Hoxa家族基因在白血病中的表达及意义

用流式细胞仪对骨髓细胞进行白血病细胞免疫分型,用RT-PCR方法主要检测了急性白血病样品中Hoxa1-13和Meis1基因的表达.结果表明在所有急性白血病患者中CD45和HLA-DR表达阳性,无T系抗原CD3表达,髓系抗原CD33和CD13阳性比例高(76%),B系抗原CD19阳性率为47%,而CD10和CD20阳性率为24%~29%.在急性白血病中Hoxa9和Meis1表达正相关,Hoxa6和Hoxa2表达大多呈现正相关,Hoxa1和Hoxa3在大多数样品中表达负相关.Hoxa3只在CD19阴性CD7阳性的急性白血病样品中表达.结果提示在急性白血病中Hoxa家族基因的表达异常,具有一定的表达相关性,并且免疫表型具有异质性,免疫抗原与Hoxa基因存在着一定的联系.

热带爪蟾Hoxa11基因克隆及序列的进化分析

H oxa1 1基因是控制脊椎动物肢发育的重要基因 .根据人和鼠 H oxa1 1基因外显子 区和 区的保守序列设计了简并引物 ,采用 PCR法从热带爪蟾基因组 DNA中扩增和克隆到了H oxa1 1基因 ,并测定了核苷酸序列 .克隆的热带爪蟾 H oxa1 1基因片段长 1 598bp,由外显子 、内含子和外显子 三部分组成 ,其中外显子 60 4 bp,外显子 49bp.将该片段的核苷酸序列与人、鼠、斑马鱼 H oxa1 1基因的相应区域进行比较 ,发现该基因的内含子长度存在明显差异 .斑马鱼、热带爪蟾、鼠和人的内含子长度分别为 632 bp,945bp,1 42 1 bp和 1 41 2 bp,随动物进化阶梯的提高而变长 .外显子 区则高度保守 ,都是 49bp,外显子 区在长度上呈现约 1 0 %的变异 .将热带爪蟾 H oxa1 1基因编码的氨基酸序列与人、鼠、斑马鱼进行比较 ,它们之间分别有 67.0 %、66.5%和 46.0 %的同源性 .热带爪蟾与哺乳动物的同源性高于鱼类 ,可能反映了脊椎动物从鳍到肢的进化过程中 ,H oxa1 1基因经历了较多的变异 .

miR-99a对宫颈癌Hela细胞增殖影响机制研究

目的 miR-99a在宫颈癌等多种肿瘤组织中异常表达,且与肿瘤细胞的多种生物学行为密切相关。本研究旨在探讨miR-99a沉默HOXA1表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖的影响及相关机制。方法通过瞬时转染将miR-99a mimics导入宫颈癌Hela细胞,采用MTT法和平皿克隆形成实验观察miR-99a增加对Hela细胞增殖的影响;应用Targetscan 6.2软件预测miR-99a与HOXA1基因3’UTR的靶向性作用,荧光素酶报告基因分析miR-99a对HOXA1基因表达的影响,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-99a对HOXA1表达的作用;构建HOXA1干扰载体,转染Hela细胞,筛选后利用MTT法和平皿克隆实验观察HOXA1表达降低后对Hela细胞增殖的影响。结果 miR-99a被导入宫颈癌Hela细胞后,细胞的生长速度减慢,miR-99amimics组Hela细胞克隆数为156±30,与miR-ctr组(386±49)比较,克隆数减少,F=26.093,P=0.001。采用Targetscan6.2(http://www.targetscan.org/)软件分析miR-99a与HOXA1基因的作用位点发现,miR-99a与HOXA1基因3’UTR的1 485~1 497位核苷酸位点存在结合,miR-99a表达后,抑制Hela细胞中HOXA1的表达。干扰HOXA1表达后,Hela细胞生长速度减慢,平皿克隆形成能力降低,siHOXA1克隆数为165±35,si-control克隆数为390±46,P<0.05。结论miR-99a与HOXA1基因3’UTR 1 485~1 497位核苷酸位点结合沉默其表达,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖。

双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁猪动物模型的鉴定及其应用

目的对双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪进行鉴定，探讨其作为动物模型在整形外科的应用。方法以1头二花脸公猪和1头沙子岭母猪为祖代个体，构建F2近交群体。对患病和表型正常个体的外耳形态进行检查。选取1头正常个体和1头它的全同胞双侧外耳缺失的患病个体，行颞部CT扫描，并对HOXAl基因突变进行检测。结果二花脸×沙子岭F2近交群体中，75头F2个体中有57头表型正常个体和18头患病个体。患病个体为双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁，颞部CT显示为双侧外耳道闭锁、中耳结构发育不良；基因检测结果为HOXAl纯合突变。结论HOXAl基因纯合突变的猪动物模型，符合人类双侧小耳畸形特征，为其进一步在小耳畸形病理机制中的应用提供了理论基础。