绿色荧光蛋白转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的可能性。方法:用乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导GFP转基因小鼠和普通小鼠基因突变,比较诱导后两种小鼠的嗜多染红细胞微核率变化情况。再观察GFP小鼠细胞克隆对GFP转基因小鼠hprt基因的DNA和mRNA序列进行验证,并对GFP转基因小鼠hprt突变克隆外显子1和外显子9进行了双向测序。结果:ENU诱导后GFP转基因小鼠和普通小鼠的微核率变化趋势相同。GFP转基因小鼠的微孔培养物比普通小鼠的微孔培养物易于确认,且降低了假阳性率和假阴性率。GFP转基因小鼠的hprt基因是完整的,与普通小鼠相比未见明显差异。GFP转基因小鼠hprt基因6个突变克隆外显子1的序列均与野生型小鼠细胞的序列一致,3个突变克隆外显子9的序列中有2个发生了A∶T→T∶A颠换。结论:ENU诱导的GFP转基因小鼠突变模型良好,GFP转基因小鼠可用作小鼠淋巴细胞hprt基因突变试验的动物模型,准确性高且试验难度低。

纳米氧化铁颗粒tk及hprt基因突变试验比较研究

目的使用L5178Y细胞分别开展tk基因突变试验和hprt基因突变试验评价纳米氧化铁颗粒(iron oxide nanoparticle, IONP)的潜在基因突变风险,比较两种方法的灵敏性。方法不同质量浓度的PEG-IONP (31.25、62.5、125、250、500μg/mL)分别与细胞作用3 h,于给药后第0、2、6天将细胞接种于96孔板继续培养9~10 d,用于计算平板接种效率。分别在给药后第2天或第6天加入三氟胸苷(TFT)和6-硫鸟嘌呤(6-TG)作为tk基因和hprt基因选择剂,继续培养14 d后分析基因突变频率。试验平行设置灭菌注射用水溶媒对照组和甲基甲烷磺酸酯(MMS,10μg/mL)阳性对照组。结果溶媒对照组和阳性对照组的hprt基因突变率均低于tk基因突变率,且统计学结果提示hprt基因突变试验数据获得显著性差异的起始浓度(250μg/mL)高于tk基因突变试验(125μg/mL)。但整体而言两种试验方法对PEG-IONP的评价结果一致。结论 PEG-IONP可引起小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因及hprt基因突变率显著性升高。该研究结果可为纳米材料基因突变风险评价的选择提供借鉴与参考。

昆明山海棠诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究

为研究昆明山海棠(THH)的遗传毒性和药理作用，采用单细胞克隆培养,双向筛选计数，多重PCR扩增与电泳分析，研究了THH诱导HL－60细胞HPRT基因突变率及分子突变谱。发现随着染毒剂量的增加，细胞接种存活率逐渐下降，突变频率明显升高；THH诱发突变主要由缺失和点突变两部分组成(46.6％和53.4％)，而自发突变几乎全是点突变(92.3％)；HPRT基因突变位点在各个外显子的分布较集中于基因的3′末端，且外显子1缺失只出现于全基因缺失中，外显子7/8与9多表现为连锁缺失(71.4％)。结果提示，THH具有明确的诱导HPRT基因突变的作用，且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样，这可能与其作用机制有关。上述发现有助于阐明THH遗传毒性作用机理。

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了 60 Coγ射线 0～ 4 .0 Gy照射诱发的体细胞 HPRT基因突变 ,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明 ,HPRT基因突变频率 Y随照射剂量 D ( Gy)的增加而增加 ,在 0～ 4 .0 Gy剂量范围内可拟合为 Y=0 .4 0 2 2 +0 .2 710 D - 0 .0 4 60 D2 ,在 0～ 1.0 Gy低剂量范围内 ,更适于拟合直线模型 Y =0 .382 7+0 .2 94 8D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性。说明 HPRT基因突变可以用于低 LET辐射剂量估算 ,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。

2450 MHz微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响

目的 :探讨微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响 .方法 :选用频率 2 4 5 0MHz微波 ,采用不同功率密度 (5 ,10 ,30mW·cm 2 )辐照小鼠 ,连续辐照 1,3,7d后 ,心脏取血 ,应用多核细胞法检测HPRT基因位点突变频率 .结果 :淋巴细胞HPRT基因位点突变率随着辐照时间延长和辐照强度的增大呈增加趋势 ,30mW·cm-2 微波照射 7d组淋巴细胞HPRT基因突变频率与对照组相比相差显著(P <0 0 5 ) .结论 :2 4 5

