miR-19b-3p靶向IGF-1参与绒毛膜癌发生发展的机制研究

目的探究miR-19b-3p靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与绒毛膜癌增殖、侵袭和转移的机制。方法以人绒毛膜癌细胞系JEG-3为研究对象,A组:miR-19b-3p mimics组,B组:miR-19b-3p mimics NC组,C组:miR-19b-3p inhibitor组,D组:miR-19b-3p inhibitor NC组,E组:空白对照组。A组、B组、C组、D组按照分组情况进行相应转染,E组不做任何处理。分别用Real-time PCR和Western blot检测五组miR-19b-3p RNA和IGF-1蛋白表达水平,采用CCK-8法测定细胞增殖,采用划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定细胞迁移和侵袭能力,并进行比较;采用双荧光素酶(Dualluciferase)报告实验验证miR-19b-3p对IGF-1的靶向关系。结果与E组的(0.98±0.13)相比,A组miR-19b-3p mRNA表达水平(2.23±0.16)明显上调,C组miR-19b-3p mRNA表达水平(0.73±0.08)明显下调(P<0.05)。与E组的(1.03±0.03)nmol/L相比,A组IGF-1蛋白表达水平(1.48±0.12)nmol/L明显上调,C组IGF-1蛋白表达水平(0.76±0.05)nmol/L明显下调(P<0.05)。72 h时,与E组的(5.03±0.14)%相比,A组细胞增殖活力(10.34±0.87)%明显增加,C组细胞增殖活力(2.42±0.13)%明显下调(P<0.05);与E组的(1.09±0.07)mm相比,A组细胞划痕迁移距离(1.45±0.08)mm明显增加,C组细胞划痕迁移距离(0.73±0.07)mm明显减少(P<0.05)。与E组的(103.00±7.00)个相比,A组侵袭细胞数(173.00±4.00)个明显增加,C组侵袭细胞数(82.00±1.00)个明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示:miR-19b-3p转染WT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.57±0.08)Kat低于miR-NC的(0.95±0.06)Kat(P<0.05);miR-19b-3p转染MUT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.98±0.05)Kat与miR-NC的(0.96±0.06)Kat比较无明显差异(P>0.05)。结论miR-19b-3p靶向上调IGF-1促进绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移。

肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

血清微小RNA-19b-3p、微小RNA-933水平对老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的评估价值

目的 探讨血清微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、微小RNA-933(miR-933)水平对老年慢性心力衰竭患者心功能、预后的评估价值。方法 选取收治的108例老年慢性心力衰竭患者作为研究组。研究组中,根据纽约心脏学会(NYHA)分级,分为Ⅱ级患者35例,Ⅲ级患者40例,Ⅳ级患者33例。选择同期体检的90例健康人群作为对照组。入院后检测血清miR-19b-3p、miR-933水平。采用超声心动图测量心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)]。采用Pearson相关分析法分析血清miR-19b-3p、miR-933水平与心功能的关系。根据老年慢性心力衰竭患者入院1年内是否发生终点事件分为发生组(n=34)和未发生组(n=74)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭预后的预测价值。采用多因素Cox回归分析法分析老年慢性心力衰竭患者预后的影响因素。结果 研究组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能分级Ⅳ级患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,LVEDD大于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,差异有统计学意义(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.554、-0.368,P<0.001);血清miR-933水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.505、-0.410,P<0.001)。发生组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的曲线下面积(AUC)为0.835(95%CI:0.785~0.885)、0.843(95%CI:0.790~0.890),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.851~0.951)。血清miR-19b-3p(HR=3.762,95%CI:1.854~7.634)、miR-933(HR=3.480,95%CI:1.903~6.364)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分(HR=3.047,95%CI:1.837~5.051)为老年慢性心力衰竭患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论 老年慢性心力衰竭患者的血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表达。miR-19b-3p、miR-933水平变化与心功能及预后密切相关,其可作为预测老年慢性心力衰竭患者预后不良的有效指标。

