期刊文献+
共找到35篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
Gut microbiome in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation and specific changes associated with acute graft vs host disease 被引量:2
1
作者 Quentin Le Bastard Patrice Chevallier Emmanuel Montassier 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2021年第45期7792-7800,共9页
Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(aHSCT)is a standard validated therapy for patients suffering from malignant and nonmalignant hematological diseases.However,aHSCT procedures are limited by potentiall... Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(aHSCT)is a standard validated therapy for patients suffering from malignant and nonmalignant hematological diseases.However,aHSCT procedures are limited by potentially life-threatening complications,and one of the most serious complications is acute graft-versus-host disease(GVHD).During the last decades,DNA sequencing technologies were used to investigate relationship between composition or function of the gut microbiome and disease states.Even if it remains unclear whether these microbiome alterations are causative or secondary to the presence of the disease,they may be useful for diagnosis,prevention and therapy in aHSCT recipients.Here,we summarized the most recent findings of the association between human gut microbiome changes and acute GVHD in patients receiving aHSCT. 展开更多
关键词 Gut microbiome dna sequencing technologies Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation TRANSPLANTS Acute graft vs host disease Biomarkers COMPOSITION Function
下载PDF
DNA含量测定方法在生物制品安全控制中的应用
2
作者 江燕 张俊杰 +2 位作者 雷雨 张成涛 周天宇 《科技创新与应用》 2023年第14期144-147,共4页
为避免宿主细胞残留DNA可能带来的致癌性、感染性与免疫原性等危害,有必要在生物制品生产过程中对DNA进行纯化去除与含量测定,保障生物制品的安全性和有效性。该文从残留DNA的危害性分析出发,介绍5种DNA含量测定方法在生物制品安全控制... 为避免宿主细胞残留DNA可能带来的致癌性、感染性与免疫原性等危害,有必要在生物制品生产过程中对DNA进行纯化去除与含量测定,保障生物制品的安全性和有效性。该文从残留DNA的危害性分析出发,介绍5种DNA含量测定方法在生物制品安全控制中的应用。 展开更多
关键词 dna含量测定 生物制品 安全控制 宿主细胞 残留dna
下载PDF
口腔粘膜癌前病变患者细胞DNA修复功能的检测 被引量:1
3
作者 林梅 岳玉敏 +4 位作者 李秉琦 周敏 夏娟 张纲 何园 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期213-215,共3页
目的 :探讨口腔粘膜癌前病变患者DNA修复水平的变化。方法 :采用宿主细胞再活化反应性检测癌前病变组和正常对照组的 16对配对病例 ,同时对吸烟、饮酒、家族史三项重要危险因素进行调查分析。结果 :癌前病变患者细胞再活化反应性显著低... 目的 :探讨口腔粘膜癌前病变患者DNA修复水平的变化。方法 :采用宿主细胞再活化反应性检测癌前病变组和正常对照组的 16对配对病例 ,同时对吸烟、饮酒、家族史三项重要危险因素进行调查分析。结果 :癌前病变患者细胞再活化反应性显著低于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,该项指标在癌前病变发生中属重要危险因素 ,OR为 3 2 5( 95 %CI=1 0 1~ 10 4 9)。结论 :宿主细胞再活化反应性可用于临床辅助判断癌前病变预后和针对性监控的指标。 展开更多
