斑马鱼hoxb3a基因在早期心脏发育中的功能分析

为探究hoxb3a基因在斑马鱼(Danio rerio)心脏早期发育中的调控作用,利用基因沉默技术(Morpholino)对斑马鱼胚胎进行hoxb3a基因敲降,并结合显微镜观察分析、实时荧光定量PCR、原位杂交技术分析hoxb3a基因对斑马鱼心脏发育的影响。结果表明:hoxb3a基因敲降组(hoxb3a morphant)出现心包腔肿大、心脏环化角度异常和心房心室形态改变等现象;原位杂交试验确定了hoxb3a基因在不同时空的表达区域,其表达位置的变化与神经嵴细胞参与心脏发育的形成有关;在受精后3 d,与对照组相比,hoxb3a基因敲降组胚胎一些心脏关键基因的表达量发生变化,其中心脏祖细胞相关基因nkx2.5、gata4及房室形成关键基因nppa的表达量均具有显著升高的趋势,同时与神经嵴发育相关的fgf8a基因表达量也明显升高。研究表明,hoxb3a基因在斑马鱼胚胎的早期心脏发育中,通过调控nkx2.5、gata4、nppa与fgf8a等相关转录因子的表达,参与斑马鱼早期心脏发育的过程,本研究结果为早期心脏发育研究提供了新思路。

团头鲂HoxB3a基因全长cDNA克隆及表达

Hox基因是脊椎动物一类重要的生长和发育调节基因,其所编码具螺旋-转角-螺旋结构的转录因子能与靶基因特定区域DNA结合,从而调节动物胚胎发育过程中体轴的形成和器官组织的生长。本研究采用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了团头鲂HoxB3a的全长cDNA,并对团头鲂不同时期的胚胎和成鱼的不同组织进行了RT-PCR分析,以探索HoxB3a基因的时空表达特征。序列比对分析结果显示,团头鲂HoxB3a编码的氨基酸序列与斑马鱼(Danio rerio)、大西洋鲑(Salmo salar)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)、青鳉(Oryzias latipes)、条纹鲈(Morone saxatilis)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的相似性分别为96%、85%、77%、76%、78%、66%和67%,同源性较高,这说明HoxB3a基因在长期的进化中具有较高保守性。RT-PCR结果表明,团头鲂HoxB3a基因从16 hpf(hours post fertilization)胚胎期到出苗期都有表达,在成鱼大部分器官或组织中具表达活性,预示该基因存在着重要的生物学功能。Hoxb3a基因全长cDNA的克隆、胚胎不同阶段表达及组织细胞表达特征研究,为进一步探索该基因的发育通路奠定了基础。

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

HOXB3在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨HOXB3在结直肠癌中的表达及与结直肠癌患者的临床病理特征的相关性。方法用免疫组化的方法检测209例结直肠癌患者肿瘤组织中HOXB3的表达水平,分析HOXB3表达水平及与临床病理特征的相关性以及分析HOXB3的表达水平与生存预后的相关性。结果 HOXB3蛋白的表达阳性率为72.7%(152/209),强阳性率48.3%(101/209)。进一步相关性分析发现:HOXB3表达与结直肠癌的临床分期、T分期、N分期显著相关,与患者性别、年龄无显著相关性;生存分析表明HOXB3高表达的患者生存时间更短。结论 HOXB3在结直肠癌组织及转移组织中表达明显上调,HOXB3高表达与结直肠癌的临床分期及不良预后密切相关,提示HOXB3在肿瘤发展及转移中可能扮演重要角色。

妊娠高血压疾病患者胎盘组织中miR-1233和HoxB3的表达水平及临床意义

目的探讨妊娠高血压疾病患者胎盘组织中miR-1233和Hox B3的表达水平及临床意义。方法妊娠期高血压疾病孕妇98例为病例组,其中妊娠高血压28例、子痫前期轻度34例、子痫前期重度36例,同期选择健康孕妇76例为对照组,实时荧光逆转录法测定病例组及对照组miR-1233 mRNA、Hox B3 mRNA水平,酶联免疫吸附法及免疫组化方法测定miR-1233、Hox B3蛋白水平。结果妊娠高血压、子痫前期轻度、子痫前期重度组miRNA-1233 mRNA高于对照组,HOXB3 mRNA低于对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05);而随着妊娠高血压疾病严重程度的增加,miRNA-1233 mRNA表达水平逐渐升高,HOXB3 mRNA表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P <0. 05);妊娠高血压、子痫前期轻度、子痫前期重度组miRNA-1233蛋白高于对照组,HOXB3蛋白低于对照组,差异均有统计学意义(P<0. 05);而随着妊娠高血压疾病严重程度的增加,miRNA-1233蛋白表达水平逐渐升高,HOXB3蛋白表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P <0. 05);妊娠高血压严重程度与miRNA-1233 mRNA、miRNA-1233蛋白表达呈正相关(r值分别为0. 491、0. 413,P <0. 05),与HOXB3 mRNA、HOXB3蛋白表达呈负相关(r值分别为-0. 434、-0. 429,P <0. 05)。结论妊娠高血压疾病患者胎盘组织中miR-1233表达水平升高,Hox B3表达水平降低,且与疾病的严重程度先关明显。