替米沙坦联合羟苯磺酸钙通过miR-19b-3p/SOCS1轴调节自发性高血压主动脉的抗炎作用

目的探讨替米沙坦联合羟苯磺酸钙在自发性高血压中对主动脉的保护作用及作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠及其WKY大鼠随机分为(n=6):对照组(WKY)、SHR+NC组(未经处理的SHR大鼠)、SHR+替米沙坦组(替米沙坦治疗的SHR大鼠)、SHR+CAD组(CAD治疗的SHR大鼠)、替米沙坦+CAD组(替米沙坦和CAD联合治疗的SHR大鼠),每组6只。利用苏木精-伊红染色观察治疗前后主动脉血管的变化情况;利用ELISA检测炎症因子的表达水平。利用TargetScan预测miR-19b-3p的下游靶基因,利用双荧光素酶实验验证miR-19b-3p以及下游靶基因之间的结合关系。细胞分组:control组,替米沙坦+NC组,NC+CAD组及替米沙坦+CAD组。随后为了验证替米沙坦与羟苯磺酸钙与miR-19b-3p/SOCS1信号轴的调节关系,利用替米沙坦、羟苯磺酸钙单独处理或者联合对VSMC细胞进行处理。细胞分组:空白组、miR-19b-3p inhibitoror组、miR-19b-3p inhibitor+替米沙坦+NC组、miR-19b-3p inhibitor+NC+CAD组、miR-19b-3p inhibitoror+替米沙坦+CAD组。利用qRT-PCR检测miR-19b-3p和SOCS1的表达水平。从自发性高血压大鼠主动脉中分离血管平滑肌细胞(VSMC),利用CCK-8、Transwell小室实验、qRT-PCR以及Western blot方法验证替米沙坦和羟苯磺酸钙对细胞增殖、迁移表型分型以及炎症因子表达的影响。结果与对照组相比,SHR+NC组大鼠的主动脉管壁厚度明显增厚,管腔内壁降低;经SHR+替米沙坦和SHR+CAD组的SHR大鼠胸主动脉管壁厚度降低,管腔半径增加。ELISA结果显示,与对照组相比,SHR+NC组大鼠血液中IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平显著增加(P<0.05),SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组的大鼠体内炎症因子的表达水平较SHR+NC组显著降低(P<0.05)。与对照组主动脉中miR-19b-3p的表达水平相比,SHR+NC组显著升高,SHR+替米沙坦和SHR+TAD组显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组SOCS1的表达水平相比,SHR+NC组显著降低,SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组较SHR+NC组显著上调(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与control组相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组VSMC细胞中α-SMA、SM22α的表达水平显著增高,OPN的表达水平显著下降(P<0.05)。transwell小室实验结果显示,与control组VSMC细胞的迁移相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组显著降低(P<0.05)。与空白组相比,miR-19b-3p inhibitor组IL-1β、TNF-α的表达水平显著降低,进一步添加替米沙坦与羟苯磺酸钙处理后能增强这一结果(P<0.05)。结论替米沙坦与羟苯磺酸钙联用可以通过调节miR-19b-3p/SOCS1信号轴改善自发性高血压大鼠主动脉损伤,抑制炎症因子的表达。

LncRNA H19靶向调控miR-19b-3p/SOX9通路对脂肪间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:分析长链非编码核糖核酸(LncRNA)H19靶向调控miR-19b-3p/性别决定区Y框转录因子9(SOX9)通路对脂肪间充质干细胞(ADMSC)向成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人ADMSC细胞并鉴定,将ADMSC细胞分为对照组(常规培养)、H19组(转染LncRNA H19慢病毒过表达载体)、LncRNA-NC组(转染慢病毒空载体)、miR-19b-3p组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-19b-3p模拟物慢病毒载体)、miR-NC组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-NC慢病毒载体),检测各组LncRNA H19、miR-19b-3p、SOX9及含锌指的成骨细胞特异性转录因子(Osx)、骨钙素(OCN)和RUN相关转录因子2(RUNX2)表达。观察各组ALP染色和茜素红染色情况,比较细胞增殖活力、ALP活性,分析各组SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达,验证LncRNA H19和miR-19b-3p的靶向关系。结果:与对照组、LncRNA-NC组比,H19组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量增加,miR-19b-3p表达降低(P<0.05),与H19组、miR-NC组比,miR-19b-3p组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量降低,miR-19b-3p表达增加(P<0.05)。各组细胞24h、48h、72h的吸光度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA H19和miR-19b-3p间存在靶向关系。结论:LncRNA H19能负向调控miR-19b-3p,上调SOX9,有助于人ADMSC细胞向成骨细胞分化。