关键词 口腔粘膜癌前病变 dna修复功能 遗传易感性 宿主细胞再活化反应性
下载PDF
腺病毒介导的p33^(ING1b)过表达显著促进衰老细胞的DNA损伤修复 被引量:1
4
作者 鲁云彪 闫萌 +2 位作者 白俊海 徐洪亮 毛泽斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期744-749,共6页
p33ING1b是一个较晚发现的肿瘤抑制基因ING1的主要表达形式,但是它在细胞衰老过程中的作用特别是对衰老细胞DNA损伤修复的影响还没有被阐明.本研究首先用2BS细胞构建了细胞衰老模型,通过RTPCR和Western印迹技术证实p33ING1b在衰老细胞... p33ING1b是一个较晚发现的肿瘤抑制基因ING1的主要表达形式,但是它在细胞衰老过程中的作用特别是对衰老细胞DNA损伤修复的影响还没有被阐明.本研究首先用2BS细胞构建了细胞衰老模型,通过RTPCR和Western印迹技术证实p33ING1b在衰老细胞中的表达水平下调;然后,通过构建和包装包含p33ING1b基因的腺病毒,将p33ING1b导入年轻和衰老细胞中并使其过表达,用HCR(hostcellreactivation,宿主细胞复活)方法检测年轻细胞和衰老细胞DNA损伤修复能力.实验表明,相对于年轻细胞,p33ING1b过表达使衰老细胞的DNA的损伤修复能力显著增加,说明p33ING1b在衰老细胞中的表达下调与衰老细胞DNA损伤修复能力的下降有关,也进一步证实了p33ING1b在细胞衰老过程中起着十分重要的作用. 展开更多
关键词 细胞衰老 dna损伤修复 P33^ING1B 腺病毒 宿主细胞复活
下载PDF
多源化巨细胞病毒DNA定量检测在异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒肺炎诊断中的应用 被引量:2
5
作者 程昊钰 杨帆 +7 位作者 杨怡欣 张书芹 张永平 张维婕 费新红 殷宇明 顾江英 王静波 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期96-102,共7页
目的研究不同来源[血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)]标本的巨细胞病毒(CMV)DNA定量检测对异基因造血干细胞移植后CMV肺炎的诊断价值。方法回顾性分析接受异基因造血干细胞移植的405例受者的临床资料,其中诊断为CMV肺炎的19例受者设... 目的研究不同来源[血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)]标本的巨细胞病毒(CMV)DNA定量检测对异基因造血干细胞移植后CMV肺炎的诊断价值。方法回顾性分析接受异基因造血干细胞移植的405例受者的临床资料,其中诊断为CMV肺炎的19例受者设为CMV肺炎组,选择同期仅发生CMV血症的229例受者、接受纤维支气管镜镜检的11例非CMV肺炎受者及根据病原学证据确诊细菌或真菌性肺炎进行痰培养的16例受者,分别设为对照A、B、C组。总结CMV肺炎的发生情况;分析CMV肺炎受者不同来源(血浆、痰液、BALF)标本的CMV DNA载量;总结CMV肺炎受者的预后情况。结果405例异基因造血干细胞移植受者中有19例发生了CMV肺炎,CMV肺炎总体发生率为4.7%(19/405)。CMV肺炎受者的血浆、痰液、BALF的CMV DNA载量均分别高于对照A、B、C组(均为P<0.05)。19例受者中,有12例经抗病毒治疗后治愈,7例治疗失败死亡(其中3例放弃治疗),病死率为37%(7/19)。结论血浆、痰液、BALF的CMV DNA定量检测可提高CMV肺炎的诊断率,从而改善异基因造血干细胞移植受者的预后。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 巨细胞病毒(CMV) 肺炎 支气管肺泡灌洗液(BALF) dna定量检测 移植物抗宿主病 更昔洛韦 膦甲酸钠 CMV特异性静脉注射用免疫球蛋白(CMV-IVIG) CMV特异性细胞毒T淋巴细胞(CMV-CTL)
下载PDF
基于双荧光素酶报告基因的DNA损伤与修复检测系统的建立与应用
6
作者 张荣 牛玉杰 +3 位作者 樊龙刚 石磊 王茜 王秀荣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2013年第6期461-464,469,共5页
目的:建立一种能够同时对环境致癌物所致HepG2细胞DNA损伤和细胞对损伤DNA的修复能力进行快速检测的系统。方法:5μmol/L氯化镉体外损伤质粒pTK-RL,质粒pgadd153-luc和体外受损的质粒pTK-RL共转染到HepG2细胞中,以16种已知致癌物或3种... 目的:建立一种能够同时对环境致癌物所致HepG2细胞DNA损伤和细胞对损伤DNA的修复能力进行快速检测的系统。方法:5μmol/L氯化镉体外损伤质粒pTK-RL,质粒pgadd153-luc和体外受损的质粒pTK-RL共转染到HepG2细胞中,以16种已知致癌物或3种无遗传毒性的非致癌物刺激细胞,利用双荧光素酶检测方法同时检测DNA损伤和细胞的修复能力;双荧光素酶检测系统检测居民区、垃圾焚烧厂和农田3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物对DNA的损伤作用和细胞对该损伤的修复能力;彗星实验检测DNA的损伤。结果:双荧光素酶报告基因检测系统均可检出已知环境致癌物对DNA损伤与修复能力的影响,非致癌物均未检测到DNA损伤作用和对细胞DNA修复能力的影响;3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物均可诱导DNA损伤并抑制细胞对DNA损伤的修复能力,强度为居民区>垃圾焚烧厂>农田土壤。结论:在本研究条件下建立了可同时检测环境致癌物DNA损伤与细胞修复能力的双荧光素酶报告基因检测系统并可用于环境污染区检测。 展开更多
