MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因。通过HpaⅠ/XhoⅠ双酶切及其后的连接将其插入Lentilox3.7(pLL-3.7)质粒中。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Hsa-mir-196b的表达变化。结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒。所得慢病毒上清滴度为(7.2±1.1)×107TU/ml。感染慢病毒的239FT细胞中,Hsa-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍。结论成功构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体。

原发性肝癌患者血清miR-196b和miR-520f表达水平及其临床诊断价值分析

目的 探讨原发性肝癌(primary carcinoma of the liver)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-196b,微小核糖核酸(microRNA,miR)-520f表达水平及其临床诊断价值。方法 选择2020年6月~2022年6月攀枝花学院附属医院收治的73例原发性肝癌患者作为研究组,患者均符合《原发性肝癌诊疗规范》中的诊断标准;选择同期医院体检的80例健康人群作为对照组。抽取研究对象清晨空腹外周静脉血5ml,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组血清miR-196b和miR-520f表达水平。分析不同临床病理特征原发性肝癌患者血清miR-196b和miR-520f表达水平差异,采用Pearson相关性分析探讨血清miR-196b与miR-520f的关系,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-196b和miR-520f对原发性肝癌的诊断价值。结果 研究组血清miR-196b表达水平(2.73±0.56)明显高于对照组(0.99±0.24),miR-520f表达水平(1.69±0.44)明显低于对照组(3.34±0.64),差异具有统学意义(t=30.578,12.690,均P<0.05)。与Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、肿瘤直径<5cm患者相比,Ⅲ~Ⅳ期、低分化、淋巴结转移和肿瘤直径≥5cm患者血清miR-196b表达水平均升高,miR-520f表达水平均降低,差异具有统计学意义(tmiR-196b=6.919~13.229,tmiR-520f=3.873~7.814,均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平与miR-520f表达水平呈负相关(r=-0.445,P=0.006)。ROC曲线分析显示,血清miR-196b预测原发性肝癌的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间(95%confidence interval,95%CI)分别为0.842,2.55,91.78%,62.50%和95%CI(0.810~0.874);miR-520f预测原发性肝癌的的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间分别为0.872,2.43,91.78%,67.50%和95%CI(0.848~0.906);血清miR-196b联合miR-520f预测原发性肝癌的曲线下面积、敏感度、特异度及95%置信区间分别为0.923,86.30%,87.50%和95%CI(0.891~0.955)。结论 原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平上调,miR-520f表达水平下调,其表达水平变化与肿瘤直径、临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测血清miR-196b与miR-520f能有效提高原发性肝癌的诊断效能。

miR-196b靶向ERG促进肺腺癌的增殖和迁移

目的探究miR-196b影响肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)进展的机制。方法通过TCGA数据库分析miR-196b在LUAD组织中的表达水平,利用TargetScan预测其下游靶基因并用双荧光素酶实验进行验证,qRT-PCR检测miR-196b和ETS相关基因(ETS-related gene,ERG)在LUAD细胞系中的表达情况,MTT、划痕愈合和Transwell实验分别检测不同处理后LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况。结果miR-196b在LUAD中高表达(P=3.50e-17)并靶向负调控ERG,过表达miR-196b能够促进LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),回复实验证实miR-196b/ERG调控轴能够影响LUAD细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论miR-196b靶向ERG促进LUAD进展的分子机制,对开发LUAD新的临床治疗方法具有潜在意义。