帕金森病患者轻度认知功能障碍与miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1水平的相关性

帕金森病是一种临床常见的神经退行性疾病,以运动迟缓、静止性震颤、姿势平衡障碍等为主要临床表现,随病情进展可能出现认知功能障碍,严重影响患者生存质量[1]。现阶段,临床缺乏对帕金森病患者认知功能障碍的早期识别,易延误治疗。因此,积极寻找与帕金森病并发认知功能障碍相关的指标,预测患者认知功能障碍发生状况,并尽早采取对应干预措施,对改善患者预后有积极意义。微小RNA(miRNA)是一类具有调控基因表达作用的细胞因子,miR-19b-3p作为微小RNA家族成员,已被报道与神经元凋亡、炎症等有关[2]。

阿尔兹海默症患者外周血miR-19b-3p和PTEN的表达及临床意义

目的探究阿尔兹海默症(Alzheimer′s disease,AD)患者外周血微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)和磷酸酶及张力蛋白同源物(Phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)的表达及临床意义。方法选取2020年2月-2023年2月新疆医科大学第一附属医院健康管理中心和新疆维吾尔自治区第四人民医院重症医学科收治的97例AD患者纳入AD组,选取同期63例体检健康老年人纳入对照组,检测并比较对照组与AD组血清miR-19b-3p和PTEN mRNA表达水平。根据AD患者不同病情程度分为轻度组和中重度组,采用Logistic回归分析AD病情严重程度的影响因素。采用Spearman相关性分析血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平与AD病情严重程度的相关性。采用ROC曲线分析血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平对AD病情严重程度的预测价值。结果与对照组比较,AD组血清miR-19b-3p、PTEN mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。97例AD患者中59例轻症,25例中症及13例重症。与轻度组比较,中、重度组组血清miR-19b-3p、PTEN mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA低水平是影响AD病情严重程度的独立危险因素(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平与AD严重程度均呈负相关(r=-0.610,P<0.05;r=-0.870,P<0.05)。ROC分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平及二者联合评估AD病情严重程度的AUC值(95%CI)分别为0.757(0.660~0.839)、0.718(0.617~0.804)、0.861(0.776~0.923),二者联合预测效能高于各项单独检测(Z=2.088、2.618,P<0.05)。结论AD患者血清miR-19b-3p、PTEN水平异常降低,与AD病情严重程度呈负相关,miR-19b-3p联合PTEN mRNA检查对于评估AD病情严重程度具有较高价值。

LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型,si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理;采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量;根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率,SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3AP-AS1可靶向调控miR-19b-3p;共转染si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p可提高OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6的水平,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),并可明显降低SOD水平(P<0.05)。结论 干扰MCM3AP-AS1表达可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤。

lncRNA LAMTOR5-AS1通过调控miR-19b-3p对缺氧诱导的心肌细胞活性的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)LAMTOR5-AS1通过调节miR-19b-3p表达对缺氧诱导的人类心肌细胞(HCM)活性的影响。方法:将HCM分为对照组和LAMTOR5-AS1组,对照组感染无义慢病毒,LAMTOR5-AS1组感染LAMTOR5-AS1序列慢病毒。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组细胞中LAMTOR5-AS1表达。将两组细胞分别建立缺氧心肌细胞模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LAMTOR5-AS1对HCM心肌细胞活力的影响;流式细胞术检测LAMTOR5-AS1对HCM心肌细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清炎性因子含量;生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验验证LAMTOR5-AS1与miR-19b-3p的靶向关系;qRT-PCR检测miR-19b-3p的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)法检测增殖和凋亡相关蛋白表达。结果:与对照组比较,LAMTOR5-AS1组细胞中LAMTOR5-AS1表达明显升高(P<0.01)。缺氧处理后,与对照组比较,LAMTOR5-AS1组HCM细胞活力明显升高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01),细胞上清促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量明显降低(P<0.01)。miR-19b-3p明显抑制野生型LAMTOR5-AS1的HCM细胞荧光素酶活性(P<0.01)。与对照组比较,LAMTOR5-AS1组细胞中miR-19b-3p表达下降(P<0.01),细胞增殖蛋白CDK3、CDK4表达升高,细胞凋亡蛋白中细胞凋亡诱导因子(AIF)、Caspase-2、Caspase-6表达降低。结论:在缺氧HCM中通过外源性升高LAMTOR5-AS1表达可提高心肌细胞的活性,其分子机制可能与靶向抑制miR-19b-3p表达有关。

