甜菜果胶酶促交联对蛋白质乳化液稳定性的影响

研究了辣根过氧化物酶(HRP)和漆酶(Laccase)催化甜菜果胶间交联的反应条件及其对蛋白质乳化液稳定特性的影响。紫外-可见分光光度法和傅里叶变换红外光谱结果均表明,HRP和Laccase在水相中可催化甜菜果胶间形成共价交联。HRP的反应体系为:5 mL反应体系中含6 mg甜菜果胶,20 U HRP,0.5%(质量分数)H2O2,35℃下反应2 h;Laccase的反应体系为:5 mL反应体系中含6 mg甜菜果胶,15 U Laccase,40℃下反应24 h。激光衍射粒度仪测定结果表明,不同酶反应体系下,蛋白质乳液特性不同。Laccase交联体系引起牛血清白蛋白(BSA)、乳清分离蛋白(WPI)乳状液发生分层现象,随反应时间延长,分层更加明显;而在HRP反应体系下,BSA乳状液的稳定性能明显提高。

几种药剂处理对辣木出苗率的影响

[目的]为辣木生产提供参考。[方法]以印度传统种辣木、非洲辣木和印度改良种PKM1为供试辣木品种,筛选几种药剂处理辣木种子,观察其对辣木种子出苗率的影响。[结果]在3个辣木品种中,PKM1的平均出苗率最高,印度传统种次之,非洲种最低;筛选的几种药剂处理的辣木种子出苗率较清水处理的均有不同程度的提高,尤其是浓度1%促根壮苗剂浸种4 h和磷酸二氢钾5 g加水500 ml浸种4 h对提高辣木种子出苗率有明显的效果;浓度1%促根壮苗剂,浓度1%的多菌灵单独使用比混合使用的效果好;第七元素和以色列活性促根剂单独使用比混合使用的效果好,混合使用会降低2种药剂的效果。九二0处理出的苗大部分是白化苗,九二0不宜用于辣木种子育苗。[结论]为提高辣木种子的发芽率,节约用种成本提供了科学依据。

邻苯二甲酸对萝卜种子萌发、幼苗叶片膜脂过氧化及渗透调节物质的影响

华北地区是我国玉米的主产区,玉米秸秆还田不仅可有效改善土壤理化性状、提高土壤生物有效性,还会在腐解过程中释放出目前公认的化感物质——酚酸类物质,邻苯二甲酸是玉米秸秆腐解液中的主要酚酸类物质。从玉米秸秆还田过程中主要腐解产物(邻苯二甲酸)对蔬菜作物的化感效应角度进行了研究,为量化秸秆还田量及构建粮-菜轮作制度探寻化感效应依据。试验以萝卜为蔬菜材料,通过配置4个浓度(0.05、0.5、1.0、2.0 mmol/L)的邻苯二甲酸溶液,模拟玉米秸秆还田条件,以清水为对照,研究主要腐解产物邻苯二甲酸对萝卜种子萌发、幼苗生长、膜脂过氧化作用及渗透调节物质的影响。结果表明:(1)萝卜不同生育期对邻苯二甲酸化感效应的响应程度不同。在0.05—1 mmol/L浓度范围内,邻苯二甲酸处理促进了萝卜种子萌发,但随着处理浓度的增大,促进作用减弱;浓度达到2 mmol/L时对萝卜种子萌发具有抑制效果。(2)邻苯二甲酸0.05mmol/L处理,促进了萝卜幼苗干鲜物质积累,幼苗根系生长,其中根系长度和根系表面积分别比对照提高42.03%、38.36%,显著高于清水对照;植株体内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性增大,过氧化物酶(Peroxidase,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性降低,膜脂过氧化产物丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量与对照无显著差异。(3)当邻苯二甲酸浓度超过0.5 mmol/L时,萝卜幼苗脂质过氧化伤害加剧,体内MDA含量急剧增加,代谢与生理功能出现紊乱,正常生长及干鲜物质积累受到显著抑制。邻苯二甲酸浓度达到2 mmol/L时,叶片数较对照降低了36.51%;根系长度、根系表面积及根尖数降幅分别为64.46%、40.20%、41.28%。(4)对于渗透调节物质的影响,邻苯二甲酸处理促进了萝卜幼苗叶片可溶性糖含量的增加,但随着处理浓度的升高其促进作用逐渐减弱;可溶性蛋白含量随着邻苯二甲酸处理浓度的升高表现出逐渐减少的趋势,分别较对照降低了12.82%、14.88%、21.58%、24.73%。因此,华北地区实施玉米-萝卜轮作模式,从化感效应角度研究玉米秸秆量化还田,应将土壤中邻苯二甲酸浓度控制在0.5 mmol/L范围以内,以防止邻苯二甲酸浓度过高对萝卜幼苗生长的抑制作用。