非小细胞肺癌患者血清miR-92a、miR-143、miR-196b变化及其临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小核糖核酸-92a(miR-92a)、微小核糖核酸-143(miR-143)、微小核糖核酸-196b(miR-196b)变化及其临床意义。方法选取70例NSCLC患者作为NSCLC组,同期选取70例肺部良性病变患者为对照组。采用实时定量RT-PCR检测血清miR-92a、miR-143、miR-196b表达量;采用单因素生存分析Kaplan-Meier绘制3年生存曲线,采用Pearson相关性分析NSCLC组和对照组血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平相关性。结果NSCLC患者中血清miR-92a、miR-196b表达水平显著高于对照组(P<0.05),血清miR-143表达显著低于对照组(P<0.05);生存分析显示,血清中miR-92a、miR-196b低表达患者3年总生存率均显著高于miR-92a、miR-196b高表达患者(P<0.05);血清miR-143高表达患者3年总生存率均高于低表达组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者中血清miR-92a与miR-196b表达呈正相关性(γ=0.425,P<0.05),miR-143与miR-92a、miR-196b表达呈负相关(γ=-0.376,-0.356,P<0.05)。结论血清miR-92a、miR-196b在NSCLC患者中表达升高,血清miR-143表达降低,血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平变化可作为NSCLC临床病情评估和预后的重要依据。

microRNA-196b通过抑制OTX1而抑制结直肠癌细胞侵袭转移

观察结直肠癌检测microRNA-196b靶定orthodenticle人同源盒基因1(OTX1)在抑制结直肠癌细胞侵袭转移中的作用研究。方法 临床纳入2020年4月至2022年1月在本院就诊的结直肠癌(CRC)病人90例,对OTX1 mRNA、miRNA-196b予以实时定量PCR监测,分析结直肠癌、癌旁组织CPT1A中的OTX1mRNA、mirRNA-196b的表达情况。对miRNA-196b-mimic、miR-NC予以转染CPT1A,予以Transwell实验、细胞划痕实验、CCK-8法对CPT1A予以miRNA-196b对CPT1A的侵袭、迁移、增殖能力的影响;应用Western blotting对OTX1表达蛋白中miRNA-196b分别予以Transwell实验、细胞划痕实验、CCK-8法监测其对CPT1A的侵袭、迁移、增殖功能。结果 结直肠癌组织细胞和癌旁组织细胞中的miRNA-195b、OTX1表达指标水平差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果发现,结直肠癌组织内的OTX1mRNA、miRNA-195b表达指标呈现负相关(r=-0.440,P=0.016);CPT1A转染miRNA-196b后第72、96、120hA值与miR-NC组的细胞增殖能力显著减低(P<0.05);划痕细胞实验发现,划痕24h后,miRNA196b mimic组与miR-NC组比较其迁移功能下降;miRNA196b组的穿模细胞数为(36.524±8.216)个,低于miR-NC组(168.429±12.618)个,差异有统计学意义(t=83.1076,P<0.05)。结论 结直肠癌组织中的OTX1和miRNA-196b表达呈负相关,其中OTX1表达下调可通过miRNA-196b调节,对结直肠癌细胞的侵袭、迁移、增殖起到明显的抑制作用。

hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌中的表达

目的探讨食管鳞癌及正常组织微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异,寻找并验证具有差异表达的miRNA。方法随机选3例首次诊治食管鳞癌患者的手术切除标本,取癌组织及正常粘膜。采用荧光探针杂交芯片扫描技术,获得食管鳞癌miRNA表达谱,并对表达谱的可靠性进行荧光实时定量RT-PCR验证。另取15例首次诊治食管鳞癌患者手术切除标本的癌组织及正常粘膜,对其中具有表达差异的hsa-miR-126和hsa-miR-518b进行进一步验证。结果得到了食管鳞癌及正常组织的MicroRNA表达谱,分析得到表达变化且具有统计学意义(单侧t检验,P<0.05)的miRNA11个,其中上调1个,下调10个。在另外15对验证样本中,hsa-miR-126上调10例(配对t检验,P<0.05),hsa-miR-518b下调12例(配对t检验,P<0.05)。结论 hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌组织和正常组织中存在差异表达,hsa-miR-126在食管癌组织中上调,hsa-miR-518b下调。

巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液的抑菌谱及其稳定性

分别以菌丝生长速率法和抑菌圈法测定了巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液对18种植物病原真菌和7种细菌的抑制作用,发现该滤液抑菌谱较广,对供试的所有真菌均有抑制作用,对其中8种真菌的抑菌率在80%以上;对6种供试细菌有抑制作用,其中对水稻细菌性条斑病菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径达到27.67 mm。以水稻纹枯病菌为指示菌,测定了B196菌株发酵滤液的酸碱稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性及紫外线稳定性。结果表明,发酵滤液在pH 2～8条件下抑菌活性没有明显变化;经121℃处理20 min,抑菌活性为原有活性78.43%;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K均稳定,但对木瓜蛋白酶敏感;对紫外线稳定,在处理4 h后,抑菌率在80%以上。

Hsa-miR-125b在人胃癌耐药细胞株中的表达及其靶基因的功能分析

研究表明,Hsa-miR-125b在人胃癌耐氟尿嘧啶细胞株BGC823/Fu中表达下降。为进一步探讨hsa-miR-125b在获得性耐药中所起的作用,文章应用miRbase、靶基因预测软件、Gene Ontology数据库及KEGG数据库对hsa-miR-125b的序列特征、进化保守性、靶基因及功能以及靶基因所参与的信号通路等进行了深入的生物信息学分析。结果显示:has-miR-125b在多个物种之间具有高度序列保守性;通过软件预测获得hsa-miR-125b靶基因79个,其分子功能包括转录调节、蛋白质结合和肽酶类活性等(P<0.001),其所参与的生物学过程主要有细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的正性或负性调控以及细胞因子刺激反应性、药物反应性、DNA损伤反应性等(P<0.001),调控包括MAPK、Wnt、p53等多条信号转导通路(P<0.01)。上述结果表明hsa-miR-125b可能参与调控多个生物学过程和信号转导通路,而其中细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等生物学过程以及MAPK、Wnt、p53等信号通路已被证实与肿瘤耐药的发生有关。因此,hsa-miR-125b可能通过调控上述环节中的靶基因来影响肿瘤细胞对药物的敏感性,从而为hsa-miR-125b在肿瘤耐药中的作用机制提供新的研究线索。

miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表达的影响

背景与目的:BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法:实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果:miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。

生物信息学预测hsa-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。

miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定

目的构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础。方法以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定。用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P<0.05);K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用。

MicroRNA-196b基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌组织中MicroRNA-196b的表达及其临床意义。方法收集2013年5月至2015年5月在我院接受治疗的65例非小细胞肺癌患者肺癌组织及其对应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术对组织样本中MicroRNA-196b的表达情况进行检测,分析其与患者临床病理因素的关系;评价MicroRNA-196b在非小细胞肺癌诊断中的效能。结果非小细胞肺癌患者癌组织中MicroRNA-196b的表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中MicroRNA-196b的表达水平与淋巴结转移、TNM分期、病理分型密切相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小以及分化程度无关联性(P>0.05)。癌组织中MicroRNA-196b最佳检测临界值为0.879,检测灵敏度和特异度分别为78.5%、90.8%。结论 MicroRNA-196b在非小细胞肺癌患者肺癌组织中呈高表达,其表达水平与淋巴结转移、TNM分期、病理分型有关;癌组织MicroRNA-196b可作为临床非小细胞肺癌诊断的辅助检测指标。

miR-196b调控PI3K/Akt通路对宫颈癌细胞顺铂耐药的影响研究

目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞顺铂耐药性及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法:体外培养人宫颈癌细胞株HeLa、顺铂耐药细胞株HeLa/DDP,检测HeLa、HeLa/DDP对顺铂的耐药性;将HeLa/DDP细胞分为:空白对照(仅用转染试剂处理)+DDP组、阴性对照(转染miR-196b NC)+DDP组、miR-196b inhibitor(转染miR-196b inhibitor)+DDP组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-196b水平,蛋白印迹(WB)法检测Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、PI3K、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的IC_(50),流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:与HeLa细胞相比,HeLa/DDP细胞miR-196b表达显著升高(P<0.05),随顺铂浓度增加(0.01、0.1、1、5、10、20、40、80、100μmol/L)HeLa/DDP、HeLa细胞活力下降,经计算HeLa对顺铂的IC_(50)为4.86μmol/L,HeLa/DDP对顺铂的IC_(50)为68.13μmol/L,与HeLa相比,HeLa/DDP对顺铂的IC_(50)显著升高(P<0.05);与空白对照+DDP组、阴性对照+DDP组比较,miR-196b inhibitor+DDP组HeLa/DDP细胞中miR-196b表达水平,Akt、p-Akt、PI3K、p-mTOR蛋白水平及顺铂IC_(50)显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-196b表达可能通过下调PI3K/Akt通路相关蛋白表达,降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性。

