急性髓系白血病(AML)中hsa_circ_0000254的实验研究

目的:通过克隆环状RNA hsa_circ_0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础。方法:人工合成hsa_circ_0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到慢病毒过表达载体pLCDH-ciR中,测序验证。筛选阳性克隆,分别以pLCDH-circ254(C254)、NC(pLCDH-ciR)转染293T细胞,培养40 h后收集细胞进行PCR检测及产物测序验证。结果:pLCDH-circ254表达载体经测序验证,测序峰图正常,且无杂峰或叠带,序列对比吻合,表明hsa_circ_0000254成功插入环状RNA表达载体pLCDHciR,过表达载体构建成功,表达效率高达1万倍。结论:成功构建hsa_circ_0000254表达载体,可高效表达hsa_circ_0000254。

干扰hsa_circ_0013958/miR-637对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA(circularRNA,circRNA)hsa_circ_0013958对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Humankeloid fibroblast,HKF)增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:将人瘢痕疙瘩成纤维细胞分为si-NC组、si-hsa_circ_0013958组、miR-NC组、miR-637组、si-hsa_circ_0013958+anti-miR-NC组和si-hsa_circ_0013958+anti-miR-637组。实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试剂盒检测hsa_circ_0013958、miR-637表达;四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0013958和miR-637的靶向关系。结果:瘢痕疙瘩组织中hsa_circ_0013958表达水平较正常皮肤组织升高,miR-637表达水平降低(P<0.05)。干扰hsa_circ_0013958表达或过表达miR-637后,HKF细胞存活率、集落形成数以及迁移、侵袭细胞数均降低(P<0.05)。hsa_circ_0013958和miR-637有靶向调控关系;抑制miR-637表达逆转了干扰hsa_circ_0013958对HKF增殖、迁移侵袭的影响。结论:干扰hsa_circ_0013958通过调控miR-637抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

血浆外泌体hsa_circ_0052513在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的筛选非小细胞肺癌(NSCLC)血浆外泌体中差异表达的circRNA,并验证其作为NSCLC的诊断价值。方法对6例NSCLC患者和6例健康者的血浆外泌体进行circRNA测序分析。qRT-PCR法验证60例NSCLC患者和60例健康对照样本外泌体中hsa_circ_0052513的表达水平。qRT-PCR检测NSCLC患者术前与术后血浆外泌体中hsa_circ_0052513的表达水平。统计分析NSCLC患者血浆外泌体hsa_circ_0052513的表达量与临床病例资料的相关性。结果测序结果显示hsa_circ_0052513在NSCLC患者血浆外泌体中的表达水平高于健康对照。qRT-PCR结果确认了测序结果,而在NSCLC患者手术切除肿瘤后表达降低(P<0.05)。NSCLC患者血浆外泌体hsa_circ_0052513的高表达与NSCLC的肿瘤大小、远端转移和TNM分期相关(均P<0.05)。血浆外泌体hsa_circ_0052513诊断NSCLC患者曲线下面积(AUC)为0.7904(P<0.0001)。结论Hsa_circ_0052513在NSCLC患者血浆外泌体中高表达,且和肿瘤大小、转移以及TNM分期相关,有望成为NSCLC新的诊断标志物。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