关键词 dna损伤 dna修复 宿主细胞恢复活性试验 双荧光素酶报告基因 致癌物质
下载PDF
宿主DNA对埃立克体病PCR诊断的抑制作用研究
7
作者 朱晓宇 张慧娟 +1 位作者 张建华 俞东征 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第3期422-425,共4页
目的:优化埃立克体病的PCR诊断方法。方法:构建含有查菲埃立克体16S rRNA基因片段的重组载体。比较巢式PCR和普通一步法PCR的灵敏度差异。用RAW 264.7细胞DNA模拟实验室诊断时的宿主细胞DNA,评估宿主细胞DNA对巢式PCR效率的影响。添... 目的:优化埃立克体病的PCR诊断方法。方法:构建含有查菲埃立克体16S rRNA基因片段的重组载体。比较巢式PCR和普通一步法PCR的灵敏度差异。用RAW 264.7细胞DNA模拟实验室诊断时的宿主细胞DNA,评估宿主细胞DNA对巢式PCR效率的影响。添加BSA作为优化剂,探讨BSA是否能降低宿主DNA的干扰。结果:巢式PCR可以扩增出特异性产物的最低模板量为10^3拷贝,一步法PCR是10^5拷贝。50-100 ng的宿主细胞DNA能够降低巢式PCR的效率。BSA可以降低宿主细胞DNA对PCR的抑制作用。结论:巢式PCR的灵敏度明显高于一步法PCR;BSA可以降低宿主细胞DNA干扰,提高PCR的效率。建议埃立克体病的诊断应尽量选择巢式PCR,必要时可加入适量的BSA以提高灵敏度。 展开更多
关键词 埃立克体病 PCR诊断 宿主细胞dna BSA
下载PDF
SAMHD1对HBV DNA形成的抑制作用及其机制研究
8
作者 程璐 王青青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1474-1477,共4页
目的:研究不同肝细胞SAMHD1表达水平及其对HBV DNA形成的抑制作用和相关机制。方法:通过实时荧光定量PCR和Western blot法检测Jurkat、THP-1、Hep G2、Hep G2.2.15和Huh7细胞等细胞SAMHD1 mRNA和蛋白表达水平;通过对Hep G2.2.15细胞转... 目的:研究不同肝细胞SAMHD1表达水平及其对HBV DNA形成的抑制作用和相关机制。方法:通过实时荧光定量PCR和Western blot法检测Jurkat、THP-1、Hep G2、Hep G2.2.15和Huh7细胞等细胞SAMHD1 mRNA和蛋白表达水平;通过对Hep G2.2.15细胞转染过表达质粒和shRNA,升高或者降低SAMHD1的表达水平,观察不同SAMHD1表达水平对HBV DNA水平的影响;补充不同浓度的d NTP,比较不同d NTP浓度对HBV DNA水平的影响。结果:肝癌细胞系有较高的SAMHD1表达水平;降低SAMHD1可以使HBV DNA水平升高2.3~2.8倍,升高SAMHD1可以使HBV DNA降低至33%左右(P<0.01);升高d NTP浓度可以促进HBV DNA的合成水平,抵消SAMHD1的抑制作用。结论:SAMHD1可以抑制肝癌细胞内HBV DNA的生成,可能是通过降低细胞内d NTP浓度实现的。 展开更多
关键词 SAMHD1 HBV 肝癌细胞 DNTP dna 宿主限制因子
下载PDF
生物制品宿主细胞残留DNA检测限定标准及方法浅析 被引量:8
9
作者 贾惠言 姚雪静 《药学研究》 CAS 2018年第2期115-118,共4页
近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然,在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程,其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管... 近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然,在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程,其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。同时,各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法,目前以实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法为最优,因其专一性强、灵敏度高、快速且可实现高通量。本文介绍了一些国内与国外监管机构出台的关于生物制品宿主细胞残留DNA检测的限定规定,并对现有的常见检测方法进行描述、总结和比较。 展开更多
关键词 生物制品 宿主细胞残留dna 实时定量聚合酶链式反应
下载PDF
Subversion of cellular stress responses by poxviruses
10
作者 Thiago Lima Leao Flávio Guimaraes da Fonseca 《World Journal of Clinical Infectious Diseases》 2014年第4期27-40,共14页
