hsa-miR-342-3p 生物信息学分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-342-3p靶基因及其功能机制。检索Pub Med有关hsa-miR-342-3p的研究报道并进行功能分析;检索miRBase获取hsa-miR-342-3p序列;通过Target Scan,Pictar和PITA数据库预测靶基因并取交集,对其进行组织和疾病特异性表达谱分析、功能富集分析(GO enrichment analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway enrichment analysis)和蛋白质相互作用网络分析(PPI analysis)。结果发现:hsa-miR-342-3p序列在多物种间具有高度保守性;hsa-miR-342-3p在肾脏组织和急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌疾病中表达水平较高(RPM≥1 000);预测得到14个hsa-miR-342-3p靶基因;靶基因分子功能分别富集于转化生长因子活性、DNA结合和蛋白激酶激活等(P<0.05);hsa-miR-342-3p靶基因GO生物学过程主要集中于大分子代谢抑制,肺部组织发育、呼吸系统发育及管状组织发育建成(P<0.05);细胞信号通路主要富集于TGF-Beta信号通路、细胞因子、受体作用信号通路及前列腺疾病信号通路(P<0.01)。hsa-miR-342-3p在体内分布广泛,预测的靶向TGF-Beta信号通路可能在疾病发生中发挥重要调控作用,是具有潜在研究价值的生物学靶标。

LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

hsa-miR-22-3p靶基因预测及功能分析

本研究旨在通过生物信息学分析,预测和验证hsa-miR-22-3p的靶基因,并探讨其在不同物种、组织和信号通路中的功能。方法 本研究利用了多种在线数据库和软件,如miRBase、ClustalOmega、Cytoscape3.6.1等,进行了对不同物种间的miR-22-3p保守性分析。预测hsa-miR-22-3p的靶基因,绘制Venn图,得到交集靶基因集合。对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG Pathway富集分析,探索其在生物过程和信号通路中的作用。预测交集靶基因编码蛋白质之间的相互作用关系,构建蛋白蛋白互作网络图谱,筛选出核心基因。结果 miR-22-3p是一种在多种生物中高度保守的miRNA,与心肌细胞分化和心血管疾病密切相关。hsa-miR-22-3p的36个交集靶基因在肿瘤、淋巴和腹腔等组织中表达较高,参与了组蛋白修饰、染色质重构、低氧应答等276个生物学过程,在乳腺癌、雌激素、FoxO、破骨细胞分化、肿瘤、PI3KAkt等8个信号通路中显著富集。hsa-miR-22-3p的10个核心基因ESR1、SIRT1、PTEN、CREB1、SP1、HDAC4、MECP2、YWHAZ、MAPK14、SNAI1在多种疾病中发挥重要作用,如肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病、炎症、衰老、心肌肥厚、心肌缺血再灌注、心房纤维化、动脉粥样硬化等。结论 本研究为hsa-miR-22-3p在肿瘤、心血管等多种疾病中的关键调控机制提供了新的理解,也为肿瘤、心血管等疾病的早期诊疗提供了新的思路。

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的:探讨LINC01503在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法:收集2015年5月至2016年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC细胞A2780、SKOV3、OVCAR3和OV90及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780细胞,分别作为si-LINC01503组、si-NC组、miR-342-3p mimic组和miR mimic NC组。q PCR法检测EOC组织和细胞中LINC01503的表达水平,Kaplan-Meier法分析LINC01503表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell实验分别检测敲低LINC01503及转染miR-342-3p mimic对A2780和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503对移植瘤生长的影响。结果:EOC组织和细胞中LINC01503表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80细胞(均P<0.01),LINC01503高表达组患者术后PFS和OS均显著短于LINC01503低表达组患者(均P<0.01)。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic均可抑制EOC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。敲低LINC01503可下调IGF2R的表达(P<0.01),这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor挽救。敲低LINC01503可抑制A2780细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.01)。结论:在EOC组织和细胞中呈高表达的LINC01503与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。