多核细胞法和Brdurd法检测辐射诱发体细胞HPRT基因突变的比较研究

目的 研究放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变及其剂量 -效应关系 ,比较不同方法对HPRT基因位点突变的检出率。方法 给大鼠尾静脉注射晚期混合裂变产物后不同时间心脏穿刺取血。用多核细胞法和Brdurd法分别检测HPRT基因突变细胞 ,计算突变率 ,拟合出辐射诱发HPRT基因位点突变的剂量 -效应关系函数。结果 用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发HPRT基因位点突变率 (y ,‰ )和剂量 (D ,cSv)相关函数为y =1 14 98+0 1199lnD,r =0 970 6 ;用Brdurd法检测的相关函数为 y =6 5 310× 10 -2 +3 4 5 4 2× 10 -3 D ,r =0 984 6。多核细胞法检测HPRT基因位点突变检出率比Brdurd法高 11～ 17倍之多。结论 体细胞HPRT基因对电离辐射敏感 ,有可能作为辐射生物剂量计。

成人外周血淋巴细胞HPRT基因突变率及其影响因素的研究

目的 研究年龄范围在 2 1～ 5 0岁健康成年人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变率及其影响因素。方法 用多核细胞法检测淋巴细胞HPRT基因位点突变率 ,拟合HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数。结果 成年人淋巴细胞HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数为 :y =0 .75 5 5 +0 .0 44 0x ,r =0 .982 9(P <0 .0 5 )。吸烟对健康成人HPRT基因突变率有影响 (P <0 .0 5 ) ,而不同性别间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 成年人HPRT基因位点突变率随年龄增长而增加 ,年递增率为 0 .0 44 0‰ ;吸烟对HPRT基因突变有影响 ,而性别则无影响。

用BrdU法研究γ射线外照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变

用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法检测 ,不同剂量γ射线外照射诱发正常人外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率 (MFs) ,并研究其剂量效应关系。抽取正常成年人静脉血 ,分成 5组 ,分别用 0 .0— 4 .0Gy的不同剂量γ射线照射 ,全血培养后用BrdU法检测淋巴细胞HPRT基因MFs。结果表明 ,正常人外周血淋巴细胞的MFs随外照射剂量的增加而上升 ,且剂量效应关系符合线性平方模型。研究证明了BrdU法是一种快速、简便、较敏感的检测外照射诱发HPRT基因突变的方法 ,HPRT基因辐射突变可作为生物剂量计。

克隆法研究辐射诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因突变

本文目的是用克隆法研究γ射线诱发人外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸抗糖转移酶(HPRT)基因突变的量效关系。从健康成年人外周血分离淋巴细胞 ,每份分成两等份 ,其中一份加滋养细胞 ,另一份不加滋养细胞 ,种于 96孔板 ,进行淋巴细胞的克隆和突变细胞的筛选 ,比较二者结果 ;剂量效应关系实验为取一健康成年男子外周血 2 5mL分成 5等份 ,分别用 0、1、2、4和 6Gy照射 ,分离淋巴细胞 ,种于 96孔板 ,不加滋养细胞条件下观察淋巴细胞的克隆效率和HPRT基因突变频率的变化。结果表明加滋养细胞组的克隆效率高于不加滋养细胞组 (p <0 0 1 ) ,但二者HPRT基因突变频率无差别 (p >0 0 5 )。在一定剂量范围内 ,人外周血淋巴细胞克隆效率与照射剂量呈负相关 。

Pig-a基因突变试验研究进展

Pig-a基因突变试验是利用流式细胞术或有限稀释克隆法检测细胞表面糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚链蛋白的缺失情况,并以Pig-a基因突变率的变化来评价受试物的遗传毒性。该试验能够跨物种跨组织检测体内多种类型的突变作用,并能有效整合至其他体内重复给药毒性试验实现多终点联合检测,在药物临床前安全性评价中具有非常广阔的应用前景,有望成为体内遗传毒性试验的新选择,从而弥补现有遗传毒性试验组合的不足。本文对Pig-a基因突变试验的研究进展等进行综述。

用多引物PCR分析γ射线引起人外周血淋巴细胞hprt基因突变

正常人外周血用^（６０）Ｃｏ射线分别进行１～８Ｇｙ照射后，在含６－ＴＧ的培养基上克隆和筛选人淋巴细胞ｈｐｒｔ突变细胞。细胞的突变频率与γ射线的照射剂量呈正相关．获得４２个ｈｐｒｔ突变细胞株，用８对ｈｐｒｔ寡核苷酸引物进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）从细胞粗提物中分别扩增ｈｐｒｔ各个外显子，分析突变细胞的ｈｐｒｔ基因突变，约６０％（２５／４２）的ｈｐｒｔ基因突变为基因缺失，其中１３个突变是ｈｐｒｔ基因全部缺失，而１２个是部分ｈｐｒｔ基因外显子缺失，约有４０％（１７／４２）的突变无明显的ＰＣＲ扩增变化．同时显示ｈｐｒｔ基因外显子的缺失突变与辐射剂量有关，实验结果提示，此方法有可能用于估计辐射剂量和进行辐射远后效果观察，进而揭示辐射致突的分子机理．

