻保护剂DMSO(P<0.05)。【结论】试验成功以甜菜碱作为单独的冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行低温冷冻保存,从而保护了承德无角山羊的遗传资源。

肉牛无角性状研究进展

角是动物在长期进化过程中演化出的组织结构,是反刍动物最具标志性的结构之一,对牛的生存和繁衍具有重要作用。但在现代集约化的肉牛养殖业中,牛角的存在往往引发了一系列问题,对肉牛养殖行业的发展产生了阻碍,所以对于肉牛无角性状的研究非常重要。该文介绍了肉牛角形态结构和发育特点,并对近年来研究的无角和角发育的相关基因进行了归纳,还对一些无角肉牛培育的方法进行了介绍,旨在对肉牛无角性状研究和肉牛无角新品种培育提供一些参考。

西门塔尔牛无角性状的分子鉴定及应用

为鉴定西门塔尔牛有角和无角性状的相应基因型,为西门塔尔牛无角品系的培育提供数据基础,试验采集了103头无角西门塔尔牛、5头有角西门塔尔牛和5头无角安格斯牛颈静脉血,提取全血DNA后,通过PCR-测序法检测牛PC基因中P202ID突变位点的基因型。分型与测序结果显示,108头西门塔尔牛P202ID位点的基因型与角型完全一致,其中,103头无角西门塔尔牛中4头为纯合子,基因型与无角安格斯牛一致,均为PC/PC,PC的基因频率为0.0370;82头为无角杂合子,基因型为PC/prs,其中,PC的基因频率为0.7593;剩余17头去角西门塔尔牛与5头有角西门塔尔牛基因型一致,均为prs/prs,prs的基因频率为0.2037。鉴定群体中PC的基因频率为0.4166,prs的基因频率为0.5834。卡方检验结果显示,P202ID基因型与检测群体中有无角性状具有极显著关联,可以利用P202ID位点对西门塔尔牛角型进行鉴定。

无角欧拉羊定向选育技术试验示范

以青海省高寒牧区重要的肉用羊欧拉羊为研究对象,针对其犄角表型开展了适应现代集约高效生产发展趋势的无角定向选育。通过应用氯前列醇(PG)注射法、CIDR+PMSG法进行同期发情、人工授精,情期受配率均达到94%以上,产羔率达到93%和123%以上,羔羊成活率达到97%以上。采用无角配无角比无角配有角后代的无角率高39.19个百分点。随着无角个体基因型的不断纯化,无角后代的比例将越高,实现了无角欧拉羊的定向选育。

牛羊无角表型遗传机制研究进展

角是偶蹄目反刍亚目动物特有的组织结构,是动物之间进行斗争及抵御外敌的工具,但在现代化集约养殖中容易造成畜舍的破坏及工作人员伤亡。牛羊的犄角不同于鹿科动物,属于无附加值动物产品,且会降低饲料报酬,降低饲料转化率,不适应现代化高效养殖发展趋势。而人为去角,在违背动物福利的同时会浪费巨大的人力物力,易引起动物应激。通过遗传改良培育无角型牛羊品种是发展高效畜牧业的重要任务。牛羊的洞角比较特殊,中空而外部角质化,难以直接开展组织发育的调控研究,多从基因组层面探究其遗传机制。文章综述了国内外牛羊无角性状主效基因研究进展,为进一步研究牛羊犄角有无、角型发育,开展牛羊分子育种等问题提供科学参考,对后续采用分子生物学技术开展无角化牛羊品种培育提供参考。

高压静电场对绵羊精子存活率的影响

采用不同剂量的高压静电场处理绵羊精液，经分析发现，高压静电场对绵羊精子具有激活作用。能提高绵羊精液品质，表现在适当剂量的高压静电场能显著地提高绵羊精子存活率，其中以６００ｋＶ／ｍ剂量处理效果最佳。１００ｋＶ／ｍ和３００ｋＶ／ｍ剂量对精子刺激不足，而９００ｋＶ／ｍ剂量则对精子刺激过强，导致部分精子损伤和死亡，同样达不到预期的效果。