Circular RNA hsa_circ_0078767通过miR-330-3p/p53轴调控肺癌细胞铁死亡

目的:探讨Circular RNAs(hsa_circ_0078767)通过调控miR-330-3p/p53信号通路,对肺癌细胞铁死亡的影响。方法:用qRT-PCR法检测四种人类肺癌细胞系(HCC827、A-549、Calu-3和H1975)和一种正常肺上皮细胞系BEAS-2B中hsa_circ_0078767的表达;转染hsa_circ_0078767的过表达载体(oe-circ)于A-549和H1975细胞内;RNA FISH确定hsa_circ_0078767的胞质定位;CCK-8、集落形成、EdU染色、FACS分析和流式细胞仪分别检测A-549和H1975细胞的活性、增殖、凋亡和ROS情况;铁测定试剂盒检测细胞铁含量;Western blot检测细胞中miR-330-3p、cleaved Caspase3和cleaved PARP的表达;RNA pull-down实验分析hsa_circ_0078767与miR-330-3p的结合位点的结合效率;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测hsa_circ_0078767和miR-330-3p的mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0078767与miR-330-3p的靶向关系;皮下注射A-549-vector和A549-oe-circ细胞(1×10~6个)到六周大的雄性裸鼠腹部,建立活体异种移植动物模型。结果:我们发现hsa_circ_0078767在肺癌细胞中低表达以及hsa_circ_0078767在肺癌恶性发展过程中对铁死亡的调控功能。在过表达hsa_circ_0078767的肺癌细胞中发现铁、Fe2+和ROS水平升高。铁死亡诱导剂erastin会降低细胞活力,而过表达hsa_circ_0078767会加强erastin对肺癌细胞的抑制作用。在机制方面,hsa_circ_0078767可通过海绵吸附miR-330-3p来影响p53的表达。上调miR-330-3p及敲降p53可逆转hsa_circ_0078767过表达对肺癌细胞的作用。结论:hsa_circ_0078767可能通过miR-330-3p/p53轴促进肺癌细胞铁死亡从而抑制肺癌进展。

环状RNA hsa_circ_0006156在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及其对Raji细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究hsa_circ_0006156对Raji细胞增殖、凋亡的影响及其在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法:收集广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2021年9月至2023年9月收治的55例SLE患者(SLE组),并以40例健康对照者作为对照组(HC组),分离出外周血单个核细胞(PBMC)及CD20+B淋巴细胞,使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测hsa_circ_0006156表达水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析hsa_circ_0006156的诊断效能。以Raji细胞为研究对象,使用慢病毒构建hsa_circ_0006156过表达模型,将细胞分为hsa_circ_0006156过表达组(OE组)、转染空病毒载体的阴性对照组(NC组)以及空白对照组(control组)。利用CCK8法检测0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h细胞450 nm吸光度,计算OE组和NC组增殖率。Western blotting实验检测各组Bcl-2、cleaved caspase-3凋亡蛋白表达水平。结果:与HC组比较,SLE组PBMC和CD20+B淋巴细胞中hsa_circ_0006156表达量均明显降低(P<0.001)。ROC曲线分析显示,hsa_circ_0006156区分SLE和HC的ROC曲线下面积(AUC)为0.787 3(95%CI:0.697 5~0.877;P<0.001),敏感度为97.5%,特异度为50.9%,对SLE诊断Cut-off值为<0.652。hsa_circ_0006156表达量在无活动或轻度活动与中重度活动患者之间存在显著差异(P=0.0148)。CCK8实验结果显示,在36 h时,OE组Raji细胞增殖较NC组受到明显抑制(P<0.001)。Western blotting检测结果表明,与NC组和control组比较,OE组Bcl-2蛋白表达水平降低,而cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论:hsa_circ_0006156对SLE具有一定的诊断效能。hsa_circ_0006156可能是通过调节B细胞的增殖、凋亡影响SLE的发生、发展。

胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞亚群相关性

目的 探究胃癌患者血浆中hsa_circ_0001588水平,并分析其血浆水平与患者临床特征、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、T淋巴细胞亚群的关系。方法 选取2021年3月至2022年5月于我院治疗的胃癌患者124例为研究组,另选取接受胃镜检查确诊为浅表性胃炎的患者130例作为良性组以及健康体检者130例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、Wmini5146流式细胞仪和双抗体夹心ELISA法检测受试者血浆hsa_circ_0001588水平、TLR4水平和CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平。分析血浆hsa_circ_0001588、TLR4、T淋巴细胞对于胃癌的诊断效能以及血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞水平的关系。结果 研究组血浆hsa_circ_0001588、TLR4和CD8^(+)表达水平高于良性组和对照组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于良性组和对照组(P<0.05),且研究组患者术后hsa_circ_0001588水平下降。临床分期越高、浸润深度越深、分化程度越低,发生远端转移的患者血浆hsa_circ_0001588水平越高(P<0.05)。血浆hsa_circ_0001588、TLR4和T淋巴细胞对于胃癌均有较好的诊断效能,其联合诊断的整体效能最高。血浆hsa_circ_0001588高表达患者CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达较低,TLR4和CD8^(+)表达较高(P<0.05),其血浆hsa_circ_0001588水平与CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达呈负相关性,与TLR4和CD8^(+)呈正相关性。结论 胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平偏高,且与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈负相关性,与TLR4、CD8^(+)呈正相关性。

hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探究hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法运用RT-qPCR检测并比较胃癌组织与对应癌旁组织、正常胃上皮细胞(gastric epithclial cells-1,GES-1)与三种胃癌细胞(MKN-28、AGS、SGC-7901)中hsa_circ_0006156的表达水平。应用相关性分析验证胃癌组织的hsa_circ_0006156表达水平与临床特征的关系。应用CCK-8、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验分别验证沉默或上调hsa_circ_0006156表达对胃癌细胞活性、克隆形成能力、迁移及侵袭能力的影响。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中hsa_circ_0006156相对表达量降低(P<0.05),胃癌细胞MKN-28、SGC-7901中hsa_circ_0006156的相对表达量低于GES-1细胞(P<0.001)。hsa_circ_0006156表达下调与TNM分期和CA50的表达相关(P<0.05);与性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、CA199、CA242、CA724无相关性(P>0.05)。沉默hsa_circ_0006156,胃癌细胞的活性和克隆形成能力明显提高,迁移距离显著减小,侵袭能力也明显下降。而上调表达hsa_circ_0006156,胃癌细胞的活性和克隆形成能力显著下降,迁移距离明显升高,侵袭能力也明显升高。结论hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中表达量均下降,hsa_circ_0006156抑制胃癌细胞的活力、增殖能力,但促进其迁移和侵袭能力。

原发性干燥综合征患者外周血环状RNA hsa_circ_0045800的表达研究

目的探讨原发性干燥综合征(pSS)患者外周血hsa_circ_0045800的表达及其在pSS诊断中的价值。方法采用微阵列芯片技术测序筛查4例pSS患者和4例对照者的外周血差异circRNAs;并以RT-qPCR验证50例pSS患者和50例对照者外周血的hsa_circ_0045800的表达差异;通过受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血中hsa_circ_0045800表达水平对pSS的诊断价值。结果pSS患者外周血中hsa_circ_0045800表达水平高于对照者,pSS患者治疗后hsa_circ_0045800表达水平低于治疗前(P<0.05);pSS患者hsa_circ_0045800的表达水平与病情评估指数(ESSDAI)、抗核抗体(ANA)滴度、血沉(ESR)均呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示:血清hsa_circ_0045800表达水平曲线下面积(AUC)为0.927,敏感度为74%,特异度为94%,对p SS的诊断效能较好。结论hsa_circ_0045800可能与pSS的发生、发展有关,并且有潜力成为pSS诊断、评估病情严重程度及预后的生物标志物。

血清外泌体hsa_circ_0008035在胃癌前病变和早期胃癌中的临床意义

目的 探讨血清外泌体hsa_circ_0008035在早期胃癌(GC)及癌前病变中的临床意义。方法 2012年1月~2017年12月于我院就诊的GC病人90例(GC组)、癌前病变病人外周血样本89例(Pre组),同期纳入45例健康志愿者外周血样本作为对照(NC组),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清外泌体hsa_circ_0008035水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体hsa_circ_0008035的诊断价值。通过内镜检查随访Pre组病人疾病进展情况。基于circBase和RegRNA 2.0靶点预测软件获得hsa_circ_0008035潜在的microRNA(miRNA)靶点。结果 与NC组比较,GC组和Pre组病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平显著上调,其中GC组升高最为明显(P<0.05)。与传统肿瘤标志物检测比较,外泌体hsa_circ_0008035诊断GC及Pre的曲线下面积(AUC)、敏感性、准确性均显著提高,假阴性率和假阳性率显著降低(P<0.05)。在区分早期GC和Pre病人时的AUC为0.681,灵敏度和特异度为66.35%和83.31%。Pre组病人中位随访5.3年,21例病人发生疾病进展,这部分病人诊断为疾病进展时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平较基线值显著上调(P<0.001),基线时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平也较未发生疾病进展的病人普遍上调(P=0.005)。对于GC组病人,中晚期GC(TNM分期Ⅲ~Ⅳ期)病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平高于早期GC病人,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_0008035靶通路预测结果显示,hsa_circ_0008035含有hsa-miR-599、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-1256和hsa-miR-375种子序列及相关的常见下游靶点。结论 血清外泌体hsa_circ_0008035表达在早期GC及癌前病变病人中普遍上调,对早期GC、胃癌前病变的诊断和疾病进展的评估均有一定的临床意义。