肝癌组织miR-196b表达变化及其与患者临床病理参数和预后的关系

目的探讨肝癌组织miR-196b在肝癌发生发展中的作用。方法选择肝癌患者137例,取手术切除的肝癌组织及癌旁正常组织,采用qRT-PCR法检测miR-196b表达。分析miR-196b表达与肝癌患者临床病理参数及预后的关系。结果肝癌组织及其癌旁组织miR-196b相对表达量分别为1.853(1.173~4.706)、1.032(0.451~1.886),二者比较P<0.01。肝癌组织miR-196b表达与肿瘤直径、静脉侵犯有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肝功能Child-pugh分级等临床病理参数无关(P均>0.05)。以肝癌组织miR-196b相对表达量的中位值(1.853)为截断值,将肝癌患者分为miR-196b高表达者69例、低表达者68例。miR-196b高表达者总体生存期(OS)为21(1~58)个月,miR-196b低表达者为40.5(4~60)个月,二者比较P<0.01。结论肝癌组织miR-196b高表达可促进肝癌的发生及发展。

miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中mi R-196b和Hox B8的表达及临床意义。方法选取2012年10月-2014年3月在该院手术治疗的47例结直肠癌患者为研究对象,术中留取结直肠癌组织及正常黏膜组织,应用实时荧光定量PCR技术检测二者mi R-196b m RNA和Hox B8 m RNA表达情况,Hox B8蛋白表达检测应用Western blot,对检测结果进行统计学分析。结果结直肠癌组织中mi R-196b m RNA和Hox B8 m RNA表达量显著高于正常黏膜组织(P<0.01),且结直肠癌中两者表达水平呈显著负相关(r=-0.462,P=0.012);mi R-196b表达与肿瘤分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而Hox B8表达与结直肠癌临床病理特征不具有相关性(P>0.05)。结论结直肠癌组织中mi R-196b及Hox B8表达水平显著升高,mi R-196b不仅参与结直肠癌的发生发展,而且可能抑制Hox B8表达。

宫颈癌患者血清miR-196b表达与放疗敏感性关系及预测价值

目的:探究微小RNA(miR)-196b在宫颈癌中的表达水平,以及与放疗敏感性关系及预测价值。方法:收集2017年10月-2019年10月在本院治疗的宫颈癌患者84例(宫颈癌组),以同时期健康体检85例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清miR-196b水平;宫颈癌组行单纯根治性放疗治疗,分析其疗效;受试者工作特征曲线(ROC)检测血清miR-196b水平对宫颈癌疗效的预测价值;logistic分析影响宫颈癌放疗疗效的可能因素。结果:宫颈癌组血清miR-196b水平(3.52±0.88)高于对照组(1.01±0.24),且放射低敏感患者血清miR-196b水平(3.84±0.81)高于放射高敏感组(3.16±0.66)(均P<0.05);血清miR-196b水平预测宫颈癌患者疗效的ROC曲线下面积为0.788,截断值为3.024,其敏感性95.5%、特异性50.0%;临床分期高、miR-196b高水平是宫颈癌患者放疗效果差的危险因素,分化程度高是宫颈癌患者放疗效果差的保护因素。结论:宫颈癌放射低敏感性患者血清miR-196b水平较高,miR-196b高水平是影响宫颈癌患者放疗效果的危险因素,提示临床可作为化疗效果的预测参考。

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制。方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901。用Realtime RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期。结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000)。结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长。提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长。

慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清微小RNA-30a mRNA与微小RNA-196b mRNA相对表达量及临床意义

