miR-196a2 T>C基因多态与宫颈癌易感性的关系研究

目的：探讨mi R-196a2 T〉C基因多态与江苏人群宫颈癌遗传易感性的关系。方法 ：选择经组织学确诊的509例新发宫颈癌患者作为病例组,与病例组人群不存在生物学相关的562例正常人群作为对照组,利用Taqman实时荧光定量PCR技术检测基因型;选择宫颈鳞状细胞癌标本20例,实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测各基因型mi R-196a的表达量;Logistic回归模型计算基因型与人群罹患宫颈癌的风险比（odds ratio,OR）及其95%的可信区间（95%CI）。结果：携带mi R-196a2突变纯合子CC个体罹患宫颈癌的风险明显高于TT基因型个体（OR=1.45,95%CI：1.04~2.09）,携带TC/CC基因型个体增加约33%的宫颈癌发病风险（OR=1.33,95%CI：1.06~1.81）;对宫颈鳞状细胞癌（cervical squamous cell carcinoma,CSCC）分析,与TT基因型比较,含突变纯合子CC个体罹患CSCC的风险明显升高（OR=1.49,95%CI：1.05~2.11）,携带TC/CC基因型个体增加约31%的CSCC发病风险（OR=1.31,95%CI：1.00~1.73）;RT-q PCR显示,在宫颈鳞癌组织中CC及CT/CC基因型与TT基因型相比,成熟mi R-196a的表达水平明显升高。结论 ：Mi R-196a2 T〉C多态变异与中国江苏人群宫颈癌遗传易感性关联密切。

miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中mi R-196b和Hox B8的表达及临床意义。方法选取2012年10月-2014年3月在该院手术治疗的47例结直肠癌患者为研究对象,术中留取结直肠癌组织及正常黏膜组织,应用实时荧光定量PCR技术检测二者mi R-196b m RNA和Hox B8 m RNA表达情况,Hox B8蛋白表达检测应用Western blot,对检测结果进行统计学分析。结果结直肠癌组织中mi R-196b m RNA和Hox B8 m RNA表达量显著高于正常黏膜组织(P<0.01),且结直肠癌中两者表达水平呈显著负相关(r=-0.462,P=0.012);mi R-196b表达与肿瘤分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而Hox B8表达与结直肠癌临床病理特征不具有相关性(P>0.05)。结论结直肠癌组织中mi R-196b及Hox B8表达水平显著升高,mi R-196b不仅参与结直肠癌的发生发展,而且可能抑制Hox B8表达。

丙型肝炎患者血清hsa-miR-17-5p和hsa-miR-223-3p表达及意义

目的探讨丙型肝炎(丙肝)患者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p的表达情况及意义。方法采用实时荧光定量PCR检测30例丙肝患者和32例体检健康者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p的表达水平。结果丙肝组血清hsa-mi R-17-5p相对表达量[1.96(1.27,2.82)]比体检健康组[1.29(1.01,1.52)]显著升高(Z=2.94,P<0.05),而丙肝组血清hsami R-223-3p相对表达量[0.29(0.22,0.39)]比体检健康组[0.56(0.45,0.64)]显著降低(Z=4.21,P<0.05)。体检健康组hsa-mi R-17-5p表达水平与丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性均无相关性(r分别为0.316和0.073,P>0.05);hsa-mi R-223-3p表达水平与ALT和AST活性亦无相关性(r分别为0.063和0.121,P>0.05)。而丙肝组hsa-mi R-17-5p表达水平与ALT和AST活性存在正相关(r分别为0.985和0.972,P<0.05);hsa-mi R-223-3p表达水平与ALT和AST活性存在负相关(r分别为-0.446和-0.450,P<0.05)。结论丙肝患者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p表达失调,hsa-mi R-17-5p有望成为判断丙肝患者肝损伤的潜在分子标志物。

miR-196a2单核苷酸多态性与白血病发病风险的初步研究

背景与目的:mi R-196a2在肿瘤的发生、发展中起类似于原癌基因的生物学功能。其表达升高会促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,有望成为重要的肿瘤标志物。该研究旨在探讨mi R-196a2基因多态性位点rs11614913与白血病发病风险的关系。方法:采用病例-对照分析方法,收集2009年1月—2015年7月在烟台山医院检查确诊的210例白血病患者(病例组)及同期体格检查健康的250名正常体检者(对照组)的骨髓血或外周血,限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测mi R-196a2基因多态性位点rs11614913的基因型,应用χ2检验比较各基因型频率在病例组和对照组中的差异,采用Logistic回归分析计算SNP的等位基因的比值比(odds ratio,OR)和95%CI表示各基因型发生白血病的风险度。结果:病例组和对照组相比,mi R-196a2 rs11614913的T/T、C/C、C/T基因型频率的分布差异有统计学意义(P<0.05),携带突变型纯合子C/C基因型的个体患白血病风险是野生纯合子T/T基因型个体的2.661倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-196a2基因多态性位点rs11614913与白血病发病风险有关,突变型纯合子C/C或携带C等位基因可能是白血病发生的危险因素。

hsa-miR-20a低表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定

目的:构建hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,检测其在HL-60中表达。方法:采用In-fusion重组交换克隆法设计并合成hsa-mi R-20a前体序列的扩增引物,扩增获得目的片段插入慢病毒GV159中,得到重组的LV-hsa-mi R-20a表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带hsa-mi R-20a的重组慢病毒并测定病毒滴度。取对数生长期HL-60细胞根据病毒滴度及细胞MOI值感染慢病毒,感染后24 h、48 h、72 h、96 h镜下观察荧光表达情况,判断感染效率,q RT-PCR检测HL-60细胞hsa-mi R-20a的表达变化。结果:成功构建LV-hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,其病毒滴度为(8E+8)TU/m L。该病毒感染HL-60细胞的效率可高达到80%,并可有效降低HL-60细胞hsa-mi R-20a表达水平。结论:成功构建了hsa-mi R-20a低表达慢病毒载体,包被的慢病毒可以在HL-60细胞中实现低表达效果,为后续功能研究奠定了基础。

人类微小RNA196a在早期胃癌中异常表达的生物学意义

目的明确人类微小RNA196a(hsa-mi R-196a)在早期胃癌中异常表达模式,探讨其异常表达在早期胃癌发生与发展过程中的生物学作用。方法收集作者医院57例临床标本的包括52例早期胃癌患者手术及全血标本和5例非癌患者全血标本,以混合的正常人全血标本为对照,采用实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测hsa-mi R-196a在早期胃癌患者中的表达水平。利用生物信息学数据库预测hsa-mi R-196a调控的靶基因及信号通路。结果在52例早期胃癌标本中,44例(44/52,84.6%)手术标本高表达hsa-mi R-196a;42例(42/52,80.8%)全血标本高表达hsa-mi R-196a。利用生物信息学方法获得了211个可能受hsa-mi R-196a所调控的靶基因,这些靶基因参与了多条肿瘤相关信号通路。结论人类微小RNA196a在早期胃癌中高表达,这一表达模式可能通调控多条肿瘤相关信号通路参与胃癌的早期进展。