运用Logistic回归联合ROC曲线评估miR-19b-3p对抑郁症疗效的预测价值

目的运用Logistic回归联合ROC曲线评估微小核糖核酸-19b-3p(microRNA-19b-3p,miR-19b-3p)对抑郁症疗效的预测价值。方法选取本院收治的抑郁症患者112例为研究对象(病例组),另选取同期来本院进行体检的健康志愿者60例(作为对照组)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测所有受试者外周血清miR-19b-3p表达水平,并比较治疗前2组血清miR-19b-3p表达水平及病例组治疗前后血清miR-19b-3p表达水平变化。根据治疗效果将病例组分为预后良好组和预后不良组,比较预后良好组与预后不良组血清miR-19b-3p表达水平及其他因素。采用Logistic回归分析法明确影响抑郁症患者预后不良的危险因素,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristical,ROC)曲线分析治疗前后血清miR-19b-3p表达水平对抑郁症患者预后不良的预测价值。结果治疗前,病例组血清miR-19b-3p水平高于对照组(P<0.05),治疗后,病例组血清miR-19b-3p水平为低于治疗前(P<0.05)。预后良好组抑郁症家族史(阳性)、治疗依从性差、家庭社会支持情况差、与邻里关系差、重大生活事件占比,发作次数、治疗前后血清miR-19b-3p水平高于预后良好组(P<0.05)。Logistic回归分析显示治疗依从性差、家庭社会支持情况差、伴有精神病症状、miR-19b-3p(治疗前后)、重大生活事件均是影响抑郁症患者预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,治疗前血清miR-19b-3p水平预测抑郁症患者预后不良的曲线下面积(area under curve,AUC)、敏感度、特异度、最佳截断点分别为0.739、78.56%、64.28%、11.25。治疗后血清miR-19b-3p水平预测抑郁症患者预后不良的AUC、敏感度、特异度、最佳截断点分别为0.756、80.75%、60.15%、7.14。结论血清miR-19b-3p在抑郁症患者体内呈异常高表达,与抑郁症患者预后不良具有一定的关系,可用于抑郁症患者预后的预测。

芒柄花素调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路影响卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓度(35、70、140μmol·L^(-1))的芒柄花素对卵巢癌细胞SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。实时定量PCR分析miR-19b-3p表达。采用上述方法检测过表达或抑制miR-19b-3p对SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。免疫印迹法检测TGF-β和Smad2蛋白表达量。结果35、70、140μmol·L^(-1)的芒柄花素处理显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调miR-19b-3p表达。过表达miR-19b-3p显著增加SKOV3细胞活力、迁移和侵袭数量,降低细胞凋亡率,上调TGF-β和Smad2蛋白表达量。抑制miR-19b-3p表达显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调TGF-β和Smad2蛋白表达量。140μmol·L^(-1)的芒柄花素显著抑制TGF-β和Smad2蛋白表达量。过表达miR-19b-3p可显著减弱芒柄花素处理对SKOV3细胞增殖、迁移侵袭、凋亡以及TGF-β和Smad2蛋白表达的影响。结论芒柄花素可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路有关。

