lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA)HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株h FOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平。用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响。结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P<0.01)。与h FOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03±0.98)vs(6.96±0.54),(4.68±0.77)vs(8.87±1.23),均P<0.01]、迁移细胞数[(83.00±6.03)vs(168±12.54),(96.00±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P<0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48)vs(97.00±8.32),(38.00±1.73)vs(87.00±6.37)个,均P<0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01)。结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点。

HOXA11在人子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及与不育的关系

目的检测HOXA11蛋白在正常月经周期子宫内膜、早孕蜕膜和不明原因不育子宫内膜组织中的表达,探讨HOXA11与不明原因不育及雌孕激素受体(ER、PR)表达的相关性。方法采用免疫组织化学和Western-Blot方法对38例正常子宫内膜、15例早孕蜕膜和19例不明原因不育子宫内膜组织中HOXA11、ER及PR的表达。结果HOXA11蛋白在子宫内膜腺上皮和基质细胞均有表达,以分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜表达量较高;在不育内膜的表达量显著降低(P<0.05);ER、PR在各组表达量的变化与HOXA11相同,即分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜的表达量较高,而在不育内膜的表达量显著下降(P<0.05)。结论HOXA11基因在着床期子宫内膜的分化、发育以及着床后妊娠的维持起一定作用;HOXA11表达量下降与ER、PR表达量降低相关;HOXA11表达下降或缺失可能是女性不明原因不育的原因之一。

月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异

目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达。结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量最高。结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化最显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加。提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同。

HOXA11-AS在胃癌中的表达及其功能研究

目的探讨长链非编码HOXA11-AS在胃癌及癌旁正常组织中的表达及其在胃癌细胞系中的生物学功能。方法实时荧光定量PCR验证胃癌组织及胃癌细胞系中HOXA11-AS的表达量;核质分离实验及荧光定量PCR检测胃癌细胞胞核与胞质中HOXA11-AS的分布量,明确HOXA11-AS的亚细胞定位;用慢病毒构建HOXA11-AS过表达质粒,筛选稳转株进行细胞功能学实验:细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期、细胞迁移能力、细胞侵袭能力。结果 HOXA11-AS在胃癌组织及胃癌细胞的表达量升高(P<0.05);核质分离实验表明,HOXA11-AS在胃癌细胞胞质的分布量高于细胞核(P<0.05);过表达lncRNA HOXA11-AS可促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05),抑制细胞凋亡及阻滞细胞周期。结论 HOXA11-AS在胃癌中高表达,可促进胃癌细胞的肿瘤细胞行为,可作为胃癌治疗的候选分子靶点。

原位杂交检测同源框基因HoxA11在人月经周期子宫内膜的表达

了解 Hox A1 1基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化 ,探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的 RNA探针进行原位杂交。 Hox A1 1基因主要在内膜间质细胞中表达 ,增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中 Hox A1 1基因的表达量虽较间质细胞少 ,但有明显的周期性变化 ,以增生殖期腺上皮细胞表达量较高 ,分泌早期开始下降 ,到分泌中晚期表达量极低或不表达。Hox A1 1基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体 (PR)非常相似 ,提示 Hox A1 1基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系 ,Hox A1 1在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。

HOXA11在子宫内膜单纯性增生和内膜癌中表达增加

目的探讨HOXA11基因在子宫内膜单纯性增生和子宫内膜癌中表达的意义,以及与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogene receptor,PR)表达的关系。方法用免疫组化法检测增生期子宫内膜、子宫内膜单纯性增生及子宫内膜癌组织中HOXA11、ER及PR蛋白的表达。结果在子宫内膜单纯性增生和内膜样腺癌中,HOXA11的表达明显高于增生期子宫内膜(P<0.05),而ER、PR的表达明显低于增生期内膜(P<0.05)。结论HOXA11的过度表达可能参与了子宫内膜异常增生或癌变的过程;这种效应可能与ER、PR表达下降相关。

