miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

miR-150对T细胞PD-1表达及肺肿瘤生长的影响

目的:探讨miR-150对小鼠外周T细胞PD-1表达及肺移植肿瘤生长的影响。方法:选取miR-150基因敲除(miR-150KO)及其野生型正常对照(WT)小鼠,流式细胞数术检测miR-150KO小鼠外周T细胞数量及其活化表型分子CD69和免疫检查点分子PD-1的表达变化;采用Lewis肺癌细胞系(LLC)皮下注射制备miR-150KO和WT小鼠移植肿瘤模型,观察miR-150敲除对肺肿瘤生长的影响;采用抗PD-1抗体腹腔注射miR-150KO和WT荷瘤小鼠,观察其对两组小鼠的肿瘤生长抑制效果。结果:与WT小鼠相比,miR-150KO小鼠脾脏和淋巴结CD4^(+)T细胞比例和数量显著升高,外周血CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞比例和数量显著降低;miR-150敲除导致淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中CD69^(+)细胞比例显著升高,同时导致外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞比例显著升高;与WT荷瘤小鼠相比,miR-150KO荷瘤小鼠肿瘤生长明显加快,同时miR-150KO荷瘤小鼠淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞所占比例显著升高。抗PD-1封闭抗体处理对miR-150KO荷瘤小鼠的肿瘤生长具有明显抑制作用。结论:miR-150敲除通过提高T细胞中PD-1表达促进小鼠肺肿瘤生长,同时增强抗PD-1抗体对肿瘤的免疫治疗作用。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

乳腺癌患者组织中miR-150-5p表达及临床意义

目的探讨乳腺癌患者组织中微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及临床意义。方法前瞻性选取河南省洛阳市妇幼保健院2019年12月至2022年5月收治86例乳腺癌患者为对象,收集患者年龄、乳腺癌家族遗传史、肿瘤直径大小、疾病类型等一般资料,并测量所有患者癌组织与癌旁正常组织miR-150-5p水平。结果乳腺癌患者癌组织miR-150-5p水平高于癌旁正常组织(P<0.001)。miR-150-5p高水平组肿瘤直径大小、Ⅲ~Ⅳ期占比高于低水平组(P<0.05)。86例乳腺癌患者中共发生复发转移11例(12.79%),其中miR-150-5p低水平组3例,高水平组8例。logistic回归分析结果显示,miR-150-5p水平与乳腺癌复发转移有关(P<0.05)。结论乳腺癌患者癌组织中miR-150-5p呈异常高表达,可能是患者预后不良的指标之一。miR-150-5p水平与肿瘤直径、分期有关。

miR-150-5p在妇科恶性肿瘤的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码单链RNA分子,其可以与靶基因RNA 的碱基互补配对,从而诱导靶基因RNA降解或抑制蛋白质翻译,参与机体的病理生理过程。其中miR-150-5p在肿瘤中的异常表达提示其与肿瘤的发生发展密切相关。本文对miR-150-5p在妇科三大恶性肿瘤中的作用机制进行综述,为开发新型的癌症筛查及肿瘤诊治标志物提供理论依据。