Cellular stress responses are powerful mechanisms that prevent and cope with the accumulation of macromolecular damage in the cells and also boost host defenses against pathogens. Cells can initiate either protective ... Cellular stress responses are powerful mechanisms that prevent and cope with the accumulation of macromolecular damage in the cells and also boost host defenses against pathogens. Cells can initiate either protective or destructive stress responses depending, to a large extent, on the nature and duration of the stressing stimulus as well as the cell type. The productive replication of a virus within a given cell places inordinate stress on the metabolism machinery of the host and, to assure the continuity of its replication, many viruses have developed ways to modulate the cell stress responses. Poxviruses are among the viruses that have evolved a large number of strategies to manipulate host stress responses in order to control cell fate and enhance their replicative success. Remarkably, nearly every step of the stress responses that is mounted during infection can be targeted by virally encoded functions. The fine-tuned interactions between poxviruses and the host stress responses has aided virologists to understand specific aspects of viral replication; has helped cell biologists to evaluate the role of stress signaling in the uninfected cell; and has tipped immunologists on how these signals contribute to alert the cells against pathogen invasionand boost subsequent immune responses. This review discusses the diverse strategies that poxviruses use to subvert host cell stress responses. 展开更多
关键词 POXVIRUS cell stress response Heat shock response CHAPERONES Unfolded protein response host translational control HYPOXIA Oxidative stress dna damage
下载PDF
重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较
11
作者 王光裕 胡倩 +3 位作者 史新昌 闫书美 周勇 刘宾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第5期527-531,共5页
目的采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较。方法分别采用DNase处理法和... 目的采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较。方法分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA,再进行核酸提取及qPCR检测。比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性。结果采用DNase处理的方式,DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量,DNase处理组为错误包装HCDNA量,二者差值为游离HCDNA残留量。DNase未处理和处理组回收率均为75%以上,重复性RSD小于30%。采用亲和提取方式,填料偶联亲和配基,结合rAAV,检测错误包装HCDNA回收率为75%以上,检测游离HCDNA回收率仅为36%。结论DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA,可为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 腺相关病毒 dna 亲和填料 PCR 宿主细胞dna 游离 错误包装
原文传递
首批HEK293细胞DNA含量测定国家标准品的制备