利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白

目的：利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库中筛选与转录因子HOXA11相互作用的蛋白。方法：培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库。同时,聚合酶链反应扩增人HOXA11基因片段（1～846 bp）,将此基因片段重组入p GBKT7载体,构建诱饵质粒p GBKT7-HOXA11,经酶切和测序验证质粒构建正确。将诱饵质粒转化酵母菌AH109,检测其有无毒性与自激活作用。随后,利用酵母双杂交系统从c DNA文库中筛选与HOXA11相互作用的蛋白。对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析。结果：成功构建了人肾透明细胞腺癌c DNA文库和p GBKT7-HOXA11诱饵质粒。在AH109酵母细胞中,该质粒无毒性、无自激活作用。酵母双杂交筛选获得了5个与HOXA11相互作用阳性克隆。结论：获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA11相互作用蛋白,为进一步研究HOXA11在个体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础。

HOXA11基因在生殖过程中的作用

同源框基因是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因。其家族成员之一HOXA11参与雌性生殖系统的发育,构建正常形态的子宫内膜,影响子宫内膜容受性,并与雄性不育相关。

左旋18-甲基炔诺酮和米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响

目的:通过口服孕激素类(左旋18-甲基炔诺酮,Levenorgestrel,LNG)和抗孕激素类(米非司酮,RU486)避孕药,研究孕激素对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响。方法:30名自愿者,于正常月经周期排卵后d7,刮取内膜组织做自身对照;实验周期在排卵前或排卵后2d,口服小剂量LNG(18例)或RU486(12例),同样在排卵后d7刮取内膜组织。用原位杂交方法检测服药子宫内膜HOXA11基因表达的变化。结果:对照组(分泌中期)内膜,间质细胞普遍表达HOXA11mRNA,而腺上皮HOXA11的表达则呈弱阳性或阴性。口服LNG后,子宫内膜形态变化不明显;内膜腺上皮HOXA11表达量进一步下降或无明显变化(即用药前后均表达阴性);间质细胞HOXA11表达增强。服用RU486后,内膜发育明显延迟,腺上皮HOXA11表达强度普遍大于对照组,而间质细胞的表达变化无明显规律。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的表达起负调控作用;正常分泌中期,内膜腺上皮HOXA11表达减弱或消失是内膜分化成熟的标志。

HOXA11在根治性宫颈切除术患者术后子宫内膜中的表达

目的:探讨根治性宫颈切除术(radical trachelectomy,RT)患者术后同源盒基因A11(HOXA11)的表达对子宫内膜容受性的影响。方法:应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测RT术后不孕症患者(n=16)与正常生育能力女性(n=16)分泌期子宫内膜组织中HOXA11基因的m RNA表达水平,并应用蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测2组患者分泌期子宫内膜组织中HOXA11、整合素β3(Integrin-β3)以及β-catenin、Dickkopf-1(DKK1)蛋白的表达水平。结果:HOXA11基因在RT组和对照组的分泌期子宫内膜中均有表达,但RT组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HOXA11、Integrin-β3以及β-catenin、DKK1蛋白在RT组的表达也低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。且HOXA11与Intergin-β3蛋白、β-catenin蛋白及DKK1蛋白的表达强度均呈显著正相关(P分别为0.006、0.004和0.007)。结论:在RT术后不孕可能由于宫颈组织的缺失从而影响宫腔内HOXA11基因的正常表达,并相应调节Integrin-β3及Wnt/β-catenin通路的表达,从而干扰子宫内膜容受性的形成,导致胚胎着床失败而不孕。

右美托咪定通过调控LncRNA HOXA11-AS/miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨右美托咪定(Dex)通过调控长链非编码RNA HOXA11-AS(LncRNA HOXA11-AS)/微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法采用不同浓度(25、50、100、200 ng/ml)的Dex处理膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测Dex对T24细胞凋亡率的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Dex对HOXA11-AS、miR-515-5p表达水平的影响。利用脂质体方法分别将si-HOXA11-AS及阴性对照(si-NC)、miR-515-5p模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)转染至T24细胞,通过MTT、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡能力变化。双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS与miR-515-5p的靶向关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(C-caspase)-3表达量。结果Dex可明显提高细胞凋亡率及C-caspase-3、miR-515-5p的表达水平(P<0.05),明显降低HOXA11-AS的表达水平(P<0.05);抑制HOXA11-AS表达与miR-515-5p过表达后,细胞存活率及CyclinD1的表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及C-caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明HOXA11-AS可靶向结合miR-515-5p;HOXA11-AS过表达可逆转Dex对T24细胞增殖和凋亡的影响;miR-515-5p过表达可逆转HOXA11-AS过表达对Dex处理的T24细胞增殖和凋亡的影响。结论Dex通过下调HOXA11-AS及上调miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