磁性固定化酶处理含酚废水的研究

研究了磁性壳聚糖微球(磁性CS-M)及壳聚糖微球(CS-M)固定化辣根过氧化物酶(HRP)对模拟含酚废水的催化效果,探讨了反应时间、酶活力、H2O2浓度及酚浓度对反应的影响。对均相与非均相酶处理酚效果进行比较,显示固定化酶处理含酚废水具有很大的优越性,且磁性酶的效果最佳。

酪氨酸为底物的过氧化物酶催化荧光反应

G.G.Guilbault等人曾对过氧化物酶催化H_2O_2氧化高香草酸(HVA)的反应进行过较详尽的研究。利用这个反应可以对有关的氧化还原酶、辅酶、有机底物、无机离子和微量H_2O_2进行分析检测。但是,以高香草酸为底物,价格昂贵,作为通用检测方法不够经济。Guilbault认为酪氨酸有类似的反应,且价格便宜,但未进行详细研究。我们在此基础上。

辣根过氧化物酶的电化学固定化及其对H_2O_2的生物电催化还原作用

利用电化学固定化方法制备了聚吡咯／辣根过氧化物酶（ＰＰ／ＨＲＰ）膜电极，并研究了其电化学行为。在除氧的磷酸盐缓冲液介质中，ＰＰ／ＨＲＰ电极加速Ｈ_２Ｏ_２的还原，归因于酶加成物的直接电子传递。探索ＨＲＰ与电子传递体Ｋ４Ｆｅ（ＣＮ）６在聚吡咯（ＰＰ）膜中的同时固定化条件及其膜电极的电化学行为，实验证实，Ｋ_４Ｆｅ（ＣＮ）_６在酶膜中的存在使得Ｈ_２Ｏ_２的还原电位强烈正移，在－０．０５Ｖ的工作电位下能对Ｈ_２Ｏ_２进行检测，相应的电极过程可用间接氧化还原催化机理解释。

经上丘逆行标记法视网膜神经节细胞定量的实验研究

目的 建立一种视网膜神经节细胞 (RGCs)定性及定量的研究方法 ,并了解大鼠RGCs密度分布情况。方法 暴露大鼠双上丘后将饱含 3 0 %辣根过氧化物酶 (HRP)溶液的明胶海绵片贴附于双上丘表面 ,大鼠存活 2 4h后 ,取出视网膜行HRP组织化学反应 ,计算机图像分析系统对RGCs进行分类及计数。结果 左右眼RGCs密度分别为 14 66±3 76/mm2 及 14 5 7± 40 4/mm2 ,左眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 90± 3 71/mm2 及 14 4 2± 3 82 /mm2 ,右眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 67± 410 /mm2 及 14 4 6± 40 0 /mm2 。结论 成功地建立了直接上丘HRP逆行标记RGCs定量计数法 ,正常大鼠双眼RGCs密度基本相同 ,颞侧及鼻侧RGCs密度基本相同。

大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶阳性神经的来源

采用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪与还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH-d)相结合方法 ,观察大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经纤维的来源。结果 :当 HRP注入“内关”穴后 ,在脊神经节的颈 6至胸 1 (C6-T1)节和脊髓前角观察到 HRP-NOS双标记神经元。结论 :“内关”穴区有 NOS阳性感觉和运动神经纤维分布。

基于流动注射光度法的吸光度/留存时间比自动测定过氧化物酶活性方法

本研究给出了流动注射分光光度系统（FI-SP）测定酶活性浓度（Ec）的通用公式Ec=kΔA/Δt;Δt是在酶促反应线性响应区域内试样塞的平均留存时间;ΔA为平均留存时间处对应的吸光度;k=n V/（εv L）,V为样品注入点到流通池入口之间的管路总容积,n为酶底物与产物的反应摩尔比,ε为产物的摩尔吸收系数,v为注入的酶液体积,L为流通池光程;FI-SP系统确定后k为常数。在此基础上,将H2O2/过氧化物酶（POD）/愈创木酚（GA）反应体系导入FI-SP系统,建立了一种无需标准曲线的POD活性快速准确测定的新方法。此方法优化后的条件：载流磷酸盐缓冲液浓度为0.05 mol/L（p H 5.5）,进样体积为40μL,反应盘管长度200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCl（清洗液）,检测波长470 nm,产物的摩尔吸光系数为0.0125 L（μmol·cm）。本方法的重现性RSD〈0.38%（n=11）,分析速度为40样/h,测定范围为450~7260 U/L,检出限为89 U/L。在优化条件及60℃下,用本方法测定了多种白萝卜中POD活性,结果与动力学曲线法完全相同。