紫花牡荆素通过上调miR-342-3p抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解

目的:探讨紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞miR-342-3p表达和糖酵解的影响,验证紫花牡荆素是否通过上调miR-342-3p表达抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解。方法:使用不同浓度(0,10,30,100 nmol/L)的紫花牡荆素处理HeLa细胞,采用紫花牡荆素(30 nmol/L)联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染HeLa细胞,随后用实时荧光定量PCR分析HeLa细胞miR-342-3p的表达水平,通过测定相对葡萄糖消耗量和相对乳酸产物,分析紫花牡荆素及紫花牡荆素联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染对宫颈癌HeLa细胞糖酵解的影响。结果:紫花牡荆素以浓度依赖方式上调HeLa细胞miR-342-3p表达水平,同时降低HeLa细胞的葡萄糖消耗量和抑制乳酸产生。此外,miR-342-3p模拟物协同紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生;相反miR-342-3p抑制物减弱紫花牡荆素上调miR-342-3p表达水平的作用和减弱紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生作用。结论:紫花牡荆素通过上调miR-342-3p表达水平抑制HeLa细胞糖酵解。

miR-2116-3p和miR-342-3p对肝细胞癌诊断及预后价值的研究

目的:探讨miR-342-3p和miR-2116-3p在肝细胞癌中的临床价值。方法:该研究纳入进行根治性手术切除的HCC患者的肿瘤组织和瘤旁肝组织样本共57例,采用qRT-PCR法进行了miR-2116-3p、miR-342-3p的表达量测定并分析。结果:miR-2116-3p和miR-342-3p在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P=0.034,P<0.001)。ROC曲线分析二者具有诊断效能(P<0.05)。miR-2116-3p表达量可以作为预测HCC患者不良预后的独立危险因素。结论:在本研究57例样本中,miR-2116-3p以及miR-342-3p在肝炎相关的HCC组织中显著降低,具有HCC诊断价值,为潜在新的标志物;miR-2116-3p为HCC不良预后独立预测因素。

乳腺癌手术前后血清VCAM-1、miR-342-3p水平变化及其临床价值

目的 探究血清VCAM-1、miR-342-3p在乳腺癌手术前后的表达水平及其临床意义。方法 选取乳腺癌患者100例,收集患者临床资料。ELISA法检测患者手术前后血清VCAM-1水平以及RT-PCR检测miR-342-3p水平。结果 不同肿瘤大小、TNM分期、病理类型和淋巴结转移情况的乳腺癌患者术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);不同年龄患者的术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌患者术后1周、1个月和6个月血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平与术前相比均明显降低(P<0.05)。术前VCAM-1高表达组16个月累积生存率为70.4%,低于低表达组的90.2%(P<0.05);术前miR-342-3p高表达组16个月累积生存率为73.5%,低于低表达组的88.3%(P<0.05)。结论 乳腺癌患者血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平在乳腺癌手术后明显下降。术前患者血清VCAM-1、miR-342-3p水平与病理特征及预后显著相关,可作为判断手术治疗效果的重要指标。

hsa-miR-877-3p通过靶向MCM10调控卵巢癌细胞迁移和活性氧产生

目的探讨has-miR-877-3p调控卵巢癌细胞迁移和活性氧(ROS)产生的作用机制。方法运用生物信息学分析hsa-miR-877-3p在卵巢癌组织中表达,RT-qPCR检测卵巢癌细胞株中hsa-miR-877-3p表达。构建hsa-miR-877-3p过表达及抑制SKOV3细胞,RNA干扰技术敲低SKOV3细胞中MCM10基因,划痕实验及流式细胞术分别检测细胞迁移、ROS水平。结果hsa-miR-877-3p在卵巢癌中表达低于正常组织(P<0.01),其在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、A1847和8910中表达也降低(P<0.01)。hsa-miR-877-3p过表达抑制SKOV3细胞迁移、增加ROS水平(P<0.01),而抑制hsa-miR-877-3p表达增加SKOV3细胞迁移(P<0.01)。MCM10基因沉默抑制SKOV3细胞迁移、促进ROS表达(P<0.01)。结论hsa-miR-877-3p可以通过调控MCM10基因抑制SKOV3细胞迁移并提高其活性氧水平。