Hsa-miR-150过表达诱导弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-Ly10再分化

目的:探究hsa-miR-150过表达诱导弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-Ly10再分化的机制。方法:运用real-time PCR检测hsa-miR-150在永生化CD19+B细胞和OCI-Ly10细胞中的表达,利用Western blotting和免疫荧光细胞化学检测hsa-miR-150靶基因c-myb的表达;通过LipofectamineTM2000脂质体法将含有重组慢病毒质粒的病毒上清转染OCI-Ly10细胞(Ly10-control组和Ly10-miR-150组);对新构建的细胞亚系,通过MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡;运用real-time PCR、免疫荧光细胞化学和Western blotting检测Ly10-control和Ly10-miR-150的B细胞分化相关基因及c-Myb的表达;利用干扰片段干扰OCI-Ly10细胞c-myb表达后,运用real-time PCR和Western blotting检测干扰效率及干扰后转录调节因子BCL6和浆细胞分化开关蛋白PRDM1的表达。结果:(1)CD19+B淋巴细胞的hsa-miR-150表达量明显高于OCI-Ly10细胞(P<0.05);c-Myb在OCI-Ly10细胞中表达较强,而在CD19+B淋巴细胞表达较弱。(2)OCI-Ly10细胞经转染hsa-miR-150后,B细胞分化相关基因的表达都明显发生了变化,B细胞特异性激活蛋白(PAX5)和BCL6表达下调(P<0.05);干扰素调节因子4(IRF4)、PRDM1和X盒结合蛋白1(XBP1)的表达上调(P<0.05);和对照组相比,c-Myb在Ly10-miR-150细胞中表达明显下调(P<0.05)。(3)干扰OCI-Ly10细胞c-myb表达后,BCL6表达明显下调,而PRDM1表达明显上调。结论:(1)hsa-miR-150过表达对OCI-Ly10细胞抑制增殖和诱导凋亡作用非常明显。(2)过表达hsa-miR-150可诱导该瘤细胞向末端B细胞方向分化,作用机制可能与下调其靶基因c-myb的表达有关。

miR-150靶向β-catenin调控人牙周膜干细胞成骨分化能力的机制研究

目的 体外研究miR-150对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs成骨分化能力的调控作用及其分子机制。方法 分离培养hPDLSCs并进行成骨向分化诱导,q-PCR检测miR-150及成骨相关基因(RUNX2、OCN、OPN、ALP)的表达;hPDLSCs中转染miR-150沉默(inhibitor)及过表达模拟物(mimics),q-PCR检测miR-150和β-catenin的表达,茜素红染色实验检测hPDLSCs成骨分化能力的变化;qPCR及Western blot检测沉默及过表达miR-150后β-catenin表达水平的变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150的潜在靶基因;在hPDLSCs中过表达miR-150并加入SKL2001(Wnt/β-catenin通路激动剂),检测β-catenin表达及hPDLSCs成骨分化能力的变化。结果 RUNX2、OCN、OPN、ALP基因在hPDLSCs成骨向分化诱导后表达明显上调,而miR-150的表达则显著下调;q-PCR及茜素红染色结果显示抑制miR-150可明显上调成骨相关基因的表达并促进hPDLSCs成骨向分化,而过表达miR-150则结果相反;生物信息学分析显示β-catenin为miR-150的潜在靶基因,双荧光素酶报告进一步验证β-catenin为miR-150的靶基因;而SKL2001激活β-catenin后可逆转miR-150 mimics对hPDLSCs成骨分化的抑制作用。结论 miR-150可靶向β-catenin调控hPDLSCs的成骨向分化能力,提示miR-150在牙周组织工程损伤修复中发挥重要作用。

miR-150-5p对脑小血管病大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 分析miR-150-5p对脑小血管病(CSVD)大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响。方法 56只雄性大鼠14只作为正常组并不做处理,剩余42只建立CSVD模型,建模中途死亡6只。将建模成功的大鼠随机分为模型组、上调组、下调组,每组8只,做miR-150-5p转染,鉴定miR-150-5p转染率、氧化应激指标水平、神经凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果 与正常组、模型组相比,上调组miR-150-5p表达量升高,下调组miR-150-5p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-150-5p转染成功。与正常组相比,模型组、下调组细胞凋亡率、LDH释放率、丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与上调组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,具有统计学差异(P<0.05)。结论 miR-150-5p可能作用于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,影响CSVD大鼠脑微血管内皮细胞凋亡。

LncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨lncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌(TC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测TC细胞中DSCAM-AS1表达;FISH、pull down实验、双荧光素酶报告基因实验验证DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p靶向调控关系;检测SW579细胞增殖、迁移和侵袭,Western blot检测BRAF、E-cadherin、vimentin蛋白表达;小鼠体内肿瘤形成实验验证DSCAM-AS1对TC肿瘤生长的影响。结果DSCAM-AS1在TC细胞中高表达(P<0.05);DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p存在靶向调控关系;抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p可显著抑制SW579细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);抑制miR-150-5p表达或过表达BRAF可逆转抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p对SW579细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);体内实验显示,抑制DSCAM-AS1表达可显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论DSCAM-AS1在TC细胞中上调表达,抑制DSCAM-AS1表达可通过调节miR-150-5p/BRAF信号轴,抑制TC恶性进展。

hsa-miR-150-5p抑制序列慢病毒载体的构建、转染和表达

目的构建携带抑制表达hsa-miR-150-5p的慢病毒载体,建立稳定表达该载体的HT-29细胞。方法设计并合成hsa-miR-150-5p抑制序列,并克隆到工具载体GV-280(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建重组载体,将重组载体与p Helper1.0载体和p Helper2.0载体共转染293T细胞,得到所需的病毒液LV-hsa-miR-150-5p-down,最后感染HT-29细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株。荧光显微镜观察HT-29细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR检测hsa-miR-150-5p在HT-29细胞中的表达水平。结果测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组(转染过表达LV-hsa-miR-150-5p-down病毒)病毒滴度为5×10~8TU/ml,阴性对照组(转染阴性LV-NC病毒)病毒滴度为8×10~8TU/ml。所得病毒液感染HT-29细胞并筛选出稳定细胞株HT29-150-5p-down。荧光显微镜观察带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在人结肠癌HT-29细胞中高表达,PCR进一步验证了这一结果。结论 LV-hsa-miR-150-5p-down慢病毒载体构建成功,HT-29细胞稳定表达该载体,为后续miR-150的功能研究奠定基础。

阿替普酶联合抗血小板聚集治疗可影响急性缺血性脑卒中患者miR-150-5p及miR-199a表达水平

目的:观察阿替普酶联合抗血小板聚集治疗对急性缺血性脑卒中(AIS)患者miR-150-5p及miR-199a表达的影响。方法:选取150例AIS患者,随机分为对照组和观察组,每组75例。对照组予阿替普酶溶栓治疗,观察组在对照组的基础上联合抗血小板聚集治疗。比较2组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、改良Rankin评分量表(mRS)、Barthel指数、miR-150-5p及miR-199a表达变化情况。比较2组患者早期神经功能恶化的发生率。结果:2组患者治疗14 d后Barthel指数较治疗前升高,NIHSS、mRS评分较治疗前降低(P均<0.05)。与对照组比较,观察组治疗14 d后的临床总有效率、Barthel指数、血清miR-150-5p及miR-199a表达更高,而NIHSS、mRS评分更低(P均<0.05)。2组患者早期(1周内)神经功能恶化总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿替普酶联合抗血小板聚集治疗AIS患者,可减轻神经功能损害,提高患者生活自理能力,还可上调miR-150-5p及miR-199a表达。

hsa-miR-150再表达对Burkitt淋巴瘤增殖与凋亡的影响

目的探讨hsa-miR-150在正常人B淋巴细胞群及人Burkitt淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)中的表达,分析hsa-miR-150再表达对人BL细胞株Daudi及Raji体外增殖及凋亡的影响。方法采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)从扁桃体炎标本中分选出正常B淋巴细胞群,应用qRT-PCR技术检测hsa-miR-150在细胞群中的表达,同时检测hsa-miR-150在BL细胞株Daudi及Raji中的表达;将载有hsa-miR-150的慢病毒稳定转染Daudi及Raji,采用FCM、MTT及IP染色法观察hsa-miR-150再表达对Daudi及Raji细胞增殖与凋亡的影响。结果 FCM从扁桃体组织中分选出4群正常的B淋巴细胞群,分别为nave细胞(NC)、中心母细胞(CB)、中心细胞(CC)、记忆B细胞(MC),hsa-miR-150在NC、CB、CC、MC中的表达呈动态性,相对于NC,CB及CC低表达hsa-miR-150(P<0.001)。与正常B淋巴细胞相比,hsa-miR-150在Daudi及Raji中明显低表达(P<0.001)。与对照组相比,实验组细胞增殖明显受抑制(P<0.001),凋亡明显增加(P<0.001)。结论 hsa-miR-150对正常B淋巴细胞的分化具有重要作用,与BL的发生、发展可能存在一定关系;hsa-miR-150再表达可抑制Daudi及Raji细胞增殖,诱导其凋亡,为后续诱导分化治疗研究打下基础。

