胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因预测及生物信息学分析

目的:研究胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因,并分析其参与的生物学过程和信号转导通路,为胃癌耐药机制的表观遗传学研究提供前期基础.方法:通过NCBI数据库检索hsa-miR-194-5p的基本信息;使用预测数据库预测hsa-miR-194-5p的靶基因;使用DAVID数据库对靶基因集合进行功能富集分析(GO)和信号转导通路富集分析(KEGG).结果:成熟的miR-194-5p序列多个物种之间具有高度保守性.预测靶基因共325个,参与的生物学过程主要有Golgi组织和细胞对DNA损伤刺激的反应(P<0.01),分子功能包括泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白水解(P<0.01),细胞组分富集在细胞核和细胞表面,调控包括TGF-β和WNT等多条信号转导通路(P<0.01).结论:miR-194-5p的靶基因SMURF1、RAC1、MAPK1与胃癌细胞的增殖密切相关.

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

circBFAR调控hsa-miR-424-5p及PI3K-Akt信号通路基因促进胰腺癌进展的机制研究

目的探讨circBFAR在胰腺癌中的差异表达及其作用分子机制。方法在GSE69362数据集中分析circBFAR在胰腺癌和对照组织中的差异表达。利用TCGA数据库鉴定了胰腺癌和对照组织间的差异表达miRNAs(DEmiRs),并与circBFAR的靶标miRNAs进行交集分析。在GSE62452和GSE28735数据集中鉴定了胰腺癌和对照组织间的差异表达mRNAs(DEmRs),并与靶标DEmiRs的靶向调控mRNAs进行交集分析。对circBFAR靶标DEmiRs调控的DEmRs进行富集分析,筛选出参与PI3K-Akt信号通路的基因并绘制生存曲线。收集10例胰腺癌组织及相应的癌旁对照组织样本,进行RT-qPCR和Western blot检测PI3K-Akt信号通路基因的表达。在胰腺癌细胞系PANC-1中敲降circBFAR或hsa-miR-424-5p,将细胞分为五组进行实验:对照组;si-circNC组;si-circBFAR组;si-circBFAR+inhibitor NC组;si-circBFAR+hsa-miR-424-5p inhibitor组。利用CCK-8检测细胞活性,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,利用RT-qPCR和Western blot检测信号通路基因的表达。结果circBFAR在胰腺癌组织中的表达显著高于对照组(P<0.001)。在鉴定的靶标DEmiRs中,hsa-miR-424-5p在胰腺癌中低表达(P<0.01)。hsa-miR-424-5p调控的靶标DEmRs中,LAMA3、ITGA3、MET和AREG参与PI3K-Akt信号通路,在胰腺癌中高表达时患者预后不良(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,circBFAR、LAMA3、ITGA3、MET和AREG在胰腺癌患者中高表达,而hsa-miR-424-5p则低表达。在PANC-1细胞中转染si-circBFAR显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭,以及LAMA3、ITGA3、MET和AREG的表达。转染hsa-miR-424-5p inhibitor抑制了si-circBFAR对细胞的影响(P<0.01)。结论circBFAR通过调控hsa-miR-424-5p及其靶向基因LAMA3、ITGA3、MET和AREG的表达,参与PI3K-Akt信号通路,促进了胰腺癌的进展。抑制circBFAR可能成为胰腺癌治疗的潜在策略。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