外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌进程

目的:探讨外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生发展中的作用及其潜在机制。方法:采用荧光实时定量PCR检测hsa-miR-522-3p在组织和细胞中的表达水平。使用EdU、Transwell和流式细胞术检测外泌体hsa-miR-522-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估hsa-miR-522-3p对CDK6表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型验证外泌体hsa-miR-522-3p对肿瘤生长的影响。结果:本研究发现hsa-miR-522-3p在卵巢癌组织、血浆外泌体及卵巢癌细胞的外泌体中表达显著升高。与NC组比较,hsa-miR-522-3p模拟物组细胞的迁移和侵袭能力显著增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,hsa-miR-522-3p抑制剂组可以促进caspase3和Bax的表达并抑制Bcl2的表达。荧光素酶报告结果显示,hsa-miR-522-3p能够靶向结合CDK6的3′-非翻译区(3′-UTR)来抑制其表达。裸鼠成瘤结果表明,外泌体hsa-miR-522-3p可增加瘤的体积及重量。结论:外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌的进程。本研究的发现将为外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生中的机制提供新的见解。

穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯(Andro)是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组:Control组(对照组)为未作处理的巨噬细胞;Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞;Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后,给予Andro处理;Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后,分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后,利用细胞流式术分析细胞凋亡,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测LDH活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素(IL)-6和IL-18含量,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定miR-342-3p表达,Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较,Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Mtb组比较,Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。另外,与Mtb+Andro+miR-NC组比较,Mtb+Andro+miR-342-3p组上述指标均升高(P<0.05)。【结论】Andro通过下调miR-342-3p表达,减少Mtb感染的巨噬细胞炎症和细胞焦亡,其分子机制与Nrf2/HO-1通路有关。

肝癌病人血清中长链非编码RNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平及其临床诊断价值分析

目的检测肝癌病人血清中长链非编码RNA BSN-AS2(lncRNA BSN-AS2)、hsa-miR-4782-3p表达水平,并分析两者在肝癌中的临床诊断价值。方法选取2018年3月~2020年3月在我院诊治的肝癌病人100例为研究组,另取同期体检健康者90例为对照组。采用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测病人血清中lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p的表达水平;采用Spearman等级相关分析血清中lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p表达的相关性,同时分析二者与临床病理特征的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平对肝癌的诊断效能。结果研究组血清lncRNA BSN-AS2的表达水平为(2.02±0.59),显著高于对照组的(1.05±0.25),研究组血清hsa-miR-4782-3p的表达水平为(0.69±0.15),低于对照组的(1.08±0.29),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平与TNM分期、分化程度、甲胎蛋白(AFP)有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p表达呈负相关(r=-0.536,P<0.05)。血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3单独及联合诊断肝癌的AUC分别是0.890、0.856和0.937,灵敏度分别为87.00%、93.00%和86.00%,特异度分别为78.89%、70.00%和92.22%;二者联合优于lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p各自单独预测(Z^(二者联合-lncRNA BSN-AS)=2.481、P=0.013,Z_(二者联合-hsa-miR-4782-3P)=3.503,P=0.001)。结论肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2表达水平显著升高,hsa-miR-4782-3p水平显著降低,可作为诊断肝癌的潜在分子标志物。

miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:收集江苏省肿瘤医院乳腺外科2011年1月至2013年8月行术前化疗的三阴性乳腺癌病人32例,其中完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)27例,检测肿瘤组织中miR-342-3p的表达情况;应用脂质体转染方法,三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染has-miR-342-3p模拟物(mimic)和miR-342-3p抑制物(inhibitor),设立阴性对照(mim-NC)组和(inhi-NC)组。mimic组,mim-NC组,inhibitor组和inhi-NC组细胞株,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇,顺铂及4μmol/L的阿霉素进行培养;应用CCK8法和流式细胞仪检测48 h后肿瘤细胞增殖率和凋亡的变化。结果:miRNA-342-3p在术前化疗后达到CR的三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于PR的三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。Mimic组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后肿瘤细胞增殖率低于mim-NC组,凋亡率高于mim-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Inhibitor组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后,肿瘤细胞增殖率高于inhiNC组,凋亡率低于inhi-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。但与阿霉素作用后细胞增殖率和凋亡率在mimic组与mimNC组,inhibitor组与inhi-NC组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-342-3p高表达的三阴性乳腺癌对化疗药物反应更敏感,miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但miR-342-3p不影响MDAMB-231细胞株对阿霉素的化疗敏感性。

miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:研究miR-342-3p在乳腺癌中的表达及与临床病理联系。方法:收集2008年1月～2012年8月乳腺癌手术患者组织标本共85例,使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况,应用免疫组化的方法检测乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Her-2及P53的表达。结果:miRNA-342-3p在Lumina型乳腺癌组织中高表达,在Her-2高表达型乳腺癌次之,在三阴性乳腺癌组织中表达最低,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-342-3p的表达与不同ER、Her-2及P53的表达相关,差异有统计学意义(P<0.05),在不同PR状态、不同年龄组、有无淋巴结转移及与肿瘤大小、组织分级和病理分期间,差异无统计学意义(P>0.05),癌与癌旁组织间无显著性差异(P>0.05)。结论:miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型中表达存在差异,可能成为乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌治疗的新靶点。