马粟树籽提取物(迈之灵)治疗肢体创伤的临床研究

目的观察马粟树籽提取物(迈之灵)治疗肢体骨折软组织肿胀的临床疗效及其对损伤指标——血清过氧化氢酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、过氧化脂质(LPO)等水平的影响。方法四肢骨折软组织创伤患者1944例。采用双盲法,随机抽样分成治疗组1296例,对照组648例,治疗组口服迈之灵片治疗,对照组口服安慰剂药丸治疗,分别进行疗效观察研究。治疗组抽取61例患者测量用药前后血清SOD、GSH、LPO值。结果临床观察组有效率为94.6%,显效率为75.5%,对照组有效率为48.4%,显效率为35.2%。差异有统计学意义(P<0.05)。肢体创伤肿胀病人患者血清均存在高水平LPO及低水平SOD、GSH。结论迈之灵治疗肢体骨折软组织肿胀效果明显,值得临床推广应用。其拮抗氧自由基损伤可能是迈之灵治疗肢体骨折、软组织损伤的机制之一。

IgG3酶联免疫分析方法的建立及初步应用研究

目的：建立IgG3酶联免疫分析（ELISA）方法，探讨IgG3在炎症性疾病患者血清中的水平变化。方法：用兔抗人IgG3的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别结合待测标本中的IgG3，再用此多克隆抗体标记生物素（Bio-Ab），用亲和素标记辣根过氧化物酶（HRP-A），向固相酶标板中加入标准品或待测品，反应、洗涤后，加入Bio-Ab，反应、洗涤后，加入HRP-A，反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的IgG3含量。结果：该法测定范围为（1．875-60）ng／ml，最低检出量1．5ng／ml，批内和批间误差分析〈8％和10％。用该法测得正常青年人血清IgG3含量为（12.91±4．25）ng／ml（n=64），风湿病患者为（11．23±4．64）ng/ml（n=64），肺部感染患者为（9．32±2．00）ng／ml（n=24），后两组血清IgG3水平均显著低于正常青年人（P〈0．05）。结论：我们建立的IgG3 ELISA方法稳定、简便，特异性和灵敏度高，适于检测人血清ISG3水平的变化。

萝卜种子超干处理与种子活力及脂质过氧化关系

将不同含水量的萝卜种子通过直接吸胀萌发、回水萌发、老化回水等处理,测定种子发芽率、活力指数、发芽指数,种子浸出液电导率、丙二醛、过氧化氢酶和过氧化物酶含量等,研究超干处理与种子活力及脂质过氧化的关系。结果表明:随种子含水量降低,种子直接吸胀萌发,发芽指数和活力指数均不同程度下降;萌发前回水处理,发芽指数和活力指数与自然含水量的基本一致;老化回水处理,自然含水量种子活力大幅度下降,超干种子仍保持较高水平;超干种子活力显著高于对照,脂质过氧化程度低于对照,耐贮性显著提高。萝卜种子超干贮藏最适含水量在3%左右。

抗肾综合征出血热病毒和抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体的建立

成功地获得了既抗肾综合症出血热病毒,又抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体(简称抗HFRSV-抗HRP BsMcAb)。方法是,先将分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤A25-1细胞用杂氮鸟嘌呤进行诱变试验,建立了分泌抗HFRSV McAb的HGPRT细胞株(即HAT敏感型细胞株)251AGD6。用此细胞与HRP免疫的Balb/c小鼠脾细胞再次融合,得到分泌抗HFRSV-抗HRP的BsMcAb杂交杂交瘤(Hybrid Hybridoma)261-HRPB10细胞株。用双抗原免疫斑点试验和双抗原ELISA试验测定251-HRPB10腹水BsMcAb,滴度均为1000;用IFA测定单向抗HFRSV抗体滴度为10000;用免疫斑点法和ELISA测定单向抗HRP抗体滴度,均为100000。杂交杂交瘤的染色体数目在150条左右,证实是三细胞两次杂交瘤。