miRNA-194-5p通过减少神经炎症降低脑卒中风险

目的探讨miRNA-194-5p通过减少神经炎症降低急性缺血性脑卒中风险。方法采集72例急性缺血性脑卒中(AIS)患者和72例无脑血管病健康志愿者外周血,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清中miRNA-194-5p表达量。脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型培养。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中炎症因子水平,采用Western印迹检测肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6蛋白表达。结果脑卒中患者血清中miRNA-194-5p表达显著低于正常组(P<0.05)。与正常组比较,在LPS诱导的HUVECs模型中miRNA-194-5p的表达被显著抑制(P<0.05),但激活miRNA-194-5p能够抑制HUVECs上清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,与空白组对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。下调miRNA-194-5p表达,HUVECs上清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平被激活,与正常空白组对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-194-5p与TRAF6的荧光素酶表达量显著低于空白组与TRAF6组。在激活miRNA-194-5p后,TRAF6 mRNA表达量受到显著抑制。下调TRAF6可显著减少下调miRNA-194-5p对HUVECs上清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平的影响,与miRNA-194-5p下调组对比,差异均有统计学意义。结论miRNA-194-5p能够通过抑制TRAF6表达,减少神经炎症,降低脑卒中风险,miRNA-194-5p有希望成为临床治疗脑卒中相关神经炎症的重要指标。

Hsa-miR-98-5p/DKK3信号轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:乳腺癌威胁着全世界女性的健康。虽然已发现大量微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,但仍需要构建一个完整的miRNA-信使RNA(messenger RNA,mRNA)网络。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载乳腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间差异表达的miRNA。利用miRDB、miRTarBase和StarBase数据库分析差异miRNA靶向的基因。使用R语言中的ClusterProfiler包对靶基因进行富集分析。使用String数据库联合Cytoscape 3.6.2软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析及Hub基因的筛选;构建miRNA-Hub mRNA调控网络确定研究信号轴,然后通过细胞实验进行验证。结果:采用TCGA数据集识别出两个差异miRNAs。3个数据库取交集预测得到278个靶基因。共鉴定出10个Hub基因,从构建的miRNA-Hub基因网络图中发现,hsa-miR-98-5p/DKK3轴可能在乳腺癌的进展中起关键作用。细胞功能学实验证实hsa-miR-98-5p可抑制细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验进一步验证了hsa-miR-98-5p与DKK3的结合作用。结论:本研究首先通过生物信息学分析鉴定出一个与乳腺癌进展相关的hsa-miR-98-5p/DKK3轴,初步证实hsa-miR-98-5p可通过靶向DKK3抑制乳腺癌细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。

红树莓提取物通过miR-194-5p/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨红树莓提取物对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞AGS,分为对照组(NC组,细胞常规培养24 h)、不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)红树莓提取物组(分别用20、40、80、160 mg/ml红树莓提取物干预AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-194-5p组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-194-5p的AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-NC组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-NC的AGS细胞24 h),CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中MMP-2、MMP-9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-194-5p表达。结果与NC组比较,胃癌细胞AGS经不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)的红树莓提取物干预24 h后,细胞A值、迁移数和侵袭数及细胞中MM-P2、MMP-9表达明显降低(P<0.05),而miR-194-5p表达明显升高(P<0.05)。与NC组比较,80 mg/ml的红树莓提取物降低了AGS细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达(P<0.05)。与转染anti-miR-NC的AGS细胞比较,80 mg/ml的红树莓提取物作用的敲减miR-194-5p的AGS细胞A值、迁移数和侵袭数及MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达升高(P<0.05)。结论红树莓提取物可能通过上调miR-194-5p及阻碍PI3K/AKT信号通路来抑制胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭。

hsa-miR-340-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路。方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性。运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选。结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守。采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9%。GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能。KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中。基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A。结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程。

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低(P<0.05),LMNB1表达水平明显升高(P<0.05)。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。

miR-194-5p靶向TSPAN1基因对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:本研究旨在探究miR-194-5p靶向TSPAN1基因对人皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:收集癌组织和癌旁正常皮肤组织,检测组织中TSPAN1和miR-194-5p的表达。双荧光素酶报告实验证实miR-194-5p与TSPAN1的靶向关系。取正常皮肤细胞作为Normal组,CSCC细胞给予miR-194-5p agomir、miR-194-5p antagomir、sh-RNA-TSPAN1处理。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中凋亡和上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。MTT检测各组细胞增殖活力;Transwell检测各组细胞侵袭情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果:组织实验中,相对于Normal组,CSCC组织中miR-194-5p表达降低,TSPAN1表达升高。双荧光素酶报告实验证实TSPAN1为miR-194-5p的靶基因。细胞实验中,相对于Blank组,miR-194-5p agomir组、shRNA-TSPAN1组中细胞增殖、侵袭和EMT被抑制,凋亡加快(均P<0.05)。而miR-194-5p antagomir组细胞增殖、侵袭和EMT被诱导,凋亡被抑制(均P<0.05)。结论:miR-194-5p能够靶向抑制TSPAN1基因,抑制CSCC细胞增殖和侵袭,诱导其凋亡。