积雪草苷调控miR-342-5p/AQP3轴保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探讨积雪草苷(Ass)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度的Ass作用IL-1β诱导软骨细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-342-5p和水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western Blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和AQP3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与AQP3靶向关系。转染miR-342-5p抑制剂或AQP3过表达载体至软骨细胞,上述相同方法检测抑制miR-342-5p表达或AQP3过表达对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及IL-6和TNF-α表达的影响。结果Ass可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达及miR-342-5p表达(P<0.05),促进Bcl-2蛋白、AQP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。miR-342-5p在软骨细胞中负调控AQP3表达。抑制miR-342-5p或AQP3过表达后,IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。抑制AQP3表达逆转了抑制miR-342-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡、Bax和Bcl-2蛋白及IL-6和TNF-α表达的影响。结论Ass可抑制IL-1β诱导软骨细胞凋亡和炎症反应,其可能通过调控miR-342-5p/AQP3保护软骨细胞损伤。

miR-342-3p与女性相关疾病的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的,长度为19~25 nt的单链非编码RNA,通过完全和(或)部分互补的原则结合到靶基因3’UTRs或者直接剪切靶基因mRNA,以降解或抑制mRNA翻译的方式调控靶基因的表达。miR-342-3p位于人染色体14q32处,是最近研究较多的miRNA,其主要作为抑癌基因发挥抑制肿瘤生长、转移的作用。现有的研究表明,miR-342-3p在肺癌、前列腺癌、骨肉瘤等多种肿瘤中发挥作用,且在乳腺癌、子痫前期、卵巢早衰等多种女性相关疾病中发挥着重要功能。本文综述了miR-342-3p在女性相关疾病中的生物学功能及作用靶点,为miR-342-3p的临床应用提供理论依据。

Hsa-miR-98-5p/DKK3信号轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:乳腺癌威胁着全世界女性的健康。虽然已发现大量微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,但仍需要构建一个完整的miRNA-信使RNA(messenger RNA,mRNA)网络。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载乳腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间差异表达的miRNA。利用miRDB、miRTarBase和StarBase数据库分析差异miRNA靶向的基因。使用R语言中的ClusterProfiler包对靶基因进行富集分析。使用String数据库联合Cytoscape 3.6.2软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析及Hub基因的筛选;构建miRNA-Hub mRNA调控网络确定研究信号轴,然后通过细胞实验进行验证。结果:采用TCGA数据集识别出两个差异miRNAs。3个数据库取交集预测得到278个靶基因。共鉴定出10个Hub基因,从构建的miRNA-Hub基因网络图中发现,hsa-miR-98-5p/DKK3轴可能在乳腺癌的进展中起关键作用。细胞功能学实验证实hsa-miR-98-5p可抑制细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验进一步验证了hsa-miR-98-5p与DKK3的结合作用。结论:本研究首先通过生物信息学分析鉴定出一个与乳腺癌进展相关的hsa-miR-98-5p/DKK3轴,初步证实hsa-miR-98-5p可通过靶向DKK3抑制乳腺癌细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。

Hsa-miR-21-3p对食管癌细胞运动与侵袭能力的影响

目的:研究hsa-miR-21-3p对人食管癌细胞Eca9706侵袭和迁移能力的影响。方法:采用终浓度为30 nmol/L的寡核苷酸hsa-miR-21-3p mimics和阴性对照转染Eca9706细胞48 h后,用实时荧光定量PCR检测转染后hsa-miR-21-3p的表达水平,通过Transwell体外侵袭试验和划痕愈合试验分别观察hsa-miR-21-3p对Eca9706细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:与阴性对照组相比4较,hsa-miR-21-3p mimics转染组细胞中hsa-miR-21-3p表达明显升高(P<0.01),是阴性对照的1.1×10倍;Transwell体外侵袭试验结果显示镜下每个视野穿膜细胞数试验组(76.67±6.11)较阴性对照组(42.33±2.52)增加了81.1%(P<0.01),表明hsa-miR-21-3p的过表达显著增强食管癌细胞的侵袭能力;划痕愈合试验结果显示,hsa-miR-21-3p试验组的划痕宽度较对照组窄,在相同的时间点,试验组的划痕愈合能力均大于对照组(P<0.01),说明转染了hsa-miR-21-3p mimics的试验组细胞的迁移能力大于对照组。结论:Hsa-miR-21-3p的高表达可以使人食管癌细胞Eca9706的侵袭和迁移能力增强,提示其可能参与了食管癌进程中的浸润和转移。