重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rHuEPO)调节体外培养内皮细胞参与血管生成机制。方法从人脐静脉体外分离培养内皮细胞(HUVEC),采用形态学观察及血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)免疫组织化学方法检测进行内皮细胞鉴定,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HUVEC同源盒HoxB2及HoxD3基因mRNA表达变化。结果与对照组比较,rHuEPO可明显上调内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rHuEPO可调节内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达,这种调节作用可能是其促血管生成的主要原因之一。

miR-373靶向调控同源异型盒基因B3表达影响子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学特性的实验研究

目的探讨微小RNA(miR)-373靶向调控同源异型盒基因B3(HOXB3)表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法本研究起止时间为2018年2月至2019年6月,将体外培养的Ishikawa细胞分为抑制剂阴性对照(inhibitorNC)组(转染inhibitor-NC)、miR-373抑制剂(inhibitor)组(转染miR-373 inhibitor)、miR-373 inhibitor+siNC组(共转染miR-373 inhibitor和NC siRNA)和miR-373 inhibitor+siHOXB3组(共转染miR-373 inhibitor和HOXB3 siRNA),采用实时荧光定量PCR检测Ishikawa细胞中miR-373的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-373和HOXB3的靶向关系,采用免疫印迹法检测Ishikawa细胞中HOXB3蛋白的表达,细胞计数(CCK-8)法、Transwell实验和膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测各组细胞增殖、侵袭和凋亡能力。结果HOXB3是miR-373的靶基因。与inhibitor-NC组相比,miR-373 inhibitor组、miR-373 inhibitor+siNC组和miR-373 inhibitor+siHOXB3组细胞中miR-373表达水平[(1.00±0.11)比(0.32±0.02)/(0.36±0.03)/(0.34±0.03)]和细胞增殖活力[24 h(0.63±0.04)比(0.41±0.03)/(0.43±0.03)/(0.52±0.03);48 h(0.97±0.06)比(0.68±0.05)/(0.72±0.06)/(0.85±0.05);72 h(1.35±0.11)比(0.88±0.08)/(0.92±0.07)/(1.12±0.09)]、穿膜细胞数[(85.26±8.72)个比(37.64±2.85)个/(40.55±3.23)个/(61.38±3.64)个]均明显降低,而细胞凋亡率[(8.75±1.23)%比(25.64±3.38)%/(28.48±3.26)%/(14.25±2.02)%]和细胞中HOXB3蛋白的表达水平[(0.27±0.03)比(0.77±0.06)/(0.73±0.06)/(0.51±0.03)]均明显升高(P<0.05);且miR-373 inhibitor+siHOXB3组中各指标的变化强度明显低于miR-373 inhibitor组(P<0.05);而miR-373 inhibitor+siNC组和miR-373 inhibitor组之间无明显差异(P>0.05)。结论下调miR-373表达可通过靶向HOXB3抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡。

长链非编码RNA在急性髓系白血病发病中作用机制的研究进展

急性髓系白血病(AML)是多种因素引起的造血系统恶性疾病,常伴随重现性遗传学异常或突变。由于AML发病率及病死率逐年增高,长链非编码RNA(lncRNA)作为其发病机制中的重要一环也得到了重视。lncRNA是目前发现的一种不具有编码蛋白质能力的RNA,参与了染色体失活、染色体修饰、基因印记、细胞分化调控及细胞周期调控等生物过程,其来源多种多样,包括癌症易感性候选者15、长链非编码RNA HOXB簇反义RNA3、人H19基因、homeobox反义基因RNA、INK位点反义非编码RNA、SBF2的反义RNA、长基因间非编码RNA 00662等,其通过不同的作用机制在AML发病中发挥重要的作用,与AML的发生、发展、预后、复发密切相关。

miR-1233和HoxB3在复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对血清血管内皮生长因子的影响