基于MOOnitor监测系统对青海大通地区无角牦牛冷季放牧行为的研究

选取青海省大通县地区无角牦牛10头,在冷季自由放牧条件下使用MOOnitor监测系统对其放牧行为进行研究。通过计算无角牦牛在试验期内24 h各类活动时间、游走距离来分析其在冷季放牧的行为特点。结果表明:(1)无角牦牛在1、2、3月份24 h内平均休息时间极显著高于4月份(P<0.01)和5月份(P<0.01),而4月份平均休息时间又极显著高于5月份(P<0.01);5月份无角牦牛平均行走时间极显著高于1、2、3、4月份(P<0.01),而平均采食时间却极显著低于1、2、3、4月份(P<0.01);5月份无角牦牛每次采食持续时间极显著低于1、2、3、4月份(P<0.01),而日均游走距离显著高于1、2、3、4月份(P<0.05),同时4月份日均游走距离又显著高于1、2、3月份(P<0.05)。(2)在1、2、3、4月份,无角牦牛的第1个活动高峰出现在9:00—10:00;第2个活动高峰出现在18:00—19:00;5月份的活动高峰出现在18:00左右。(3)无角牦牛活动的空间分布格局随时间推移越来越分散。说明冷季放牧压力较大时应采取适当补饲来保证无角牦牛的高效生产。

中国美利奴羊(新疆型)无角类型的培育研究

引用无角型澳洲美利奴公羊与新疆细毛母羊杂交，培育成中国美利奴羊（新疆型）无角类型。新类型羊结合了双亲的优良基因，全面达到了中国美利奴羊品种标准。无角性状遗传性稳定，自群繁育后代，雄性无角率９４７１％，雌性无角率达９９５７％；体大、毛多，羊毛品质好；适应性广，生活力强，生产性能高。

放牧+补饲对无角牦牛育肥效果的研究

[目的]为了研究无角牦牛与有角牦牛的育肥效果,为无角牦牛的培育提供科学依据,[方法]本试验在青海大通种牛场开展了放牧补饲的育肥方式,并对其生长情况及育肥效果进行分析,[结果]通过146d的育肥,无角牦牛的总增重和平均日增重比有角牦牛的分别增加了1.78kg和12.2g。[结论]无角牦牛的育肥效果高于有角牦牛,若在完全舍饲条件下,将有助于无角牦牛发挥其遗传潜力。

利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑荷斯坦种公牛的无角Pc位点

试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系。针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片段及其两侧约800 bp的同源序列左臂(L)和右臂(R),双酶切获得同源重组片段后与sgRNA共同转染至荷斯坦种公牛耳缘成纤维细胞中,筛选获得单细胞克隆并鉴定。结果显示,试验成功构建了6个sgRNA(1-6),并筛选获得了突变效率最高的sgRNA1,其突变效率为32.6%;成功获得了长度为1901 bp基因序列完全正确的同源重组片段;共获得147个单细胞克隆,其中8个单细胞克隆发生正确的单等位Pc位点插入,1个单细胞克隆发生正确的双等位Pc位点插入。外源基因残留检测结果显示,单细胞克隆没有Cas9基因残留,可作为后续克隆生产优秀无角纯合胚胎的核供体细胞。本研究成功利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑的方法获得了Pc位点纯合插入的无外源Cas9基因残留的无角牛耳缘成纤维细胞系,为将来优秀无角体细胞克隆种公牛的培育以及主要功能基因研究提供了良好的材料储备和技术平台。

引入无角陶赛特羊杂交改良效果评价

通过对无角陶赛特羊与藏羊杂交后代生产性能的测定,评价无角陶赛特羊在青海省高海拔地区这个特殊生态环境下的适应性与生产性能暴露,给种畜管理部门及饲养者提供参考性资料,为无角陶赛特羊的引种与生产性推广奠定理论基础。

西藏边坝县藏东黑山羊育种工作存在的问题及对策

结合西藏昌都市对边坝县农牧业发展区位定位,边坝县将大力发展以藏东黑山羊为主的特色畜牧业。鉴于藏东黑山羊种源质量参差不齐、现有特色资源无法发挥其资源优势和远远不能满足边坝县藏东黑山羊产业发展需求的情况,提出培育适应饲草料短缺的高海拔环境的节粮型无角、多胎、快长、繁殖率高和屠宰率高的藏东黑山羊新品种方案,以期为边坝县藏东黑山羊产业发展提供帮助。

牛无角性状研究进展

角是牛科动物特有的组织结构,但是在现代化养殖中容易造成人员伤亡,而人为除角又会违背动物福利且浪费人力物力,因此牛无角性状引发了高度关注。综述了牛角的形态及发生规律、自然界中存在的天然无角及角畸形性状,归纳总结了导致无角和角畸形性状的基因突变,以及通过基因编辑技术培育无角牛的研究进展,并展望了牛角性状发生机制的研究方向。