荧光定量聚合酶链反应检测miR-342-3p及靶基因EVL在多发性骨髓瘤细胞中的表达

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者中miR-342-3p及靶基因EVL的表达情况及意义。方法建立应用颈环式结构引物反转录扩增微小RNA(miRNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,并采用荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)对miR-342-3p及靶基因EVL的表达进行定量分析。结果①5例MM患者中miR-342-3p相对表达量为7.6±5.7,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②MM细胞株U266中miR-342-3p相对表达量为7.0±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。③5例MM患者中EVL基因相对表达量为6.3±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④MM细胞株U266中EVL基因相对表达量为4.3±1.1,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM存在miR-342-3p及EVL基因表达异常,可能为研究MM发病机制提供思路。

hsa-miR-192-3p的靶基因预测及功能分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-192-3p的靶基因及其靶基因的可能功能。首先通过miRbase在线数据库对hsamiR-192-3p的碱基序列及序列在各物种间的保守性进行分析,再通过miRGator v3. 0在线数据库查看hsa-miR-192-3p在各个组织器官中的表达丰富度情况;其次,应用Target Scan和miRanda在线数据库预测hsa-miR-192-3p的靶基因;最后,将预测得到的两个数据库的靶基因交集用DAVID在线数据库进行功能富集分析和信号转导通路富集分析。结果表明:hsa-miR-192-3p在人、家鼠、猕猴等生物中存在高度保守性; hsa-miR-192-3p在胃肠道、肾脏、肝胆系统、干细胞、鼻、脾、胸腺中表达丰富度较高;通过两个靶基因预测软件预测的靶基因取交集后共有190个;功能富集分析发现hsa-miR-192-3p靶基因富集在细胞质、细胞核、质膜、高尔基体等15个细胞组件(p<0. 05),参与蛋白结合、GTP酶活性、锌离子跨膜转运蛋白活性等7个分子功能(p<0. 05),涉及金属离子运输、RNA聚合酶II启动子的转录阳性调控、基因表达调节、钙离子跨膜运输、胚胎发育等18个生物过程(p<0. 05);预测靶基因集合显著富集于癌症通路与催乳素信号通路中(p<0. 05)。得出结论:hsa-miR-192-3p预测的靶基因集合富集于多个生物过程,与肿瘤密切相关,生物信息预测为今后的研究奠定了一定的理论基础,为后续实验验证提供了研究方向。

miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:检测乳腺癌细胞株MCF-7、SKBr3和MDA-MB-231中miR-342-3p的表达。应用脂质体转染方法,转染hsa-miR-342-3p模拟物到低表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(mimic转染组),同时设立阴性对照(mim-NC转染组);转染miR-342-3p抑制物到高表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(inhibitor转染组),同时设立阴性对照(inhi-NC转染组)。mimic转染组、mim-NC转染组、inhibitor转染组和inhi-NC转染组细胞,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇、顺铂及4μmol/L的阿霉素的进行培养,应用CCK8法检测药物作用48 h后细胞增殖率的变化。结果:以SKBr3为参照,miR-243-3p在MCF-7细胞中的相对表达倍数是126.000,在MDA-MB-231细胞中的相对表达倍数是0.017。mimic转染组细胞与紫杉醇、顺铂孵育48 h后,肿瘤细胞增殖率低于mim-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05),但与阿霉素孵育后细胞增殖率与mim-NC转染组差异无统计学意义(P>0.05);inhibitor转染组细胞与紫杉醇、顺铂和阿霉素孵育48 h后,肿瘤细胞的增殖率高于inhi-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但提高miR-342-3p表达不能增加MDA-MB-231细胞对阿霉素的化疗敏感性,降低miR-342-3p的表达却可以减弱MCF-7细胞对阿霉素的化疗敏感性。