lncRNA H19靶向miR-29b-3p对卵巢癌细胞运动和模型裸鼠生存能力的影响

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) H19对卵巢癌细胞运动及模型小鼠生存能力的影响。方法 RT-PCR检测H19和miR-29b-3p mRNA在不同癌组织、癌旁组织、正常卵巢上皮细胞及多种卵巢癌细胞中的表达差异。生物学信息预测两者的靶向关系并验证。检测体外培养细胞增殖、迁移、侵袭能力,移植瘤体内生长、裸鼠存活情况,及细胞凋亡和增殖相关蛋白表达。结果 H19和miR-29b-3p mRNA在不同癌组织、癌旁组织、正常卵巢上皮细胞及多种卵巢癌细胞中均存在差异表达。si-H19能显著逆转miR-29b-3p inhibitor对细胞增殖、Ki-67表达、划痕闭合率、侵袭细胞数及VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响。体内实验发现,si-H19能显著逆转miR-29b-3p inhibitor对移植瘤生长、荷瘤裸鼠存活率、细胞凋亡率、Ki-67和VEGF表达的影响。结论 H19通过靶向miR-29b-3p提高卵巢癌细胞运动能力,降低荷瘤裸鼠的生存能力。

颅内动脉瘤患者血清hsa-miR-513b-5p水平及作用机制研究

目的探讨血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中的表达水平及其可能的作用机制。方法收集颅内动脉瘤患者(颅内动脉瘤组)和无颅内动脉瘤的志愿者(对照组)各100例,采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术测定血清hsa-miR-513b-5p、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MMP2、MMP3、MMP9(基质金属蛋白酶,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP4)水平。采用hsa-miR-513b-5p模拟物和抑制剂转染人血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMC),检测细胞增殖、凋亡和坏死变化。通过双荧光素酶报告基因分析hsa-miR-513b-5p的作用靶点COL1A1,并分析影响颅内动脉瘤形成的信号通路。结果颅内动脉瘤组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TNF-α、MMP2、MMP3、MMP9水平高于对照组(P<0.05),而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、血浆总同型半胱氨酸(Hcy)和TIMP4水平降低(P<0.05)。与对照组相比,颅内动脉瘤组患者血清hsa-miR-513b-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p模拟物转染的HASMC,与模拟物对照组比较,其细胞增殖能力降低,而凋亡和坏死水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p抑制剂转染的HASMC,与抑制剂对照组比较,其细胞增殖能力增强,而凋亡和坏死水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示has-miR-513b-5p可靶向抑制COL1A1表达,并上调RIP1-RIP3-MLKL和MMPs信号通路,抑制HASMC增殖和细胞外基质合成。结论血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中表达水平下降,并参与调节血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质合成影响动脉瘤形成。

黄连素联合miR-19b-3p调控阿尔茨海默病的实验研究

目的探讨黄连素联合miR-19b-3p对阿尔茨海默模型细胞发生发展的影响。方法实验设置对照(NC)组、Aβ组、0.1μmol/L黄连素+Aβ组、1.0μmol/L黄连素+Aβ(黄连素+Aβ)组、10.0μmol/L黄连素+Aβ组、miR-NC+Aβ组、miR-19b-3p+Aβ组、黄连素+miR-NC+Aβ组、黄连素+miR-19b-3p+Aβ组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;蛋白质印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-19b-3p表达水平。结果Aβ诱导的PC12细胞中CyclinD1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞OD值显著降低,细胞凋亡率显著升高,miR-19b-3p表达水平显著降低(P<0.05)。黄连素或过表达miR-19b-3p可促进Aβ作用的PC12细胞增殖,抑制细胞凋亡。黄连素联合miR-19b-3p可更显著的抑制Aβ作用的PC12细胞凋亡。结论黄连素联合miR-19b-3p减轻了Aβ诱导的PC12细胞损伤,对阿尔茨海默病模型细胞损伤具有保护作用。