Hsa-miR-486-5p的肿瘤及细胞骨架相关靶基因的预测分析

microRNAs的功能研究离不开其靶基因的预测。本文利用TargetScan预测软件预测分析hsa-miR-486-5p的肿瘤及细胞骨架相关靶基因。通过分析这些靶基因在肿瘤中的主要功能,为hsa-miR-486-5p的功能研究奠定基础,同时对其他microRNAs的功能研究提供有力的参考。

hsa-miR-21-5p靶基因预测及其在急性肾损伤中的调控机制

目的:对hsa-miR-21-5p进行靶基因预测及生物信息学分析,为验证hsa-miR-21-5p靶基因及进一步研究hsa-miR-21-5p在急性肾损伤(AKI)中的调控作用提供数据支持。方法:应用Pubmed、Google等检索工具,以miR-21和AKI为关键词,检索miR-21与AKI相关的所有文献;应用miRBase获取各物种miR-21-5p序列,分析保守性;利用miRecord数据库进行靶基因预测,选取PicTar、PITA、RNAhybrid和TargetScan预测靶基因交集和DIANA LAB-TarBase 6.0已有实验数据支持的hsa-miR-21-5p靶基因作为研究的基因集合,进行功能注释、功能富集性分析(GO-analysis)及信号转导通路富集性分析。结果:miR-21水平在AKI肾脏、血及尿中均升高。miR-21-5p在多物种间具有序列保守性。hsa-miR-21-5p预测靶基因富集于生长发育、物质代谢与合成、细胞运动、细胞周期、增殖、凋亡、分化等生物学过程及蛋白连接、转录因子活性、转移酶活性、染色质结合、核苷酸结合、核苷结合、核酸结合、转录激活活性、连接酶活性等分子功能上,存在于胞内细胞器、细胞器界膜、细胞器组分、蛋白复合体、非膜性细胞器、细胞器管腔、极性生长位点等细胞组分中。预测靶基因富集于P53、TGF-β、细胞周期、MAPK、腺癌、膀胱癌、癌症通路、小细胞肺癌、慢性粒细胞白血病、黑色素瘤、前列腺癌、脑胶质瘤、大肠癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、肌萎缩性侧索硬化症共16条通路中。结论:(1)miR-21水平在AKI肾脏、血及尿中均升高,对AKI有保护作用;(2)miR-21-5p在多物种间具有高度保守性;(3)hsa-miR-21-5p参与了多种生理、病理过程;(4)hsa-miR-21-5p对多条通路具有调控作用,可能通过调节细胞凋亡、炎症反应等参与AKI病理生理过程。

