Hovenia acerba Lindl.peduncles and seeds extracts ameliorate alcoholic liver injury by activating the Nrf2/HO-1 signalling pathway in LO2 cells and mice

Hovenia acerba Lindl.(HA)was formerly used as a treatment for alcohol overdosing.To explore the mechanism of hepatoprotective effect of HA,the chemical components of Hovenia acerba Lindl.peduncles extract(HAPE)and Hovenia acerba Lindl.seeds extract(HASE)were compared by UPLC-QTOF-MS.Moreover,the alcohol damage model of human normal hepatocytes(LO2)and male Kunming mice were used to measure their effects on alcoholic liver damage.Results showed that HASE had 32 kinds of phenolic compounds,and the main components were caffeic acid,vitexin-2′′-O-glucoside,ferulic acid hexoside,quercetin and its glycosides;HAPE had 24 kinds of phenolic compounds,and the main components were caffeic acid,kaempferol and chrysophano.The phenolic content of HASE(151.73±12.66 mg gallic acid equivalent per gram of dry weight)(mg GAE/g DW)was higher than that of HAPE(17.89±1.59 mg GAE/g DW).HASE and HAPE could increase the LO2 cell viability in the alcohol damage models.Moreover,the levels of triacylglycerol(TG),total cholesterol(TC),alanine aminotransferase(ALT),and aspartate aminotransferase(AST)were decreased,the activities of superoxide dismutase(SOD)and catalase(CAT)were increased,and the concentration of malondialdehyde(MDA)was decreased in both HASE and HAPE treated cell and mice groups.Results also showed that the concentration of reduced glutathione(GSH)and the activity of glutathione peroxidase(GSH-Px)were increased in mice.HASE and HAPE raised the mRNA expressions of nuclear factor erythroid-2 related factor 2(Nrf2)and activated antioxidant-related genes:heme oxygenase-1(HO-1),NADPH quinone acceptor oxidoreductase 1(NQO1),and glutamate-cysteine ligase modifier subunit(GCLM),and enhanced the expression of Nrf2 and HO-1 proteins.HASE and HAPE could also increase antioxidant activity by enhancing Nrf2-mediated inducible expression of HO-1 to protect hepatocytes from injury.Furthermore,HASE showed better liver protective effect than HAPE.This study demonstrated the protective benefits of Hovenia acerba Lindl.peduncles and seeds extracts on alcoholic liver injury.

枳椇种子休眠原因及解除方法

从枳椇种子的种皮结构和透性、离体胚萌发等方面开展种子休眠原因的研究，同时采取低温层积、浓硫酸处理、机械处理等方法研究枳椇种子休眠解除技术。结果表明：枳椇种子种皮结构致密，透水性差是抑制种子萌发的主要原因，种子休眠类型为物理休眠（ PY）。低温层积75 d枳椇种子的发芽率达到72％，层积90 d种子发芽率达到76％，且发芽速度更快；浓硫酸处理5～25 min，种子发芽率在76％～81％，各处理种子的发芽率没有差异，但浓硫酸处理30 min对种子明显产生伤害，发芽率仅为64％；切除部分种皮的种子在置床后4 d开始萌发，发芽速度与层积90 d的发芽速度一致，置床16 d后萌发结束，发芽率为80％；擦伤种子表面的种子置床后6 d开始萌发，发芽率为73％。

枳椇子各部位清除羟自由基作用的比较

目的比较枳木具子不同提取部位对羟自由基的清除作用。方法采用邻二氮菲氧化法,检测枳子不同提取部位对体系产生的羟自由基的清除作用。结果枳木具子乙酸乙酯部位的羟自由基清除率为11.7%,总提取物的羟自由基清除率为13.6%,剩余物的羟自由基清除率为-6.5%。结论枳子清除羟自由的有效部位集中在乙酸乙酯部位。

枳椇种子生活力的四唑测定方法

通过对枳椇种子不同预处理、不同的TTC浓度和染色时间的设定,研究枳椇种子生活力测定的最佳条件。结果表明:四唑染色法能够准确的检测种子的生活力,测定的适宜条件为在远离胚根部位切除少部分种子组织后,室温条件下浸种24 h,去除种皮。在30℃环境下,采用0.25%的TTC溶液染色4 h,或0.75%TTC溶液染色2 h。