hsa_circ_0010697在胃癌发生、发展和转移中的作用及机制

目的 探讨hsa_circ_0010697在胃癌中的表达水平及发生、发展过程中可能的分子机制。方法 从美国生物技术信息中心数据库中查询hsa_circ_0010697基因序列,合成慢病毒载体;制备胃癌细胞SGC-7901。设置3组。对照组:胃癌细胞SGC-7901,未转染慢病毒载体。shRNA-NC组:空载体(慢病毒载体)转染胃癌细胞SGC-7901。hsa_circ_0010697-shRNA组:hsa_circ_0010697慢病毒载体转染胃癌细胞SGC-7901。采用qRT-PCR检测3组hsa_circ_0010697基因在胃癌细胞SGC-7901中的表达,采用CCK-8法检测3组细胞增殖活性[以波长为450 nm处的吸光度(A_(450))值表示],Tranwell实验检测3组细胞迁移和侵袭能力(穿透基质膜到达下室的细胞数量),Western blot检测3组细胞RAS-ERK信号通路上的RAS、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、E2F转录因子1(E2F1)的蛋白质相对表达量。取6周龄雄性SPF级裸鼠6只,随机分入shRNA-NC组、hsa_circ_0010697-shRNA组,每组3只,检测两组裸鼠的体重和种瘤体积。结果 qRT-PCR结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组hsa_circ_0010697基因相对表达量为1.423±0.109,显著高于对照组的0.994±0.172和shRNA-NC组的1.006±0.137(P值均<0.05)。CCK-8法检测细胞增殖结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组细胞A_(450)值为0.757±0.051,显著低于对照组的1.000±0.044和shRNA-NC组的0.981±0.054(P值均<0.05)。Transwell实验结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组穿透基质膜到达下室的细胞数量为(93±11)个,显著少于对照组的(165±16)个和shRNA-NC组的(152±15)个(P值均<0.05)。Western blot结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组RAS-ERK信号通路上的RAS、ERK1/2、CDK4、Cyclin D1、E2F1蛋白质相对表达量显著高于对照组和shRNA-NC组(P值均<0.05)。裸鼠移植瘤模型实验结果显示,饲养12、18、22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠的体重均显著大于shRNA-NC组同时间(P值均<0.05);饲养22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠种瘤体积均显著小于shRNA-NC同时间(P值均<0.05)。结论 hsa_circ_0010697可以在胃癌诊治中作为一种潜在生物标志物和治疗靶点,为胃癌的药物靶向治策略提供了新思路。

血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896在肺腺癌中的筛查价值

目的探讨血清外泌体来源的环状RNA(circRNA)hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896作为肺腺癌分子标志物的临床筛查价值。方法共收集3个批次样本。第一批为血清外泌体组:收集肺腺癌患者127例,健康人对照组53例。第二批为血清组:收集肺腺癌患者87例,健康人对照组41例。第三批为手术前后血清外泌体组:收集手术前后肺腺癌患者26例。分离各组研究对象的血清及外泌体,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清及外泌体中hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平,统计并分析手术前后肺腺癌患者血清外泌体circRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。采用ROC曲线评估3个血清外泌体circRNA对肺腺癌的临床筛查效能,Pearson分析血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物的相关性。结果qRT-PCR结果显示,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.338±1.362、1.650±1.329、2.064±1.621(t值分别为6.794、6.237、6.456,P<0.05);与术后比较,术前3个血清外泌体的表达水平分别为0.989±1.746、3.084±2.013、3.330±2.088(t值分别为5.289、4.197、4.966,P<0.05)。血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.777、0.766、0.793,当cut-off值分别为1.08、2.16、2.59时,其敏感性分别为73.23%、68.50%、66.14%,特异性分别为67.92%、79.25%、82.35%。此外,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.318±2.077、1.932±1.971、2.141±1.815(t值分别为3.741、4.677、4.496,P<0.05);血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的AUC ROC分别为0.676、0.739、0.738,当cut-off值分别为0.29、1.88、2.44时,其敏感性分别为35.63%、48.28%、51.72%,特异性分别为95.12%、90.24%、85.37%。肺腺癌患者血清外泌体hsa_circ_0001439水平与T分期(P=0.042)、TNM分期(P=0.032)相关;而血清外泌体hsa_circ_0001492水平与年龄(P=0.027)、M分期(P=0.028)、T分期(P=0.004)、TNM分期(P=0.009)相关;血清外泌体hsa_circ_0000896水平与年龄(P=0.027)、T分期(P=0.001)、TNM分期(P=0.009)相关。Pearson分析显示血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物均无相关性(P>0.05)。结论血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的差异表达可用于肺腺癌的临床筛查。