同源框基因HOXA11及雌激素受体在人良、恶性子宫内膜增殖组织中的表达及意义

目的:探讨同源框基因HOXA11及雌激素受体(ER)在人良、恶性子宫内膜增殖组织中的表达及意义。方法:采用Wester blot方法检测27例正常增殖期子宫内膜、35例单纯型及复杂型增殖子宫内膜、37例不典型增殖子宫内膜、31例子宫内膜腺癌组织中HOXA11和ER的表达。结果:HOXA11与ER蛋白的表达量由良性到恶性演变的子宫内膜呈下降趋势,组间比较,差异有高度统计学意义(P<0.001);且各组子宫内膜中HOXA11与ER蛋白的表达水平呈明显正相关(r=0.971,P=0.000)。结论:子宫内膜由良性到恶性演变的过程中,HOXA11与ER蛋白的表达量呈下降趋势,这两个指标对子宫内膜恶性病变的进程与预后具有一定的预测价值。

HOXA11在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的通过对同源框基因HOXA11表达水平的检测,探讨它们在子宫内膜癌发生过程中的作用,为从分子水平研究子宫内膜腺癌发病机制提供理论基础。方法采用免疫组织化学方法检测30例增生期子宫内膜、30例单纯性增生子宫内膜、50例子宫内膜腺癌组织中HOXA11蛋白质的表达。结果 HOXA11主要表达于子宫内膜腺上皮细胞及腺癌细胞。HOXA11在正常增生期子宫内膜中表达最高,在子宫内膜单纯性增生和子宫内膜腺癌中表达呈下降趋势。HOXA11在子宫内膜腺癌的表达明显低于在正常增生期子宫内膜及单纯性增生子宫内膜的表达(P<0.05)。结论 HOXA11在子宫内膜腺癌中的表达下降可能参与了子宫内膜癌变的过程。

循环外泌体介导的lncRNA HOXA11-AS通过上调SOX4促进血管内皮细胞增殖

目的:探索循环外泌体对内皮细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法:收集支架内再狭窄患者(n=199)及对照组患者(n=32)血浆并提取外泌体,用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型,MTT法测各组细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PCNA、Ki67的表达情况。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,qRT-PCR检测lncRNA HOXA11-AS表达情况。结果:与对照组比,雷帕霉素组细胞增殖能力减弱;PCNA、Ki67表达减少(P<0.05);相比于雷帕霉素组,对照组外泌体干预后内皮细胞增殖能力增强;PCNA、Ki67表达增加(P<0.05)。芯片结果显示lncRNA HOXA11-AS在ISR外泌体中表达减少(P<0.05)。pHOXA11-AS可以促进内皮细胞的增殖能力,增加细胞中PCNA、Ki67、SOX4的表达(P<0.05)。结论:血浆外泌体中的lncRNA HOXA11-AS可能是通过上调内皮细胞中SOX4的表达,增加内皮细胞的增殖能力。

HOXA11基因启动子区甲基化是胰腺癌的潜在诊断标志物

目的在胰腺癌中探讨HOXA11基因启动子区甲基化状态及其作为诊断标志物的可能性。方法应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测8株胰腺癌细胞系中HOXA11的表达及启动子区甲基化情况,应用MSP在216例胰腺癌组织中检测HOXA11启动子区甲基化情况,并分析HOXA11启动子区甲基化与临床病理因素之间的相关性。结果HOXA11在Panc3.11、Panc5.04、Panc10.05、BXPC3细胞中表达缺失,其MSP结果为完全甲基化。在SW1990、AsPC1中高表达,其MSP结果为非甲基化,在CFPAC1和MIAPaCa2细胞中表达减低,其MSP结果呈部分甲基化状态。应用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza)处理细胞后,HOXA11在Panc3.11、Panc5.04、Panc10.05、BXPC3细胞中恢复表达,在CFPAC1和MIAPaCa2细胞中表达增加,在SW1990、AsPC1细胞中表达水平无明显变化。在216例原发性胰腺癌患者中,76.85%(166/216)发生HOXA11甲基化,甲基化与肿瘤分化程度相关(P<0.0003)。结论HOXA11基因在胰腺癌组织中频繁发生甲基化,其表达受启动子区甲基化调控,HOXA11甲基化是胰腺癌潜在的诊断标志物。

孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制。方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液。用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4h、24h。提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量。结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4h时表达量有下降趋势;24h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4h时消失;24h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加)。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要问质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用。

lncRNA HOXA11-AS对膀胱尿路上皮癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:研究lncRNA HOXA11-反义RNA(HOXA11-AS)对膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、侵袭迁移的影响及与微小RNA-515-5p(miR-515-5p)之间的调控关系。方法:qRT-PCR检测膀胱尿路上皮癌组织、癌旁组织和J82细胞中HOXA11-AS和miR-515-5p的转录水平,MTT法和Transwell实验检测J82细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中Cyclin D1、p21、p27、MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达,双荧光素酶报告系统验证HOXA11-AS和miR-515-5p的结合关系。结果:与正常癌旁组织相比,膀胱尿路上皮癌组织中HOXA11-AS含量显著升高(P<0.05),miR-515-5p的含量显著下降(P<0.05);干扰HOXA11-AS表达可以抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭,使Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14表达下降,p21和p27表达升高;过表达miR-515-5p抑制J82细胞增殖、迁移和侵袭;HOXA11-AS靶向负调控miR-515-5p的表达;抑制miR-515-5p表达可逆转干扰HOXA11-AS表达对J82细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论:LncRNA HOXA11-AS通过靶向miR-515-5p抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭。LncRNA HOXA11-AS是膀胱尿路上皮癌的潜在靶点。

雌/孕激素对原代培养的子宫内膜上皮细胞HOXA11和PR基因表达的影响

目的:探讨雌、孕激素（尤其孕激素）对人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因和孕酮受体（pro-gesterone receptor,PR）基因表达的影响,以及二者表达量变化的相互关系。方法:将6例增生期子宫内膜腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入17β-雌二醇或/和孕酮培养4h、4d、6d、8d,提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR法检测HOXA11mRNA和PRmRNA表达量变化。结果:17β-雌二醇使上皮细胞HOXA11和PR基因表达量增加;而孕酮的作用效应则有所不同,当孕酮作用于与间质细胞分离培养的上皮细胞时,其HOXA11的表达增加,当上皮与间质细胞混合培养时,孕酮则降低上皮细胞HOXA11表达;孕酮对PR的影响则显示无论分离培养还是与间质细胞混合培养的上皮细胞,孕酮均可使上皮细胞PRmRNA表达量降低。结论:子宫内膜HOXA11基因表达受雌、孕激素调节,孕激素对内膜腺上皮HOXA11和PR基因均起负调控作用,但二者的发生机制有所不同。

HOXA11-AS在恶性肿瘤中的表达及作用研究

长链非编码RNA HOXA11反义RNA(HOXA11-AS)是一种近年来发现的lncRNA。最早使用探针在小鼠胚胎c DNA文库中发现HOXA11-AS,随后在人宫颈癌、胃癌及神经胶质瘤等恶性肿瘤细胞中相继被学者发现并在其中发挥重要作用。HOXA11-AS能够通过与miRNA和EZH2蛋白等相互作用促进肿瘤的增殖、转移等恶性生物学行为,被认为是致癌性lncRNA。HOXA11-AS的发现为肿瘤的防治提供了新的思路。

长链非编码RNA HOXA11-AS在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA HOXA11-AS在肝癌组织中的表达及临床意义。方法纳入106例原发性肝癌患者,qRT-PCR检测肝癌及癌旁正常组织样本中长链非编码RNA HOXA11-AS的表达量,并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性。结果长链非编码RNA HOXA11-AS在肝癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(2.97±0.81 vs.0.83±0.22,P<0.05);其在不同AJCC分期及是否发生淋巴结转移的肝癌组织中的表达量间的差异均有统计学意义(均P<0.05);长链非编码RNA HOXA11-AS高表达组3年生存率明显低于低表达组(22.22% vs.53.33%,P<0.05);长链非编码RNA HOXA11-AS高表达、AJCC分期增高是影响原发性肝癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论肝癌组织中长链非编码RNA HOXA11-AS表达上调,其可能参与肝癌的发生发展,可成为肝癌患者预后评估的新指标。