疏肝健脾方联合解毒抗癌方对人肝癌细胞株HpG2 IL-6和IGF-IR影响随机平行对照研究

[目的]观测疏肝健脾方联合解毒抗癌方对人肝癌细胞株HpG2 IL-6和IGF-IR影响。[方法]使用疏肝健脾方、解毒抗癌方和HpG2细胞株共同培养24h、48h、72h和96h后进行MTT、IL-6 ELISA和IGF-IR ELISA检测,使用顺铂作为对照组。[结果]MTT抑制率11.1%,解毒抗癌方为72.8%,顺铂为74.7%。疏肝健脾方和解毒抗癌方(χ2=1.600,P=0.000<0.01)。顺铂与HpG2(P=0.001<0.01);解毒抗癌方与HpG2(P=0.008<0.01),疏肝健脾方与HpG2比较,(P=0.752>0.05)。IGF-IR,顺铂与HpG2(P=0.001<0.01);解毒抗癌方与HpG2(P=0.004<0.01)。疏肝健脾方与HpG2(P=0.860>0.05)。IGF-IR,顺铂与HpG2(P=0.001<0.01);解毒抗癌方与HpG2(P=0.004<0.01)。疏肝健脾方与HpG2(P=0.860>0.05)。[结论]疏肝健脾方和解毒抗癌方对HpG2细胞株的作用不同,解毒抗癌方直接杀灭肿瘤细胞,其作用可能是抑制IL-6和IGF-IR的分泌而促使肿瘤细胞凋亡;疏肝健脾方对HpG2细胞株无作用。

PAI siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建和鉴定针对PAI的发卡样小干扰RNA(siRNA)真核表达载体PAI siRNA。方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状PAIsiRNA的寡核苷酸链,将其插入到pSilencerTM2.1-U6neo载体中,经测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用电转染法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI siRNA载体后,HpG2细胞PAI mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降(P<0.01)。结论测序结果表明发卡样PAI siRNA真核表达载体构建成功,转染HpG2细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭PAI的表达,为进一步研究PAI siRNA载体提供了实验基础。

番荔枝内酯Bullatacin对人肝癌细胞株HpG2凋亡影响的探讨

目的:研究番荔枝内酯Bullatacin在诱导人肝癌细胞株HpG2凋亡中的作用。方法:MTT法测定Bullatacin对HpG2细胞增殖的影响;采用碘化丙锭染色(PI)及荧光标记的单克隆抗体(mAb)结合流式细胞仪(FCM)分析Bullatacin对HpG2细胞周期和凋亡及Fas蛋白表达的作用;RT-PCR检测Bullatacin对Fas基因表达的影响。结果:Bullatacin(100μg/mL)能够明显抑制人肝癌细胞株HpG2的增殖,作用96 h其生长抑制率达66.3%;Bullatacin将HpG2细胞周期抑制在G0/G1期,阻止其进入G2/M期,同时能诱导细胞凋亡;Bullatacin能够明显上调HpG2细胞表面Fas蛋白的表达(P=0.006),且作用优于顺铂(P=0.03);进一步研究发现,Bullatacin能够诱导Fas基因的表达。结论:Bullatacin能够诱导HpG2细胞凋亡,其可能机制是诱导Fas基因表达从而上调Fas蛋白。本研究以Bullata-cin作为一种抗肿瘤药物的研发提供理论和实验依据。