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丁香假单胞菌极毛蛋白hrpA基因的克隆与表达
被引量:
2
1
作者
袁军
刘海荣
+1 位作者
庄振宏
汪世华
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2012年第5期518-522,共5页
将丁香假单胞菌番茄变种DC3000(P.syringae pv.tomato DC3000)极毛蛋白hrpA基因克隆到pET32a(+)载体上,获得重组表达载体pET32a(+)-hrpA.将重组质粒转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中,通过SDS-PAGE分析表明,在1.0mmol.L-1异丙基硫代-β-...
将丁香假单胞菌番茄变种DC3000(P.syringae pv.tomato DC3000)极毛蛋白hrpA基因克隆到pET32a(+)载体上,获得重组表达载体pET32a(+)-hrpA.将重组质粒转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中,通过SDS-PAGE分析表明,在1.0mmol.L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了分子质量约为28 ku的融合蛋白(目标蛋白基因与硫氧还蛋白基因的融合表达产物).并利用Ni2+-NTA柱亲和层析分离获得纯化的HrpA蛋白,质量浓度为91.8 g.L-1.
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关键词
丁香假单胞菌
hrpa
基因
融合蛋白
表达
纯化
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职称材料
梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统的鉴别及Erwinia spp. HrpA的分析
2
作者
朱勃
金谷雷
+1 位作者
怀雁
谢关林
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期505-510,共6页
【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法...
【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法,通过BLAST程序对梨火疫病菌基因组的核苷酸数据库进行同源比对,同时对Erwinia spp.与宿主互作的表面蛋白HrpA进行选择压分析。【结果】TTSS分析结果显示在40kb大小的毒力岛上有27个TTSS相关基因。通过与看家基因及毒力岛上的致病性相关的重要基因HrpN的比较、选择压分析、多序列比较,发现HrpA基因处于较强的选择压作用下,且HrpA蛋白N端主要受正向选择,C端主要受净化选择。NJ法构建的HrpA系统发育树显示Erwinia spp.形成两个明显的分支,表明HrpA基因可能在种间分化后产生了不同的选择压变化。【结论】梨火疫病病原菌基因组3.14-3.18Mb为其TTSS分布区域。该病原菌通过TTSS侵染寄主植物,在其病原菌表面有一种类鞭毛结构的TTSS蛋白HrpA,HrpA作为传输者起着将效应分子输送到宿主内部的功能,在进化上受到了较强的选择压影响。
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关键词
梨火疫病
三型分泌系统
hrpa
正向选择
净化选择
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职称材料
题名
丁香假单胞菌极毛蛋白hrpA基因的克隆与表达
被引量:
2
1
作者
袁军
刘海荣
庄振宏
汪世华
机构
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室
出处
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2012年第5期518-522,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30771400)
福建省自然科学基金资助项目(2009J06008
2011J05049)
文摘
将丁香假单胞菌番茄变种DC3000(P.syringae pv.tomato DC3000)极毛蛋白hrpA基因克隆到pET32a(+)载体上,获得重组表达载体pET32a(+)-hrpA.将重组质粒转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中,通过SDS-PAGE分析表明,在1.0mmol.L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了分子质量约为28 ku的融合蛋白(目标蛋白基因与硫氧还蛋白基因的融合表达产物).并利用Ni2+-NTA柱亲和层析分离获得纯化的HrpA蛋白,质量浓度为91.8 g.L-1.
关键词
丁香假单胞菌
hrpa
基因
融合蛋白
表达
纯化
Keywords
P.Syringae
hrpa
gene
fusion protein
expression
purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统的鉴别及Erwinia spp. HrpA的分析
2
作者
朱勃
金谷雷
怀雁
谢关林
机构
浙江大学生物技术研究所
浙江大学生物信息学研究所
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期505-510,共6页
基金
国家高技术研究与发展计划(2006AA10A211)
国家自然科学基金(30871655
+1 种基金
30671397)
杭州市农业发展基金(2007-2)
文摘
【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法,通过BLAST程序对梨火疫病菌基因组的核苷酸数据库进行同源比对,同时对Erwinia spp.与宿主互作的表面蛋白HrpA进行选择压分析。【结果】TTSS分析结果显示在40kb大小的毒力岛上有27个TTSS相关基因。通过与看家基因及毒力岛上的致病性相关的重要基因HrpN的比较、选择压分析、多序列比较,发现HrpA基因处于较强的选择压作用下,且HrpA蛋白N端主要受正向选择,C端主要受净化选择。NJ法构建的HrpA系统发育树显示Erwinia spp.形成两个明显的分支,表明HrpA基因可能在种间分化后产生了不同的选择压变化。【结论】梨火疫病病原菌基因组3.14-3.18Mb为其TTSS分布区域。该病原菌通过TTSS侵染寄主植物,在其病原菌表面有一种类鞭毛结构的TTSS蛋白HrpA,HrpA作为传输者起着将效应分子输送到宿主内部的功能,在进化上受到了较强的选择压影响。
关键词
梨火疫病
三型分泌系统
hrpa
正向选择
净化选择
Keywords
Erwinia amylovora
TTSS
hrpa
positive selection
purifying selection
分类号
S436.612 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丁香假单胞菌极毛蛋白hrpA基因的克隆与表达
袁军
刘海荣
庄振宏
汪世华
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2012
2
下载PDF
职称材料
2
梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统的鉴别及Erwinia spp. HrpA的分析
朱勃
金谷雷
怀雁
谢关林
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
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