寻常型银屑病皮损中CXCL8、miR-150表达与病情严重程度相关

目的探讨寻常型银屑病患者皮损组织中CXC趋化因子配体8(CXCL8)、miR-150表达与病情严重程度的关系。方法选取2020年1月至2021年5月在南阳市第一人民医院接受治疗的80例寻常型银屑病患者皮损组织作为研究对象,并选其皮损旁正常组织作为对照,用银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)对银屑病患者病情进行分级,用免疫组化法检测CXCL8蛋白的表达,用RT-qPCR检测miR-150表达,用Western blot检测CXCL8蛋白表达,进一步分析CXCL8蛋白、miR-150表达水平与病情严重程度的相关性。结果寻常型银屑病患者皮损组织中CXCL8 mRNA水平高于正常组织(P<0.05),miR-150水平低于正常组织(P<0.05);患者皮损组织中CXCL8蛋白表达率为68.75%,明显高于正常组织的37.50%(P<0.05);在患者皮损组织中CXCL8蛋白的表达水平明显高于正常组织(P<0.05);miR-150水平随着病情的加重逐渐降低(P<0.05),CXCL8蛋白水平随着病情的加重逐渐升高(P<0.05);Pearson结果显示,寻常型银屑病患者miR-150水平与CXCL8蛋白水平及PASI评分之间均呈负相关(r=-0.467、-0.475,P<0.05),CXCL8蛋白水平与PASI评分之间呈正相关(r=0.424,P<0.05)。结论寻常型银屑病患者miR-150表达降低,CXCL8表达升高,二者均与患者病情严重程度相关。

hsa-miR-150-5p的生物信息学分析

目的探讨hsa-miR-150-5p在其基因家族的进化关系及可能介入的生物学过程。方法利用人类miRNA表达数据库(HMED)获得hsa-miR-150-5p在不同组织和疾病中特异性表达丰度信息,运用miRBase、Clustalw2和MEGA5.0分析软件获取hsa-miR-150-5p的染色体定位、碱基序列比对特征和进化规律等基本信息,通过miRDB、PicTar和TargetScan进行靶基因预测,采用基因本体(GO)和代谢通路富集分析(KEGG)对靶基因的生物学功能注释分析,进一步认识hsa-miR-150-5p的生物学功能。结果通过同源性搜索在miRBase数据中获得miR-150基因家族成员的序列36条,分布于23个物种。多序列比对发现miR-150基因家族成员序列碱基保守性很高,其中有16个碱基完全保守,6个碱基相对保守。进化分析表明人类的miR-150与青鳉、三文鱼、钳鱼、斑马鱼的分子系统进化关系较远,与其他18个物种的进化关系较近。对miRDB、PicTar和TargetScan预测的靶基因进行交集后共得到25个靶基因,GO分析结果显示靶基因参与多个信号通路的调节,包括转录因子、锌指蛋白、Toll样受体信号通路的转导蛋白、ATP偶联的离子型通道受体和细胞因子信号传导抑制蛋白等。结论 hsa-miR-150-5p在多种组织和疾病中表达,分布具有组织特异性,可能在机体的多种生理、病理过程中发挥重要作用,并可能通过调控多个靶基因而参与各个信号通路调节。