有角与无角哈萨克羊生长规律的比较分析

为研究不同年龄阶段哈萨克羊生长发育规律,比较有角与无角哈萨克羊的生长规律和生产性能的差异,分别挑选1~5岁哈萨克羊2911只,其中无角哈萨克羊数量为1023只。对羊只的体重、体高、体斜长、管围、胸围、胸宽、胸深、尾宽、尾长等九个生长指标进行测量,并用SPSS 22.0软件分析。结果表明:2岁期间的体重、体高、胸宽、胸深等指标差异显著(P<0.05),3岁和2岁期间的体尺基本一致,4岁期间的体高差异显著(P<0.05),5岁期间的胸宽差异显著(P<0.05)。在1~2岁时无角与有角哈萨克羊的体重差异显著(P<0.05);无角与有角哈萨克羊1~5岁的体高、体斜长、管围基本一致;在1岁、2岁、3岁、5岁时无角与有角哈萨克羊的胸围差异显著(P<0.05),2岁、3岁、5岁无角与有角哈萨克羊的胸深差异显著(P<0.05)。结论为:哈萨克羊1~5岁期间的体重及体尺差异较小,生长速度较缓慢,无角与有角哈萨克羊各年龄阶段的其他体尺基本一致。

三河牛无角基因鉴定及来源探析

无角是养牛生产中的有利性状,呈常染色体显性遗传,已报道有3种不同的无角基因,分别源自欧洲牛(2种)和蒙古牛(1种)。三河牛是经多品种杂交育成的乳肉兼用牛品种,经过长期选育在品种内形成一个无角品系,但其无角基因的具体类型及来源目前尚不清楚。本研究收集7头三河牛种公牛(无角3头、有角4头)和20头蒙古牛(无角2头、有角18头)的样本,使用等位基因特异性PCR技术分别鉴定3种无角基因的基因型。结果显示:3头无角三河牛的无角基因均属于蒙古牛无角基因类型,其中2头为无角杂合子、1头为无角纯合子,2头无角蒙古牛均为蒙古牛无角基因杂合子,样本中未检出欧洲牛无角基因。经PCR产物测序验证,无角三河牛与无角蒙古牛的无角等位基因的核苷酸序列一致。据此判定,三河牛培育过程中虽然有欧洲牛品种参与,但三河牛无角基因来自本地蒙古牛。本研究为三河牛无角品系的分子选育奠定了技术基础。

补饲对无角欧拉羊屠宰性能的影响

为了进一步丰富欧拉羊的育种资料,对无角欧拉羊母羊的屠宰性能进行了测定。试验随机选取6月龄(羔羊期)和18月龄(育成期)健康无角欧拉羊母羊各12只,并从每个年龄阶段中各选择6只羊为一组,分为对照组(自然放牧)和试验组(放牧+补饲),试验期70 d,其中预试期10 d,正试期60 d。试验结束后,选择相同月龄无角欧拉羊各6只(其中3只为自然放牧,3只为放牧+补饲)进行屠宰,测定其屠宰性能并进行相关性分析。结果表明,不同饲养条件下,6月龄试验组羊屠宰性状的各个指标均高于同月龄对照组,但未达到显著水平(P>0.05);18月龄试验组的宰前活重、胴体重、净肉重和肉骨比显著高于同月龄对照组(P<0.05),其余指标含量均无显著差异(P>0.05)。皮尔逊相关性分析显示,放牧组羊的宰前活重与胴体重、净肉重、皮重均呈极显著正相关(P<0.01),胴体重与净肉重、皮重均呈极显著正相关(P<0.01),净肉重与骨重呈极显著正相关(P<0.01),骨重与GR值呈极显著正相关(P<0.01);放牧+补饲组羊的宰前活重与胴体重、净肉重、骨重均呈极显著正相关(P<0.01),胴体重与净肉重、骨重、皮重均呈极显著正相关(P<0.01),净肉重与骨重、肉骨比均呈极显著正相关(P<0.01),骨重与皮重、GR值分别呈极显著(P<0.01)和显著正相关(P<0.05)。放牧条件下6月龄和18月龄无角欧拉羊根据宰前活重(X)来预测胴体重(Y)及净肉重(Y)的回归方程分别为:Y=0.540X-2.562(R^(2)=0.929,P<0.01),Y=0.366X-1.194(R^(2)=0.871,P<0.01);放牧+补饲条件下的相应回归方程分别为:Y=0.593X-3.552(R^(2)=0.968,P<0.01),Y=0.445X-2.719(R^(2)=0.942,P<0.01)。

历代玉器螭纹之异同

战国时期玉器出现螭纹,经过历代发展演变,玉器螭纹活泼瑰丽、变化多姿、精犷奔放。

青海无角欧拉羊羔羊体重与体尺多元回归分析

为探究无角欧拉羊体重与体尺性状的相互关系,利用SPSS软件对653只无角型欧拉羊公羔羊体重与体尺性状进行分析,以体高(X_(1))、体长(X_(2))、胸宽(X_(3))、胸深(X_(4))、尻宽(X_(5))、胸围(X_(6))为自变量,体重(Y)为因变量,采用线性回归分析、通径分析和逐步回归分析方法,建立最优回归方程。结果表明,无角型欧拉羊体重与体尺性状间存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)正相关,其中体高、胸深、胸围这3个体尺性状与体重之间存在极显著正相关(P<0.01),相关系数R由大到小为体高(0.544)>胸围(0.429)>胸深(0.324),体高、胸深、胸围的直接作用和间接作用对体重的影响极大,因此得到的最优回归方程为Y=0.425X1+0.253X6+0.122X4。