基于miR-194-5p/Syk/NF-κB信号轴探讨芪藤消浊颗粒治疗慢性肾小球肾炎的机制研究

目的研究芪藤消浊颗粒通过调控miR-194-5p/Syk/NF-κB信号轴治疗慢性肾小球肾炎(CGN)大鼠的作用机理。方法SD大鼠通过尾静脉注射阿霉素复制CGN模型,模型建立成功后,随机分成模型组、芪藤消浊颗粒低(5.4 g/kg)、中(10.8 g/kg)、高(21.6 g/kg)剂量组和黄葵胶囊组(1.0g/kg),各组大鼠连续一月灌胃相应药物或溶媒。末次给药后,检测各组大鼠24 h尿蛋白、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量及变化。HE染色法检测CGN大鼠肾组织的病理改变。RT-PCR检测肾组织中miR-194-5p、Syk、p50、p65、Fos mRNA的表达;Western blot检测肾组织中Syk、p-Syk、p50、p65、Fos蛋白表达;双荧光素酶实验验证Syk与miR-194-5p之间的相互作用。结果芪藤消浊颗粒可以显著降低24 h尿蛋白、血清BUN和血清Scr水平。HE病理学观察表明芪藤消浊颗粒可改善CGN大鼠肾小球萎缩、肾小球基底膜变厚和炎症细胞浸润。芪藤消浊颗粒可降低肾脏组织中Syk、p50、p65、Fos mRNA及Syk、p-Syk、p50、p65、Fos蛋白的表达水平,升高miR-194-5pmRNA表达水平。双荧光素酶实验表明miR-194-5p可能通过结合Syk 3’UTR来调控Syk的表达。结论芪藤消浊颗粒可能通过调控miR-194-5p/Syk/NF-κB信号通路,减轻肾组织炎性反应,治疗CGN。

Hsa-miR-205-5p对食管鳞癌细胞系耐药的影响

目的研究hsa-miR-205-5p对食管鳞癌铂类化疗耐药的影响。方法首先用RT-PCR法检测hsa-miR-205-5p在食管鳞癌耐药细胞系EcA109和敏感细胞系KYSE150中的表达。然后在EcA109和KYSE150中分别转染hsa-miR-205-5p mimics,mimics NC和hsa-miR-205-5p inhibitor,inhibitor NC,用MTT和CCK8法检测奥沙利铂浓度为60,120,240,480,960μmol/L对细胞增殖的影响。结果 hsa-miR-205-5p在食管癌耐药细胞系EcA109比在敏感细胞系KYSE150中低表达(P<0.05)。MTT和CCK8实验结果表明,与转染NC组相比,随着奥沙利铂浓度的增加,转染hsa-miR-205-5p mimics组的EcA109细胞抑制率上升(P<0.05),转染hsa-miR-205-5p inhibitor组的KYSE150细胞抑制率下降(P<0.05)。结论转染hsa-miR-205-5p mimics后Ec A109细胞对奥沙利铂敏感性提高,转染hsa-miR-205-5p inhibitor后KYSE150细胞对奥沙利铂耐药性增加。说明hsa-miR-205-5p过表达可抑制食管鳞癌细胞产生耐药性。

毛细血管内增生性肾小球肾炎患儿肾穿刺组织中miR-194-5p表达意义及与eIF3f的相关性

目的:观察微小RNA-194-5p(MicroRNA-194-5p,miR-194-5p)在毛细血管内增生性肾小球肾炎(endocapillary proliferation glomerulonephritis,EnPGN)患儿穿刺组织中的表达,分析与真核翻译起始因子3f(eukaryotic translation initiation factor 3f,eIF3f)的关系。方法:选择69例EnPGN患儿作为观察组,同时选择69例微小病变性肾小球病患儿作为对照组,均行肾穿刺后行病理活检,应用实时荧光定量PCR法检测两组中miR-194-5p的表达,应用免疫组化法检测两组中eIF3f的表达。结果:观察组肾穿刺组织的病变均呈典型的病理形态。观察组中miR-194-5p的表达明显低于对照组,观察组中eIF3f的表达明显高于对照组,观察组中miR-194-5p的表达在不同病程、是否伴有新月体及急性肾损伤的分组中差异有统计学意义。观察组中eIF3f的表达在有无急性肾损伤的分组中差异有统计学意义。相关分析显示miR-194-5p与eIF3f具有负相关性。结论:miR-194-5p在EnPGN患儿肾穿刺组织中的表达下降,并参与病变的进展。miR-194-5p与eIF3f具有负相关性。