木质素-对甲酚共聚物的制备与分析

采用了一种全新的反相微乳液体系，十六烷基三甲基溴化铵＼正丁醇＼异辛烷＼水，用辣根过氧化物酶催化合成木质素对甲酚共聚物，证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明：木质素与对甲酚发生了聚合反应。差示扫描量势分析的结果表明，引入对甲酚改善了木质素的热性能。

壳聚糖-胶体金修饰丝网印刷电极测定过氧化氢

实验制作了丝网印刷酶电极,采用不同的方法对电极进行修饰,比较了壳聚糖酶电极和壳聚糖胶体金修饰酶电极对过氧化氢的响应。结果表明,在磷酸盐缓冲液(0.1 mol·L^(-1),pH7.2,PB)中,酶电极的二茂铁氧化峰消失,而还原峰电流高,峰形较好,在检测过程中,电极性能稳定,重复性好。当过氧化氢浓度范围在0.08-40 mg·L^(-1)时,壳聚糖胶体金修饰酶电板对过氧化氨响应电流具有较好的线性关系,面归方程为 Y=0.9406610gC-1.48549(C 为过氧化氢浓度),检测下限为80μg·L^(-1),检测精度高,反应灵敏,而且抗干扰能力较强,适合用于食品中过氧化氢的快速检测。

常温预辐射聚合法物理包埋辣根过氧化物酶的研究

本文发展了一种新型的,常温下预辐射聚合物理包埋酶的方法。此法避免了酶直接受到辐照而引起的失活,且简单易行、包埋效率高,固相酶的使用性能亦很好。实验表明,常温预辐射固定化技术对辐射敏感的生物活性分子的固定化将是一种很有希望的新型物理包埋法。

ATRP法合成AC-g-PSStNa及其对辣根过氧化物酶固定化的影响

以活性炭(AC)为原料,利用原子转移自由基聚合法(ATRP)合成了AC-g-PSSt Na有机无机杂化材料,并对其进行FT-IR、SEM、XPS表征。以AC-g-PSSt Na为载体对辣根过氧化物酶(HRP)进行固定化,比较游离酶和固定化酶的pH稳定性、热稳定性及储存稳定性。结果表明,Ac-g-PSSt Na固定化HRP的pH稳定性及热稳定性均强于游离酶,特别是在高温范围内表现出高的催化活性;在碱性环境中固定化酶的活性比游离酶高。可见AC-g-PSSt Na复合材料可有效地应用于固定化HRP。

大鼠下丘脑室旁核与终纹床核及前额叶皮质间纤维联系的研究

分别注射辣根过氧化物酶(HRP)入大鼠的PVN和BNST,用组织化学的方法在确定注射部位准确的情况下,在PVN、BNST及PFC观察被标记的神经元或轴突末梢,探讨大鼠下丘脑室旁核(PVN)与终纹床核(BNST)及前额叶皮质间(PFC)之间是否存在投射通路;将HRP注射到PVN后,在同侧的BNST见标记的细胞体,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢;将HRP注射到BNST后,在同侧的PVN见标记的轴突末梢,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢。大鼠BNST有神经纤维投射到PVN,PFC与PVN及BNST之间没有直接的或只有极少量的纤维联系,在机体面临威胁性情境时,BNST可能激活HPA轴引发生理和行为反应,PFC是否通过与PVN或BNST的直接或间接的纤维投射实现其调节功能值得关注。

酶催化合成草浆木质素-对甲酚共聚物的研究

在反相微乳液体系 (十六烷基三甲基溴化铵 \正丁醇 \异辛烷 \水 )中 ,用辣根过氧化物酶催化合成木质素 对甲酚共聚物 ,证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明 ,木质素与对甲酚发生了聚合反应 ,差示扫描量热分析的结果也表明 ,引入对甲酚改善了木质素的热性能 ,合成的共聚物最高分子量可达

反相微乳液酶催化合成木质素-对甲酚共聚物

采用一种全新的反相微乳液体系 :十六烷基三甲基溴化铵 正丁醇 异辛烷 水 ,用辣根过氧化物酶催化合成木质素对甲酚共聚物 ,证实了反应的可行性。红外光谱的结果表明木质素与对甲酚发生了聚合反应 ,差示扫描量热分析的结果表明引入对甲酚改善了木质素的热性能。讨论了该聚合过程中酶浓度 ,活性剂浓度 ,W0 :c(H2 O) c(CTAB) ,酚浓度 ,木质素浓度 ,醇烃比对分子量的影响 .回归实验数据得出控制分子量大小的关联式 ,平均偏差为 8.7%。