12
作者 王光裕 杨靖清 +4 位作者 魏长龙 周泽鑫 杨志行 黄钰 周勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第3期316-321,共6页
目的制备HEK293细胞DNA含量测定用国家标准品,以期为行业内HEK293细胞残余DNA的测定提供支持。方法使用Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备HEK293细胞DNA,以其为标准物质原料,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度和... 目的制备HEK293细胞DNA含量测定用国家标准品,以期为行业内HEK293细胞残余DNA的测定提供支持。方法使用Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备HEK293细胞DNA,以其为标准物质原料,采用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度和含量筛选,随后稀释至浓度约为100 ng/μL后,按160μL/支进行分装。组织5家不同实验室,采用紫外分光光度法进行协作标定,并评价其稳定性和适用性。结果制备的HEK293细胞DNA国家标准品经检测,A260/A280均在1.8~2.0之间,电泳图谱为单一条带,符合规定。该标准品经5家实验室协作标定,共得到78个有效数据,平均含量为104.8 ng/μL,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.2%,均数的95%可信区间为103.8~105.8 ng/μL,单次测定的95%参考值范围为96.0~113.6 ng/μL,平均可信限率为1.0%,推荐保存条件为-80℃。采用2个不同型号的荧光定量PCR仪进行适用性研究,该标准品在0.3~3000 pg/反应范围内适用性良好,扩增效率分别为101%和95%,标准曲线R^(2)分别为0.9992和0.9995。结论该批HEK293细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光定量PCR检测,含量定为104.8 ng/μL,批号为270039-202301。 展开更多
关键词 HEK293细胞 宿主残余dna 国家标准品 荧光定量PCR
原文传递
qPCR在重组腺相关病毒产品大片段宿主细胞残留DNA检测中的应用
13
作者 王光裕 史新昌 +3 位作者 杨靖清 李响 于雷 周勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期775-778,787,共5页
目的考察qPCR法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)基因治疗产品中大片段宿主细胞残留DNA(host cell residual DNA,HCD)的可行性。方法提取4种不同血清型rAAV核酸,采用qPCR法对宿主HEK293细胞基因组长末端重... 目的考察qPCR法检测重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)基因治疗产品中大片段宿主细胞残留DNA(host cell residual DNA,HCD)的可行性。方法提取4种不同血清型rAAV核酸,采用qPCR法对宿主HEK293细胞基因组长末端重复序列(long terminal repeat sequence,LTR)中244和562 bp两个片段序列进行特异性定量,计算HCD在基因组中的占比。结果可在qPCR法定量限范围内检出4种不同血清型rAAV样品大片段HCD,占比为0.3%~5.4%,且随着检测片段长度增加,占比呈降低趋势。结论qPCR技术可用于rAAV产品中大片段HCD的检测。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 重组重组腺相关病毒 基因治疗产品 宿主细胞残留dna
原文传递
Cell host microbe:结合杆菌DNA激活CGAMP—STING信号机制
14
《现代生物医学进展》 CAS 2015年第24期I0004-I0004,共1页
在抗病毒天然免疫的基础研究领域,cGAS与cGAMP是近几年来非常重要的发现之一。来自美国西南医学中心的陈志坚教授研究组第一次发现了cGAMP是传递DNA病毒感染的天然免疫信号的关键分子。当病毒感染天然免疫细胞时,胞浆中的cGAS能够与病... 在抗病毒天然免疫的基础研究领域,cGAS与cGAMP是近几年来非常重要的发现之一。来自美国西南医学中心的陈志坚教授研究组第一次发现了cGAMP是传递DNA病毒感染的天然免疫信号的关键分子。当病毒感染天然免疫细胞时,胞浆中的cGAS能够与病毒DNA结合并促进cGAMP的产生,而cGAMP能够与内质网表面的STING蛋白相互作用,从而促进Ⅰ型干扰素的分泌。 展开更多
关键词 病毒dna 信号机制 cell host 激活 杆菌 天然免疫 蛋白相互作用
原文传递
乙型肝炎重症化患者的中医体质及免疫学指标研究进展
15
作者 蓝艳梅 王娜 +2 位作者 毛德文 张荣臻 王明刚 《中医药导报》 2018年第9期110-112,118,共4页