放射治疗对宫颈癌病人DNA损伤及hprt基因突变的初步研究

目的:评价放射治疗对宫颈癌患者造成的遗传学损伤。方法:取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为0Gy、10Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy、60Gy时的外周静脉血,以彗星实验检测淋巴细胞的DNA损伤,采用多核细胞法测hprt基因位点突变率。结果:各累积剂量组淋巴细胞DNA拖尾率比照射前显著升高(P<0.01),并且在0-60Gy之间,拖尾率与累积照射剂量之间成线性关系。各累积剂量组尾长比照射前均增加(P<0.01),在照射剂量累积30Gy时,尾长均值达最大。尾长与累积剂量间不成线性关系。hprt基因位点突变率在照射后升高,与照射前相比,在照射累积剂量为30Gy、40Gy和50Gy时,显示有统计学意义差别(P<0.05)。hprt基因突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系。结论:宫颈癌患者放疗后造成外周血淋巴细胞DNA损伤及hprt基因突变,hprt基因突变和彗星实验用于评价放疗造成的损伤,具有较高的敏感性。

HPRT基因突变的分子图谱及检测方法学

ＨＰＲＴ基因编码产生参与细胞内嘌呤补救代谢途径的关键酶，由于其本身所具有的一些独特性质，逐渐成为基因突变、基因定位与基因转移研究中的重要靶基因之一。本文介绍了ＨＰＲＴ基因的分子结构、基因突变检测的分子生物学技术、ＨＰＲＴ基因突变谱以及分子突变机制的研究现状，并展望了其发展前景。

汽油和甲醇两种燃料的汽车尾气的TK基因突变试验比较

甲醇燃料极有希望成为更清洁的汽油替代品,然而有关甲醇燃料汽车尾气对健康影响的研究报道极少,更未见对甲醇和汽油两种燃料汽车尾气的遗传毒性进行比较研究。为此本课题在同样的车型,同样的工况条件下采集了甲醇尾气和汽油尾气,选用L 5 178Y细胞Thymidine kinase(TK)基因突变试验,在同样的剂量范围进行了两种尾气的遗传毒性检测,并与微核试验和彗星试验的结果进行了比较。结果显示,在33～133ml/ m l范围内,汽油尾气的遗传毒性强于甲醇尾气,但是甲醇尾气的细胞毒性强于汽油尾气;与微核试验和彗星试验比较证实,L 5 178Y细胞TK基因试验检测基因突变更加灵敏。

长春花碱3和24h处理TK6细胞TK基因突变试验比较研究

[目的]比较用长春花碱对人淋巴母细胞TK6处理3h和24h的诱变性。[方法]用长春花碱对TK6细胞分别进行3h和24h染毒处理,用微孔板法进行TK基因突变试验。计算TK6细胞的接种效率(PE)、相对存活率RS、相对悬浮增值率RSG、总的相对增长率RTG、突变频率MF。[结果]在3h处理条件下,随长春花碱浓度的增加,RS、RTG和RSG等均降低,中、高剂量水平已表现出明显的细胞毒性,但各剂量水平的MF与溶剂对照比较差异均有统计学意义(P﹤0.05);在24h处理条件下,其MF随VBL浓度的增加而增加,并有一定的剂量-反应关系。[结论]较长时间处理对于长春花碱等细胞周期依赖性的毒物是必要的。

^(60)Coγ射线合并苯并芘致细胞HPRT基因突变损伤效应

６０Ｃｏγ射线和苯并芘作用后，人胚肺细胞ＨＰＲＴ基因突变频率明显增加，表明６０Ｃｏγ射线和苯并芘均造成了人胚肺细胞ＨＰＲＴ基因突变位点的突变损伤。ＨＰＲＴ基因突变与６０Ｃｏγ射线和苯并芘作用剂量之间存在着良好的线性正相关的剂量效应关系，线性相关系数分别为０．９９８４和０．９７９３，显著性检验Ｐ值均小于０．０１。γ射线合并苯并芘复合作用后，人胚肺细胞ＨＰＲＴ变异系数明显地高于对照组的同时，与单纯γ射线或苯并芘作用组比较，亦显著性地增高。复合作用组细胞ＨＰＲＴ变异系数高于单纯γ射线及苯并芘作用组细胞ＨＰＲＴ变异系数之和。

用tk基因突变试验评价长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性

目的评价有丝分裂抑制剂长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性,并比较短期和长期tk基因突变试验的检出灵敏度.方法用长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤细胞分别进行3h及24h染毒,用微孔板法进行tk基因突变试验,计算相对悬浮生长、接种效率、相对存活率、相对总生长及突变频率等指标,并比较短期和长期处理的结果.结果两种受试物3h处理均未出现明显的阳性反应,而24h连续处理后,两种受试物均能诱导tk基因突变频率增高,诱发突变频率分别为自发突变频率的1.6～4.8倍和2.1～6.2倍,呈阳性结果.结论长春新碱和秋水仙碱在长期处理试验中能诱导tk基因突变,而在短期处理试验中未发现明显诱变性,即长期处理能提高tk基因突变试验的检出灵敏度.