miR-150靶向调控IGF2BP2对肝癌恶性表型的影响机制

目的本研究旨在阐明miR-150在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用和靶点。方法采用热图分析方法,从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas)数据库下载的6组HCC组织与邻近肝组织之间差异表达的miRNA。采用实时定量聚合酶链反应检测miR-150在HCC组织和细胞系中的表达;采用侵袭小室试验评估HCC细胞的增殖、侵袭和迁移潜能。此外,利用TargetScan软件用于预测miR-150的潜在靶标,并通过蛋白印迹(Western blotting)和荧光素酶法测定miR-150与其靶基因的关系。结果通过热图分析法,发现在HCC组织中有31个miRNA表达异常,其中miR-150表达差异最为显著,且与患者预后密切相关。细胞实验上,高表达miR-150可通过调节胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白2(recombinant insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达显著降低人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论miR-150通过调控IGF2BP2抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,为HCC提供了新的治疗靶点。

miR-150靶向AOC3调控绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在通过探究miR-150与AOC3的靶标关系,揭示miR-150在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化过程中的作用机制。本研究以3只5日龄发育正常且健康的广灵大尾羊公羊为试验材料,采用qPCR方法检测广灵大尾羊皮下、肾周和尾部脂肪组织中miR-150的表达量;采集广灵大尾羊的尾部脂肪组织并分离绵羊前体脂肪细胞;通过细胞免疫荧光技术鉴定细胞纯度;利用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告试验验证miR-150与AOC3的靶标关系;转染miR-150 mimics和inhibitors并检测AOC3和成脂分化标志基因的表达情况;构建并转染绵羊AOC3基因的过表达和干扰载体至绵羊前体脂肪细胞,利用qPCR和Western blotting检测miR-150与AOC3在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;油红O染色检测成脂能力,上述试验方法均设立3个生物学重复。结果表明,miR-150在3个不同部位脂肪组织中尾部脂肪表达量最高,差异极显著(P<0.001)。与对照组相比,过表达miR-150后,AOC3基因和成脂标志基因的表达显著下调(P<0.05),且脂滴生成减少,抑制了绵羊前体脂肪细胞分化;抑制miR-150后,结果相反。miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,miR-150极显著降低了AOC3野生型的相对荧光活性(P<0.001)。过表达AOC3后,成脂分化标志基因的表达极显著上调(P<0.01),脂肪细胞产生了更多脂滴,AOC3促进了绵羊前体脂肪的分化;干扰AOC3后,结果相反。本研究表明,miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,在绵羊前体脂肪细胞分化的过程中,miR-150与AOC3的表达量呈负相关性,miR-150通过靶向AOC3抑制脂肪分化,研究结果为microRNAs(miRNAs)在分子水平上的研究提供了一定的理论依据。

尿沉渣miR-150-5p在IgA肾病无创诊断中的价值

背景IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一种发病率高且呈进展性的疾病,现主要确诊手段为肾穿刺活检,临床诊疗中需要研究无创且具有特异性的IgAN诊断标志物。目的检测IgAN患者尿沉渣miR-150-5p表达水平并评估其诊断IgAN的价值。方法根据已经发表的3项有关IgAN尿沉渣miRNA芯片的研究数据,筛选IgAN患者与正常人群之间差异性表达的miRNA,最终确定miR-150-5p在IgAN患者与正常人群中表达差异显著且趋势一致,是正常人群的(30.22~598.34)倍。为了验证芯片筛选的准确性,选取解放军总医院第一医学中心2018年10月-2019年2月的30例IgAN患者和30例正常人进行了小样本RT-PCR验证。为进一步明确其是否具有疾病特异性,选取解放军总医院第一医学中心2019年3月-2022年5月的144例IgAN患者、84例其他肾病患者[60例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)、8例微小病变型肾病(minimal change disease,MCD)、16例局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerular sclerosis,FSGS)]、67例正常人进行了较大样本的验证,比较miR-150-5p在IgAN组与不同疾病对照组之间的差异表达。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估差异性表达miRNA在无创诊断IgAN中的价值。结果在小样本验证研究中,RTPCR实验显示IgAN患者尿沉渣miR-150-5p与正常对照组相比显著升高[Md(IQR):25.632(5.868~61.523)vs 0.557(0.218~1.258),P<0.0001],与文献中芯片测量结果基本一致。在加入疾病对照组的较大样本研究中,IgAN组miR-150-5p表达水平显著高于疾病对照组[Md(IQR):12.606(3.939~34.431)vs 2.808(1.420~9.616),P<0.0001]。miR-150-5p在IgAN组中表达水平较MN组和FSGS组高(P<0.001),与MCD组之间差异无统计学意义(P=0.613)。miR-150-5p诊断IgAN的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.844,95%CI为0.804~0.885,最佳截断值为2.505,敏感度71.51%,特异度84.48%。结论miR-150-5p或可作为无创诊断IgAN的潜在标志物。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