从中医体质分类标准及影响体质分布的因素、乙型肝炎发生发展的机制、中医体质与免疫指标的相关性几方面进行综述,认为慢性乙型肝炎重症化患者中医体质分布受多种因素影响,慢性乙型肝炎重症化患者疾病发生、发展及演变主要是宿主、病毒... 从中医体质分类标准及影响体质分布的因素、乙型肝炎发生发展的机制、中医体质与免疫指标的相关性几方面进行综述,认为慢性乙型肝炎重症化患者中医体质分布受多种因素影响,慢性乙型肝炎重症化患者疾病发生、发展及演变主要是宿主、病毒作用的结果,且CD4^+、CD8^+水平在各中医体质类型中有明显差异。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎重症化 中医体质 宿主 HBV-dna CD4^+T细胞 CD8^+T细胞
下载PDF
SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法的建立及验证
16
作者 程小玲 施金荣 +4 位作者 张雪婷 申瑷琳 何婧雯 程尧 段凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期839-843,共5页
目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法,并进行验证,以期更好地控制产品安全性。方法 通过磁珠法对SARS-CoV-2... 目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法,并进行验证,以期更好地控制产品安全性。方法 通过磁珠法对SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)原液进行DNA提取,采用探针型PCR对宿主细胞DNA残留量进行定量分析。对建立的方法进行线性范围、重复性、中间精密度、定量限、专属性、耐用性、准确度验证,并使用该方法对5批SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)进行宿主细胞DNA残留量检测。结果 DNA标准曲线在300~0.003 pg/μL范围内线性良好(R~2均≥0.99);重复性和中间精密度验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<20%;定量限为0.001 pg/μL;样品稀释液与纯化液稀释液对检测无干扰;样品于53、55、57℃条件下孵育60 min及55℃条件下孵育56、60、64 min的检测结果无明显差异;准确度验证回收率在79%~83%,RSD <5%。用该方法检测SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)原液中DNA残留量适应性良好。结论 成功建立了SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法,该方法线性范围、重复性、中间精密度、定量限、专属性、耐用性和准确度均符合可接受标准,适用于SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量的检测及质量控制。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞) 宿主细胞dna残留 荧光定量PCR
原文传递
对斑点杂交方法检测治疗性单克隆抗体制品中残留宿主细胞DNA含量的影响因素研究 被引量:3
17
作者 张峰 郭玮 +2 位作者 张晶 孟淑芳 王佑春 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期111-115,119,共6页
目的:对斑点杂交方法检测重组生物制品中残留宿主细胞DNA含量试验中的6个影响因素进行评价。方法:对不同的样品稀释液,样品中是否含有蛋白,含蛋白样品是否采用蛋白酶K处理,采用不同方法预处理的模板DNA作为标记用模板,采用不同体积的离... 目的:对斑点杂交方法检测重组生物制品中残留宿主细胞DNA含量试验中的6个影响因素进行评价。方法:对不同的样品稀释液,样品中是否含有蛋白,含蛋白样品是否采用蛋白酶K处理,采用不同方法预处理的模板DNA作为标记用模板,采用不同体积的离心管进行探针标记,分别采用不同的杂交温度,共计6个因素对检测结果的影响进行评价。结果:在使用随机标记的探针通过斑点杂交方法检测重组生物制品中残留宿主细胞DNA含量试验中:标准品和样品稀释中使用水进行稀释时结果可信度较高;样品中含有蛋白会降低检测的灵敏度;在含蛋白样品中加入蛋白酶K处理可以在一定程度上提高检测的灵敏度;使用超声处理的模板DNA作为探针标记的模板时,检测灵敏度较高,同时背景较低;探针标记过程中应采用0.2 mL薄壁PCR管作为容器以保证试验成功率;最适的杂交温度为42℃左右。结论:在斑点杂交方法检测治疗性单克隆抗体制品中残留宿主细胞DNA含量中,采用水作为稀释液,对含蛋白样品使用蛋白酶K消化,标记用模板DNA使用超声处理,使用0.2 mL薄壁PCR管作为标记反应管和在42℃杂交时,结果的稳定性和灵敏度有较大提高。 展开更多
关键词 重组生物制品 单克隆抗体 残留宿主细胞 dna含量 地高辛标记 斑点杂交法 影响因素
原文传递
游离缘指甲DNA检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合状态的变化 被引量:2
18
作者 刘红星 王芳 +13 位作者 田文君 喻新建 朱娟 韩旭 滕文 徐国林 王岩 顾江英 赵艳丽 孙媛 孙瑞娟 胥方 童春容 朱平 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期23-26,共4页