不同处理对拐枣种子发芽的影响

通过对拐枣种子吸水性的初步研究,利用机械处理、酸蚀、低温裸层积以及赤霉素浸种等方法进行种子发芽试验,探寻拐枣种子休眠的原因并寻求相应的破眠方法。结果表明,(1)休眠原因主要是种皮障碍;(2)机械处理中,沙磨、破裂种皮均可打破休眠,以沙磨效果更佳,发芽率达46.27%;(3)酸蚀10min后经低温裸层积30天能有效提高种子发芽率,发芽率达64.26%,但是单独低温裸层积30天处理会抑制拐枣种子萌发;(4)GA_3处理种子表现出低浓度抑制、高浓度促进的趋势,效果最佳处理是500mg/L GA_3浸种10min,发芽率达30.56%。(5)综合处理中,以浓硫酸预处理20min后400mg/L GA_3浸种24h破眠处理萌发最好,种子发芽率达77.96%。

多重连接探针扩增技术鉴别酸枣仁及混伪品的研究

目的:针对市场上出现的酸枣仁药材掺假现象,开发一种快速鉴别酸枣仁药材是否含有掺伪品的方法。方法:基于多重连接探针扩增技术(MLPA),针对酸枣仁与理枣仁ITS2序列205位点处A/G变异,以及枳椇子170位点分别设计酸枣仁、理枣仁与枳椇子的MLPA探针,MLPA扩增后依据熔解曲线Tm值差异来进行鉴别,并考察了特异性、敏感度、掺伪比等内容,以验证该方法的可行性。结果:酸枣仁、理枣仁和枳椇子分别与特异性探针在85.56℃、87.26℃和83.93℃处出现单一扩增峰,表明探针特异性好;通过不断稀释DNA模板,仍旧可以检测出0.05 ng酸枣仁DNA量,同样酸枣仁中掺入10%的伪品均可被有效检出,表明该方法具有高灵敏度。结论:该研究建立的酸枣仁药材及其混伪品鉴别方法具有特异性强、灵敏度高的特点,对于解决酸枣仁药材掺伪问题具有良好的推广应用价值。

ICP-MS法测定黔产枳椇果梗、枳椇子中22种金属元素

建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法同时分析枳椇果梗、枳椇子中Be、Mg、Al、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、As、Sr、Mo、Ag、Cd、Sn、Sb、Ba、Tl、Pb等22种元素的含量。样品经微波消解后,利用ICP-MS测定上述22种元素,通过标准曲线计算其含量。实验结果表明,22种元素在其线性范围内线性关系良好,r值>0.995;检出限为0.0007~1.0713μg/L;重复性的相对标准偏差(RSD)<3%;精密度的相对标准偏差(RSD)<7%;回收率为81.14%~112.91%。该方法灵敏度高,重复性好,分析速度快,适用于枳椇果梗、枳椇子中22种元素的含量测定。

葛枳颗粒剂的制备及其体外酶活性研究

优化葛枳颗粒剂的制备工艺,并检测葛枳颗粒对乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性的影响。以颗粒的成型率、休止角、堆密度、吸湿率、溶化率作为考察指标,在单因素试验基础上,通过响应面优化试验筛选辅料的种类、配比、用量及最佳制备工艺,并对制得的颗粒剂进行相关品质检查,检测不同浓度的葛枳颗粒对ADH和SOD活性的影响。最佳制备工艺条件为:稀释剂配比为微晶纤维素:糊精1:1.5(g/g),浸膏粉与稀释剂配比为1:1(g/g),矫味剂配比为果糖:阿斯巴甜1:1(g/g),润湿剂为81%乙醇溶液,制得的颗粒剂颗粒均匀,色泽一致,水分、流动性、溶化性等均符合颗粒剂的质量标准。当葛枳颗粒剂浓度为1、5、10 mg/mL时,ADH的酶活力分别为4673.62、6940.97、13248.49U/mL,SOD的酶活力分别为0.00536、0.0104、0.0193U/mL。结果表明:优选出的葛枳颗粒剂制备工艺是稳定、可行的,葛枳颗粒对ADH和SOD活性均有一定的促进作用,并且随着颗粒剂浓度的增加,ADH和SOD活性逐渐增强。研究可为葛枳颗粒剂制粒工艺条件的确定及工业化生产提供试验依据。