目的:探讨miR-1233和HoxB3在复发性流产(RM)患者及人工流产患者绒毛组织中表达水平的差异以及其对血浆血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:选择2017年3月—2019年3月在妇产科就诊的RM患者为观察组,共90例,分为观察1组(自然流产2次)、观察2组(自然流产3次)和观察3组(自然流产≥4次),每组30例。选择同期意外妊娠行人工流产的30例患者为对照组(无自然流产史及其他不良妊娠史且非人工受孕等)。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组患者绒毛组织中miR-1233,HoxB3的mRNA表达水平。用酶联免疫法(ELISA)分析各组血清中VEGF的差异。结果:与对照组比较,观察1,2,3组绒毛中miR-1233的表达明显增高,HoxB3和VEGF的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在观察1,2,3组间比较,可以看出随着流产次数的增加,绒毛中miR-1233的表达逐渐增高,HoxB3和VEGF的表达越来越低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:推测在复发性流产绒毛中高表达的miR-1233,一方面可加速滋养细胞的凋亡,另一方面通过抑制HoxB3的表达,影响VEGF的合成分泌,从而减慢绒毛组织细胞的增殖分化,加快胚胎组织凋亡,最终导致妊娠失败。

红花注射液对白血病HEL细胞增殖和凋亡的影响及相关机制探讨

目的研究红花注射液对白血病HEL细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法 HEL细胞随机用或不用红花注射液处理,不用红花注射液处理者为对照组。不同浓度(10、20、30、40、50 mg/m L)的红花注射液作用于HEL细胞24、48、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力;10、20、30 mg/m L红花注射液处理HEL细胞48 h后,采用流式细胞术检测各组细胞细胞周期与凋亡的变化,RT-PCR法检测细胞HOXB3 m RNA的表达。结果 HEL细胞经浓度为10、20、30、40、50 mg/m L的红花注射液处理24、48及72 h后,与对照组比较,细胞增殖均不同程度地受抑制,且随着红花注射液浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P<0.05)。不同浓度红花注射液作用HEL细胞48 h后,细胞周期的分布发生改变,与对照组相比G2/M期细胞数显著增多,S期细胞数显著减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。随着红花注射液浓度的增加,细胞凋亡率增加,以浓度依赖的方式诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组比较,各浓度红花注射液组HEL细胞中HOXB3 m RNA表达均下降(P<0.05)。结论红花注射液体外可有效抑制HEL细胞的增殖并诱导其凋亡,其相关分子机制可能与下调HOXB3基因的表达有关。

miRNA-218对宫颈癌细胞迁移和上皮间质化的影响

目的探讨miRNA-218靶向Hoxb3对宫颈癌细胞迁移和上皮间质化的影响.方法采用双荧光素酶报告基因法分析miRNA-218-5p对Hoxb3 mRNA的靶向特异性.然后构建miRNA-218慢病毒载体,包装慢病毒,感染宫颈癌高转移性细胞系Caski,建立miRNA-218-5p稳定细胞系(实验组)和对照细胞系(对照组).采用Western blot分析对照组和实验组细胞Hoxb3、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达;采用双荧光素酶报告基因实验分析miRNA-218对其靶基因的影响;采用Transwell分析对照组和实验组细胞的侵袭能力;体内成瘤实验分析对照组细胞和实验组细胞的肿瘤生长和转移情况.结果双荧光酶报告基因显示,与对照组比较,miRNA-218能与Hoxb33'-UTR结合,并下调荧光素酶的活性,差异具有统计学意义(t=2.918,P<0.05).与对照组相比,实验组细胞系Hoxb3、E-cadherin表达水平显著下调,而Vimentin和Snail蛋白表达水平则显著增加,差异具有统计学意义(t值分别为3.011、1.981、2.819和3.109,P值均<0.05).实验组细胞侵袭能力较对照组细胞明显下降,差异有统计学意义(t=4.120,P<0.05).实验组细胞在体内移植后肿瘤体积和淋巴结转移病灶较对照组明显下降,差异具有统计学意义(t值为2.819和3.991,P值均<0.05).结论 miRNA-218靶向下调Hoxb3蛋白表达,移植宫颈癌细胞的侵袭和上皮间质化.

复发性流产患者绒毛组织中Hox B3、TSP-1和Syncytin-1的表达及与微血管密度关系分析

目的探讨HoxB3、血小板反应蛋白1(TSP-1)及人合胞素1(Syncytin-1)在复发性流产患者绒毛组织中的表达及其与血管生成的关系。方法选择2018年2月至2020年2月青岛市市立医院接诊的89例复发性流产患者为研究对象,设为试验组,并选择青岛市市立医院同期体检健康孕妇80例作为对照组,分析绒毛组织中HoxB3、TSP-1及Syncytin-1在复发性流产患者中表达情况及与血管生成的关系。结果试验组患者绒毛组织HoxB3、TSP-1及Syncytin-1表达量灰度值水平均显著低于对照组(P<0.05);两组蜕膜组织切片微血管密度水平比较无显著差异;试验组患者绒毛组织切片中微血管密度水平均显著低于对照组(P<0.05);相关性分析结果显示,微血管密度和HoxB3、TSP-1及Syncytin-1之间均呈正相关(r=0.786,0.781,0.807,P<0.05)。结论在复发性流产患者绒毛组织中HoxB3、TSP-1及Syncytin-1水平异常表达可能与血管生成障碍有关。