miR-194-5p通过靶向TLR4/NF-κB通路调控免疫因子IL-6/10对肾病综合征大鼠细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-194-5p通过靶向Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子(nuclear factor,NF)-κB通路调控免疫因子(interleukin,IL)-6/10对肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)大鼠肾细胞凋亡的影响。方法将通过嘌呤霉素氨基核苷构建的NS大鼠随机分为NS组、NS+miR-194-5p agomir组和NS+miR-194-5p antagomir组(n=15),通过腹腔内注射miR-194-5p agomir或antagomir(300μg)以提高或抑制miR-194-5p。检测各组大鼠肾功能指标、炎性因子、凋亡情况以及TLR4/NF-κB通路水平。通过双荧光素酶报告验证miR-194-5p和TLR4的靶向关系。将肾胚细胞293细胞分为miR-194-5p NC组和miR-194-5p mimic组,通过转染miR-194-5p mimic过表达miR-194-5p,通过RT-qPCR和Western blot检测各组TLR4 mRNA和蛋白水平。结果NS组的24 h尿蛋白、肌酐、凋亡指数、IL-6、IL-10、TLR4和NF-κB蛋白表达水平均显著高于健康组(P<0.05);与NS组比较,NS+miR-194-5p antagomir组大鼠的24 h尿蛋白、肌酐、凋亡指数、IL-6、TLR4和NF-κB蛋白表达水平均显著升高,IL-10水平显著降低(P<0.05);NS+miR-194-5p agomir组的24 h尿蛋白、肌酐、凋亡指数、IL-6、IL-10、TLR4和NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-194-5p可以与TLR4靶向结合。miR-194-5p mimic组细胞中的TLR4 mRNA和蛋白表达水平显著低于miR-194-5p NC组(P<0.05)。结论miR-194-5p可通过靶向抑制TLR4/NF-κB通路减少免疫炎性因子的释放和抑制细胞凋亡,从而缓解肾组织损伤缓解NS。

hsa-miR-150-5p的生物信息学分析

目的探讨hsa-miR-150-5p在其基因家族的进化关系及可能介入的生物学过程。方法利用人类miRNA表达数据库(HMED)获得hsa-miR-150-5p在不同组织和疾病中特异性表达丰度信息,运用miRBase、Clustalw2和MEGA5.0分析软件获取hsa-miR-150-5p的染色体定位、碱基序列比对特征和进化规律等基本信息,通过miRDB、PicTar和TargetScan进行靶基因预测,采用基因本体(GO)和代谢通路富集分析(KEGG)对靶基因的生物学功能注释分析,进一步认识hsa-miR-150-5p的生物学功能。结果通过同源性搜索在miRBase数据中获得miR-150基因家族成员的序列36条,分布于23个物种。多序列比对发现miR-150基因家族成员序列碱基保守性很高,其中有16个碱基完全保守,6个碱基相对保守。进化分析表明人类的miR-150与青鳉、三文鱼、钳鱼、斑马鱼的分子系统进化关系较远,与其他18个物种的进化关系较近。对miRDB、PicTar和TargetScan预测的靶基因进行交集后共得到25个靶基因,GO分析结果显示靶基因参与多个信号通路的调节,包括转录因子、锌指蛋白、Toll样受体信号通路的转导蛋白、ATP偶联的离子型通道受体和细胞因子信号传导抑制蛋白等。结论 hsa-miR-150-5p在多种组织和疾病中表达,分布具有组织特异性,可能在机体的多种生理、病理过程中发挥重要作用,并可能通过调控多个靶基因而参与各个信号通路调节。

miR-194-5p靶向调控BCKDHA基因的表达

旨在预测并验证调控支链氨基酸分解代谢的限速酶支链α-酮酸脱氢酶复合体(Branched-chainα-ketoacid dehydrogenase complex,BCKDH)中α亚基即BCKDHA基因表达的关键miRNA。本研究利用3个在线软件预测与该基因具有靶标关系的miRNAs。利用荧光定量PCR检测小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中和超表达后关键miRNA与BCKDHA的表达量。结果表明,miR-194-5p是调控BCKDHA表达的一个关键miRNA,其种子序列与BCKDHA3′UTR第190~196位碱基完全互补。MiR-194-5p的表达随分化时间呈下降趋势,而BCKDHA mRNA则呈上升趋势。双荧光素酶报告结果也显示二者具有靶标关系,miR-194-5p下调BCKDHA的表达。超表达miR-194-5p后,BCKDHA的表达显著下调(P<0.05)。由此证明,miR-194-5p通过与BCKDHA基因3′UTR结合抑制其表达。

敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1调控微小RNA-194-5p/叉头框蛋白A1通路对脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺损伤(ALI)体外模型.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测HPAEpiC细胞中MALAT1、miR-194-5p的表达水平,构建MALAT1敲降载体、miR-194-5p抑制剂及FOXA1抑制剂转染HPAEpiC,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、LPS+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂组、LPS+MALAT1抑制剂+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂+miR-194-5p抑制剂组和LPS+FOXA1抑制剂组.采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒、流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测MALAT1或其敲降后对LPS诱导的HPAEpiC增殖及凋亡和FOXA1表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA-MALAT1、miR-194-5p及FOXA1的靶向调控关系.结果与空白对照组比较,LPS可上调HPAEpiC-MALAT1的表达,促进HPAEpiC凋亡并抑制其增殖〔MALAT1(2^(-ΔΔCt)):0.83±0.09比0.15±0.02,HPAEpiC凋亡率:(21.31±2.31)%比(5.41±0.42)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.42±0.03比0.54±0.02,均P<0.05〕;与LPS+生理盐水组比较,敲降MALAT1可抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔细胞凋亡率:(6.40±0.40)%比(21.38±2.31)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.53±0.03比0.40±0.02,均P<0.05〕,降低MALAT1的表达(2-ΔΔCt:0.20±0.03比1.02±0.09,P<0.05).双荧光素酶报告基因及Western Blot证实,敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p从而抑制FOXA1在LPS诱导的HPAEpiC中的表达〔miR-194-5p(2^(-ΔΔCt)):5.27±0.15比1.21±0.09,FOXA1蛋白表达(灰度值):0.36±0.05比1.00±0.07,均P<0.05〕,miR-194-5p抑制剂能逆转MALAT1敲降在LPS诱导的HPAEpiC中对FOXA1的作用〔FOXA1蛋白表达(灰度值):2.76±0.20比1.00±0.07,P<0.05〕,抑制FOXA1表达能减轻LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔FOXA1蛋白表达(灰度值):0.28±0.03比1.00±0.03,HPAEpiC凋亡率:(6.78±0.38)%比(19.21±0.70)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.59±0.20比0.41±0.02,均P<0.05〕.结论敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p抑制FOXA1的表达,进而抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡,为脓毒症ALI的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点.

血清hsa-miR-486-5p在乳腺癌早期诊断中的价值

目的探讨与乳腺癌早期诊断密切相关的血清microRNA(miRNA)的临床价值。方法对乳腺癌发生发展4个阶段(正常-非典型增生-原位癌-浸润性癌)的组织进行miRNA高通量测序,以得到与疾病进展密切相关的目标miRNA,进而利用RT-qPCR技术分析目标miRNA在4个阶段血清中的表达情况。结果 hsa-miR-486-5P在乳腺癌发生发展4个阶段的组织和血清中均随疾病进展呈下调状态,在早期乳腺癌患者血清中呈明显低表达,与乳腺癌分子分型无关(P>0.05)。早期乳腺癌组低表达的血清hsa-miR-486-5p与正常对照组相比呈显著差异性(P<0.01);ROC曲线分析结果显示ROC曲线下面积(AUC值)为81.2%(95%CI:0.707～0.917),灵敏度和特异度分别为62.5%和90.3%。结论血清hsa-miR-486-5p可以作为诊断早期乳腺癌的生物标志物,具有较高的临床应用价值。