枯草期自然放牧条件下无角、有角型欧拉羊各项血清生化指标的比较

本试验旨在研究青海牧区放牧状态下对无角型欧拉羊与有角型欧拉羊血液生化指标的比较。随机挑选健康、体况接近的羔羊48只,分别在6月龄、12月龄和36月龄测定指标,且分为2组(无角型欧拉羊为A组,有角型欧拉羊为B组),每组3个重复,每个重复8只羊。结果表明,在血清生化抗氧化方面,6月龄A组血清SOD、LDH、GSH-Px含量显著高于B组(P<0.05),B组血清CAT、MDA含量显著高于A组(P<0.05);12月龄A组血清SOD、LDH、GSH-Px含量高于B组,但差异不显著(P>0.05),B组血清CAT、MDA含量高于A组,但差异不显著(P>0.05);36月龄A组血清SOD、CAT、LDH、GSH-Px含量高于B组,但差异不显著(P>0.05),B组血清MDA含量高于A组,但差异不显著(P>0.05)。在血清生化指标方面,6月龄A组血清GH含量显著高于B组(P<0.05),B组血清AST、ALT、ALP、Albumin、TC含量显著高于A组(P<0.05),且A组血清E2、Urea含量高于B组,但差异不显著(P>0.05);12月龄A组血清TP、AST、TC、TG、E2、GH、INS含量高于B组,但差异不显著(P>0.05),B组血清ALT含量显著高于A组(P<0.05);36月龄A组血清AST、Albumin、TC、TG含量显著高于B组(P<0.05),B组血清TP、ALP、GH、Urea含量高于A组,但差异不显著(P>0.05)。在血清免疫指标方面,6月龄A组血清GLB含量显著高于B组(P<0.05),B组血清IgM、IL-6含量显著高于A组(P<0.05),且A组血清IgG、IL-1β、IL-2、IL-4含量高于B组,但差异不显著(P>0.05);12月龄A组血清IL-6含量显著高于B组(P<0.05),B组血清GLB、IgM含量显著高于A组(P<0.05),且A组血清IgG、IL-1β、IL-4含量高于B组,但差异不显著(P>0.05);36月龄A组血清IgA、IgM、IL-2含量显著高于B组(P<0.05),B组血清GLB、IL-4含量显著高于A组(P<0.05),且A组血清IgG、IL-1β含量高于B组,但差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,在枯草期自然放牧条件下,无角型欧拉羊的抗氧化能力、免疫能力强于有角型欧拉羊,6月龄无角型欧拉羊GH(生长因子)水平高于有角型欧拉羊,生产性能更优。

青海欧拉羊(Ovis aries)群体中角发育控制基因RXFP2的选择信号分析

欧拉羊(Oula sheep)属于藏羊(Tibetan sheep)的一个分支。不同于其他国内外绵羊(Ovis aries)品种,欧拉羊的公母羊皆生有大犄角。这是长期放牧条件下自然选择的结果,但其大犄角不利于现代高效畜牧业生产需求。已有较多研究把绵羊无角性状的主效控制基因定位于绵羊10号染色体上的RXFP2基因,但RXFP2基因在不同绵羊品种中的调控作用仍有差别。为加快青藏高原地区无角绵羊品种培育,本研究对青海有角型、无角型欧拉羊成年母羊各15只进行了10×深度的基因组重测序,采用F_(ST)选择性消除定位角表型主要选择基因,并对欧拉羊RXFP2基因CDS区域及上下50 kbp区域以2000 bp窗口、1000 bp步长进行扫描,对获得的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行Tajima′s D、π、FST选择分析。结果发现,欧拉羊RXFP2基因及3′下游区域存在强选择信号。通过对RXFP2基因编码区SNP筛选,挖掘了欧拉羊中4个高质量SNPs,分别是位于RXFP2基因第9、第14外显子的同义突变(g.29458690A>G,g.29446067T>C)和第17外显子的2个非同义突变(g.29439053C>T,g.29439011C>T);突变区域均处于无角、有角欧拉羊RXFP2基因的强选择区域。本研究结果可为无角欧拉羊品种(品系)培育相关分子辅助选择工作提供技术和理论依据,有助于加快无角欧拉羊品种培育的早期选种工作。