池蝶蚌HsTRAF6基因的克隆鉴定及表达分析

肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)对于介导Toll样受体(TLR)/白细胞介素1受体(IL-1R)信号传导以及随后的NF-κB和AP-1的激活至关重要。在本研究中,已经克隆并鉴定了池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)TRAF6(以下简称HsTRAF6),cDNA全长为3945 bp,ORF框1965 bp,编码654个氨基酸,该区域包含保守的特征结构域,包括1个RING结构域、2个TRAF型锌指结构域、1个典型的卷曲螺旋(coiled coil;TRAF-N)和MATH(TRAF-C)结构域。系统发育分析显示,池蝶蚌与其他贝类等软体动物聚在一支。此外,qRT-PCR分析显示HsTRAF6在组织中广泛分布,在鳃和肝胰腺中表达最丰富;脂多糖和嗜水气单胞菌免疫刺激后,分别在7个时间点(0,6,12,24,36,48,72 h)对10个组织中HsTRAF6的mRNA表达差异性进行分析,各组织间表达变化存在差异,但均有显著变化。

池蝶蚌IRAK4基因的克隆及功能

在优质淡水珍珠育珠贝池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)中获得白细胞介素受体相关激酶IRAK4基因cDNA全长序列,命名为HsIRAK4,其全长为2617 bp,5’端非翻译区(5′UTR)为146 bp,3′端非翻译区(3′UTR)为797 bp,ORF框1674 bp,编码557个氨基酸,包含2个保守结构域,即N端的死亡结构域(Death,DD)和激酶结构域(KD)。系统进化树分析显示,HsIRAK4与青蛤的同源性最高,与软体动物聚在一支,和鱼类、灵长类不在一支。采用Real time-quantitative PCR技术检测脂多糖LPS诱导后的HsIRAK4及其在TLR信号通路中的上游因子HsMyD88的mRNA表达水平,结果显示,HsMyD88和HsIRAK4在所有组织都有表达,并且HsMyD88和HsIRAK4都在肝胰腺、鳃、肾和肠等免疫相关组织中高表达,二者在LPS刺激后不同组织达到峰值的时间明显存在差异,说明HsMyD88和HsIRAK4很有可能参与贝类动物的免疫防御。池蝶蚌GST-Pulldown结果显示,HsMyD88的Death结构域分别能和HsIRAK4-Death和HsIRAK4-ORF发生相互作用。