目的 探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后用患者指甲游离缘标本进行短片段重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型和供受者嵌合率检测的适用性,并观察移植后患者指甲... 目的 探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后用患者指甲游离缘标本进行短片段重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型和供受者嵌合率检测的适用性,并观察移植后患者指甲中供受者嵌合状态变化.方法 选取2009年7月至2011年9月在北京市道培医院行allo-HSCT的25例患者及25名供者.采集患者及其供者外周血、骨髓、指甲游离缘和口腔黏膜标本.提取标本中基因组DNA,进行15个STR位点的基因分型和嵌合状态分析.将患者分为2组:第1组包括12例患者,在接受allo-HSCT后1个月内分别同时采集患者的指甲游离缘标本和口腔黏膜标本,并做嵌合状态的比较;第2组包括13例患者,观察患者行allo-HSCT后3个月指甲标本中的嵌合状态,并对其中3例患者进行多次指甲标本采集和嵌合状态检测.结果 在第1组12例患者中,指甲标本均检测为患者自身的STR基因型;在4份口腔黏膜标本中检测到供受者混合嵌合状态,供者STR基因型所占比例分别为16.7%、32.1%、35.8%和60.7%.在第2组13例患者中,5例患者存在供受者细胞的混合嵌合状态,即受者指甲中出现供者的STR基因型,嵌合率在6.7%至82.6%之间.3例行allo-HSCT后多次检测指甲嵌合率的患者中,1例始终未检测到供者基因型的嵌合,另2例患者中检测到持续存在的供者基因型的嵌合.结论 移植后1个月内采集的指甲游离缘标本可用于患者STR基因型鉴定和供受者嵌合率分析,优于口腔黏膜标本.供者的移植物中具有可以分化成为皮肤组织的细胞,部分患者移植后皮肤中可长期存在供者来源细胞的嵌合状态. 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 指甲dna 嵌合状态 短片段重复序列 移植物抗宿主反应
原文传递
CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-Taqman探针法)的方法学验证 被引量:3
19
作者 吕萍 杨志行 +4 位作者 张慧 宗伟英 吴婉欣 王滔 梁成罡 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第21期2519-2526,共8页
目的:中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞DNA残留检测(PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法:利用磁珠分离法结合Taqman探针定量PCR技术,对自主研制的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性... 目的:中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞DNA残留检测(PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法:利用磁珠分离法结合Taqman探针定量PCR技术,对自主研制的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限、参考品DNA标定等验证。特别针对残留定量限、蛋白浓度、pH值、缓冲体系等关键影响因素,以及生产工艺各中间品进行回收率考察,验证试剂盒对复杂样品的检测性能。选取采用不同工艺的多个重组蛋白产品,通过独立三方协作标定,开展试剂盒的适用性研究。结果:DNA标准曲线在3 fg·μL-1~300 pg·μL-1范围内,线性良好(R2> 0. 99);对5个浓度梯度检测的准确度偏差均<10%;定量限为0. 5 fg·μL-1;内部参考品DNA标定结果为10μg·m L-1;精密度良好(RSD≤15%);大鼠、小鼠、大肠杆菌、人类基因组DNA对检测无干扰。另外,对于样品中DNA含量在1pg·m L-1~10 ng·m L-1、pH值在4~9,采用磷酸缓冲体系、Tris缓冲体系、醋酸缓冲体系、柠檬酸缓冲体系等多种基质样品,以及生产工艺中间品的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。3个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论:自主研发CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(荧光探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足复杂基质条件下各种重组制品的宿主DNA残留检测要求。 展开更多
关键词 CHO宿主细胞dna残留检测试剂盒 PCR-Taqman探针法 方法验证
原文传递
定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证 被引量:1
20
作者 武刚 付志浩 +4 位作者 杨志行 崔永霏 张荣建 宗伟英 王兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期2001-2009,共9页
目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行... 目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。 展开更多
关键词 NS0 dna标准品 NS0宿主细胞dna残留检测 PCR-Taqman探针法 方法验证
原文传递
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部