右美托咪定调控miR-150-5p/P2X7受体轴减轻脑出血大鼠小胶质细胞活化

目的:探讨右美托咪定(DEX)对脑出血(ICH)大鼠小胶质细胞(MG)活化的影响以及对miR-150-5p/P2X7受体(P2X7R)轴的调控作用。方法:将大鼠分为假手术组(n=12)、模型组(n=63),建立ICH大鼠模型,DEX低(25μg/kg)和高剂量(50μg/kg)组、DEX(50μg/kg)+NC antagomir(20nmoL/L,5μL)组以及DEX(50μg/kg)+miR-150-5p antagomir(20nmoL/L,5μL)组,每组12只。腹腔注射,每日1次,每次0.2mL,连续给药7d。给药结束后24h,进行神经功能评分;分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β含量;分离出血区(海马CA2区)脑组织,检测脑组织含水量,HE染色观察组织病理变化,免疫荧光观察MG形态,qRT-PCR法检测miR-150-5p、P2X7R mRNA表达,Western blot法检测离子钙接头蛋白分子-1(Iba-1)、P2X7受体(P2X7R)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与P2X7R靶向关系。结果:与模型组比较,DEX低、高剂量组脑组织病理变化逐渐减轻,红细胞与炎性细胞浸润减轻,核固缩现象减少;MG数量明显减少,胞体变小;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达明显升高(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与DEX高剂量组、DEX+NC antagomir组比较,DEX+miR-150-5p antagomir组可见大量红细胞和炎性细胞浸润,脑组织结构紊乱,细胞排列无序;MG数量显著增多,胞体变大;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达均明显降低(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明P2X7R是miR-150-5p的下游靶基因。结论:DEX能够通过上调miR-150-5p、下调P2X7R表达抑制MG活化,在ICH中发挥保护作用。

急性冠脉综合征病人血清LCN-2、hs-CRP水平及miR-150-5p表达与危险分层的关系

目的:分析急性冠脉综合征(ACS)病人血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(LCN2)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平和miR-150-5p表达与危险分层的关系。方法:选取2018年7月—2019年10月我院收治的经冠状动脉造影检查满足ACS相关诊断标准的病人163例作为ACS组,根据全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分系统将163例ACS病人分为低危组(≤108分,76例)、中危组(109~140分,54例)、高危组(>140分,33例)。选取同期于我院体检的200名健康人群作为对照组。检测各组病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达,采用Spearman秩相关分析各指标与ACS危险分层的相关性,采用Logistic回归分析ACS的危险因素。结果:ACS组病人血清LCN2、hs-CRP水平高于对照组,miR-150-5p表达低于对照组(P<0.05)。与低危组比较,中危组、高危组LCN2、hs-CRP表达升高,miR-150-5p表达降低(P<0.05);与中危组比较,高危组LCN2、hs-CRP水平升高,miR-150-5p表达降低(P<0.05)。血清LCN2、hs-CRP表达与ACS危险分层呈正相关(P<0.05),miR-150-5p表达与ACS危险分层呈负相关(r s=-0.58,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清LCN2每增加1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.921倍;血清hs-CRP每上升1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.733倍;miR-150-5p每上升1个相对值,ACS发病的风险增加3.672倍;血脂异常相对于血脂正常,ACS发病的风险增加2.623倍;有吸烟史相对于无吸烟史,ACS发病的风险增加1.081倍。结论:ACS病人血清高LCN2、高hs-CRP水平和低miR-150-5P表达与ACS病人危险分层相关,对预测ACS危险分层有较高的临床价值。