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30a mRNA与miR-196b mRNA在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化患者血清中的相对表达量及临床意义。方法选取2016年1月至2018年12月在江苏省张家港市第一人民医院行经皮肝组织活检确诊为CHB肝纤维化的139例患者为CHB肝纤维化组,选取130例同期健康体检者为对照组。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查。采用Au480全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)及白蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中金属蛋白酶-1抑制剂(metalloproteinase tissue inhibitor-1,TIMP-1)浓度;采用荧光定量聚合酶链反应检测miR-30a和miR-196bmRNA相对表达量,计算FIB-4指数。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查确定肝纤维化分期。采用Pearson法分析miR-30a mRNA和miR-196bmRNA相对表达量及其与各临床指标的相关性;采用受试者工作特征(receiver operatorcharacteristic,ROC)曲线评价miR-30a和miR-196b对肝纤维化的诊断价值。结果与对照组相比,CHB肝纤维化患者组血清中ALT [(65.34±13.53)U/L vs(18.28±3.14)U/L]、AST [(52.84±14.02)U/L vs(25.84±1.26)U/L]、TIMP-1 [(183.98±42.07)ng/ml vs(80.59±13.09)ng/ml]和FIB-4指数(1.33±0.09 vs 0.78±0.06)显著升高,miR-30a mRNA相对表达量(0.60±0.08 vs 1.00±0.09)和miR-196b mRNA相对表达量(0.45±0.04 vs 1.00±0.02)显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。139例患者中S0~S1期占32.37%(45/139),S2~S3期占45.32%(63/139),S4期占22.31%(31/139)。S0~S1期患者miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数分别为0.83±0.06、0.76±0.05、(142.68±13.21)ng/ml、0.84±0.08,S2~S3期患者上述指标分别为0.69±0.06、0.41±0.08、(257.50±53.05)ng/ml、1.23±0.09,S4期患者上述指标分别0.28±0.02、0.21±0.05、(383.52±62.31)ng/ml、2.48±0.19,血清中miR-30a mRNA相对表达量和miR-196b mRNA相对表达量随纤维化分期的增加而降低,TIMP-1和FIB-4指数随肝纤维化分期的增加而增加(P均<0.05)。CHB肝纤维化患者血清miR-30a和miR-196b与TIMP-1、FIB-4和肝纤维化分期呈负相关(P <0.05),与ALT和AST无相关性(P> 0.05)。miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数诊断CHB肝纤维化患者肝纤维化的ROC曲线下面积(area under ROC curve,AUC)分别为0.847(95%CI:0.756~0.928)、0.942(95%CI:0.860~0.983)、0.792(95%CI:0.721~0.855)、0.895(95%CI:0.821~0.967),miR-196b mRNA相对表达量的AUC显著高于其他指标(P均<0.001)。以0.468作为临界值,miR-196b mRNA相对表达量诊断的灵敏度和特异度分别为89.45%和83.60%。结论 CHB肝纤维化患者血清中miR-30a mRNA和miR-196ba mRNA相对表达量降低,检测miR-30a和miR-196ba mRNA相对表达量有助于评估CHB肝纤维化患者的肝纤维化程度。

miRNA-196b靶向抑制IGF2BP1对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miRNA-196b通过靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的机制。方法将miRNA-196b模拟物(mimics)和阴性对照转染至肝癌HepG2 细胞,分别作为阴性对照组和mimics-196b 组,未处理的细胞作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3 组肝癌HepG2 细胞miRNA-196b 和IGF2BP1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测IGF2BP1 和caspase 3 蛋白的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 mimics-196b组细胞miRNA-196b相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,IGF2BP1 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。mimics-196b 组细胞光密度(OD)值和IGF2BP1 蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,细胞凋亡率和caspase 3 蛋白相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。空白对照组和阴性对照组OD值、细胞凋亡率、IGF2BP1和caspase 3蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 miRNA-196b 可能通过靶向抑制IGF2BP1 的表达,抑制肝癌HepG2 细胞的增殖并促进其凋亡。