MALAT1调控miR-19b-3p/HIF-1α分子轴参与非小细胞肺癌的发生发展

目的探讨MALAT1调控miR-19b-3p/HIF-1α影响非小细胞肺癌(NSCLC)的发病机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MALAT1、miR-19b-3p在NSCLC肺癌组织和NSCLC细胞系中的表达水平。过表达miR-19b-3p和敲除MALAT1后,采用qRT-PCR和Western blot检测A549细胞中MALAT1、miR-19b-3p、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化。采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡情况。采用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果在NSCLC癌组织及NSCLC细胞系中MALAT1表达升高、miR-19b-3p表达降低,并且MALAT1与miR-19b-3p表达水平呈负相关(r=-0.8969,P<0.01);过表达miR-19b-3p及敲除MALAT1可使A549细胞中miR-19b-3p基因表达升高,MALAT1、HIF-1α及VEGF基因表达下降。过表达miR-19b-3p使A549细胞增殖能力、分裂能力、侵袭迁移能力下降,凋亡率增加。结论MALAT1可能靶向miR-19b-3p调节HIF-1α/VEGF参与非小细胞肺癌发生发展。

miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1与脑梗死后血管性痴呆预测效能

目的探讨微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、一氧化氮与内皮素-1比值(NO/ET-1)对脑梗死后血管性痴呆(VaD)的预测效能。方法选取2017年5月至2020年6月本院收治的80例脑梗死患者,根据6个月内是否发生VaD分为VaD组(n=21)、无VaD组(n=57)。比较两组基线资料、治疗前和出院时miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1、简易智力状态检查量表(MMSE)评分,采用Pearson及偏相关性分析miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1与MMSE评分相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1预测VaD的价值。结果 80例脑梗死患者,随访6个月,失访2例,VaD发生率为26.92%(21/78);VaD组吸烟史、入院时NIHSS评分、糖尿病分布情况与无VaD组比较,差异有统计学意义(P<0.05);出院时VaD组miR-19b-3p高于无VaD组,MnSOD、NO/ET-1、MMSE评分低于无VaD组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-19b-3p与MMSE呈负相关,MnSOD、NO/ET-1与MMSE评分呈正相关(P<0.05);将吸烟史、入院时NIHSS评分、糖尿病因素控制后,miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1仍与MMSE评分相关(P<0.05);miR-19b-3p+MnSOD+NO/ET-1预测VaD的AUC为0.957,大于单一指标预测(P<0.05)。结论 miR-19b-3p、MnSOD、NO/ET-1可作为临床评估脑梗死后VaD发生风险的非侵入性指标,有助于临床早期识别、干预,以改善患者预后。

miR-19b-3p靶向LRIG1调控喉癌细胞凋亡和放射敏感性分子机制研究

目的:探讨miR-19b-3p是否通过靶向调控富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域(LRIG1)表达从而对喉癌细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法:喉癌Hep2细胞分为anti-miR-19b-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-LRIG1组、pcDNA组、anti-miR-19b-3p+si-LRIG1组、anti-miR-19b-3p+si-NC组、miR-19b-3p组、miR-NC组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测miR-19b-3p、LRIG1表达水平;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组细胞的放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验验证LRIG1是否为miR-19b-3p的靶基因;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3的表达。结果:miR-19b-3p在喉癌组织及细胞系中表达水平显著升高,而LRIG1表达水平显著降低;转染anti-miR-19b-3p或pcDNA-LRIG1后可显著增强喉癌细胞凋亡能力并降低细胞存活分数从而增强细胞的放射敏感性,促进Bax、cleaved-caspase3表达,抑制Bcl-2表达;双荧光素酶报告实验证实LRIG1是miR-19b-3p的靶基因;抑制LRIG1表达逆转了抑制miR-19b-3p表达对喉癌Hep2细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:沉默miR-19b-3p表达可上调LRIG1表达从而诱导喉癌细胞凋亡并增强其放射敏感性。

急性腔隙性脑梗死患者血清miR-19b-3p水平与认知功能相关性研究

目的分析急性腔隙性脑梗死患者血清miR-19b-3p水平与认知功能的相关性。方法选择2015年2月—2017年2月收治的急性腔隙性脑梗死96例作为观察组,选取同期健康体检者60例作为对照组。检测2组血生化指标及血清miR-19b-3p水平,应用简明精神状态(MMSE)量表评估认知功能,分析血清miR-19b-3p与认知功能的相关性。结果观察组血清肌酐(Scr)水平高于对照组,肾小球滤过率(e GFR)水平低于对照组(P <0. 01)。观察组MMSE量表各维度评分均低于对照组,血清miR-19b-3p水平高于对照组(P <0. 05)。合并认知功能障碍组血清miR-19b-3p水平高于未合并认知功能障碍组(P <0. 05)。急性腔隙性脑梗死患者血清miR-19b-3p水平与血清Scr、e GFR水平无明显相关性(r=0. 260、-0. 184,P> 0. 05),与MMSE量表评分呈明显负相关(r=-0. 726,P <0. 05)。结论血清miR-19b-3p水平可作为评价急性腔隙性脑梗死患者认知功能的非侵入性指标,临床应给予早期识别、合理干预,对改善患者预后生活质量有重要意义。

血清miR-19b-3p对阿尔茨海默病大鼠认知水平的影响

目的探讨血清miR-19b-3p对阿尔茨海默病大鼠认知水平的影响。方法选取阿尔茨海默病大鼠32例作为观察组,非阿尔茨海默病大鼠32例作为对照组,分析两组血清miRNA的表达谱,筛选出差异表达基因。利用随机数表法将60只大鼠分为4组,分别为正常组、阿尔茨海默病组、阿尔茨海默病联合miR-19b-3p组和阿尔茨海默病联合Vector组,在大鼠及细胞中高表达miRNA。利用细胞转染的方法将合成的miR-19b-3p模拟剂和抑制剂转染到SH-SY5Y的细胞系中,将其分别作为模拟组和抑制组,而没有采用细胞转染的SH-SY5Y的细胞系为无转染组,探究SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白的水平。结果(1)观察组相比于对照组而言,血清中miR-146a-5p、miR-195-5p、miR-20b-5p水平上调(P<0.05),miR-125b-3p、miR-19b-3p水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)阿尔茨海默病组(26.48±3.14)s或阿尔茨海默病联合Vector组(27.78±3.19)s与正常组(9.61±1.02)s相比,逃避潜伏期明显增加(P<0.05)。阿尔茨海默病联合miR-19b-3p组(15.29±2.67)s与阿尔茨海默病组(26.48±3.14)s相比,逃避潜伏期明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)模拟组(9.23±3.24)相比于无转染组(19.02±4.12)SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白浓度明显减少(P<0.05)。抑制组(24.23±5.47)相比于无转染组(19.02±4.12)SH-SY5Y细胞中BACE1蛋白浓度明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-19b-3p通过调节BACE1的表达来参与阿尔茨海默病的形成,通过干预BACE1的表达来改善阿尔茨海默病大鼠的认知功能。

miR-19b-3p靶向MTUS1调控甲状腺髓样癌细胞凋亡的分子机制

背景与目的:miR-19b-3p在胃癌、前列腺癌等恶性肿瘤中均呈高表达,其可能作为肿瘤早期诊断及评估患者预后的潜在生物标志物。利用TargetScan靶基因预测软件筛选出的微管相关肿瘤抑制基因1(microtubule-associated tumor suppressor gene 1,MTUS1)可能为miR-19b-3p的靶基因,发现MTUS1的3’非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)可能是miR-19b-3p的结合位点。探讨miR-19b-3p是否通过靶向MTUS1表达影响甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)细胞凋亡。方法:MTC-TT细胞分为anti-miR-19b-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-MTUS1组、pcDNA组、anti-miR-19b-3p+si-MTUS1组、anti-miR-19b-3p+si-NC组、miR-19b-3p组和miR-NC组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测miR-19b-3p和MTUS1的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证MTUS1是否为miR-19b-3p的靶基因;采用Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达水平。结果:miR-19b-3p在MTC组织及细胞系中的表达水平显著升高,而MTUS1的表达水平显著降低。转染anti-miR-19b-3p或pcDNA-MTUS1后可显著增强MTC细胞凋亡能力,促进Bax、cleaved caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。双荧光素酶报告实验证实MTUS1是miR-19b-3p的靶基因。抑制MTUS1表达逆转了抑制miR-19b-3p表达对MTC-TT细胞凋亡的作用。结论:沉默miR-19b-3p表达可上调MTUS1表达从而诱导MTC细胞凋亡。