宫颈鳞状细胞癌中hsa_circ_0007905的表达意义及对生长的影响

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中hsa_circ_0007905的表达、临床病理意义以及对生长的影响。方法:收集71例CSCC手术切除标本及临床病理参数。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测验证CSCC中hsa_circ_0007905的表达水平。统计分析hsa_circ_0007905的表达与临床病理特征的关系;CCK-8实验检测hsa_circ_0007905对CSCC细胞的增殖活性影响。裸鼠皮下荷瘤实验检测敲低hsa_circ_0007905表达后对移植瘤生长(体积和重量)的影响。结果:在71例CSCC组织中hsa_circ_0007905的表达水平明显高于癌旁正常组织(P=0.0001);hsa_circ_0007905在宫颈癌细胞HeLa、C33A的表达水平高于人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic(P<0.05)。hsa_circ_0007905的表达高低与CSCC的肿瘤大小和分化程度密切相关(P均<0.05),而与患者年龄、HPV感染、淋巴结转移和TNM分期之间无相关性(P均>0.05)。即表达水平越高,肿瘤越大而且分化程度越低,恶性程度越高。CCK-8实验结果显示过表达hsa_circ_0007905提高了C33A细胞的增殖活性能力,而降低hsa_circ_0007905表达则抑制了C33A细胞的增殖活性能力(P均<0.05)。裸鼠皮下荷瘤实验表明降低hsa_circ_0007905表达后肿瘤的体积和重量明显小于对照组,两组间差异有统计学意义(P均<0.05)。该实验结果进一步表明hsa_circ_0007905促进宫颈癌的增殖和生长。结论:在CSCC中hsa_circ_0007905表达水平上调,是一个新的促进宫颈癌细胞的生长增殖的癌基因,本研究为未来靶向治疗CSCC提供有力的实验依据。

血清细胞外囊泡hsa_circ_0005075在复发性流产中的表达及临床意义

目的分析复发性流产(RSA)患者血清细胞外囊泡(EVs)hsa_circ_0005075的表达水平及临床意义。方法收集山东大学齐鲁医院妇产科就诊的14例RSA患者和14例正常妊娠者(对照组)为训练集,64例RSA患者和48例对照为验证集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组间血清EVs中hsa_circ_0005075的表达水平,并分析其与RSA患者临床病理参数的关系。采用电化学发光法检测血清中甲状腺球蛋白抗体(A-TG)、抗甲状腺过氧化物酶自身抗体(A-TPO),化学发光免疫分析法检测血清抗心磷脂(ACA)抗体(IgA、IgG、IgM)、抗β2GP1抗体(IgA、IgG、IgM)水平;采用Person相关分析血清EVs hsa_circ_0005075与上述临床指标的关系;采用ROC曲线评估血清EVs hsa_circ_0005075对RSA的临床应用价值。结果训练集检测结果显示,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[7.69(4.74,42.15)]显著高于对照组[1.02(0.51,4.23)],差异有统计学意义(U=28,P<0.01)。在验证集中,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[4.96(1.73,8.89)]亦显著高于对照组[1.00(0.24,2.96)],差异有统计学意义(U=693,P<0.01)。ROC曲线显示,血清EVs hsa_circ_0005075对RSA具有较好的诊断价值(AUC^(ROC)=0.774),其敏感性和特异性分别为70.3%和75.0%。血清EVs hsa_circ_0005075的表达与A-TPO具有一定的相关性(r=0.298,P<0.05)。结论血清EVs hsa_circ_0005075在RSA患者中呈高表达,对RSA具有潜在的鉴别诊断价值。

Hsa_circ_0007067在子宫内膜样癌中的表达及临床意义

目的:子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,以子宫内膜样癌(endometrioid adenocarcinoma,EEC)最常见,其发病机制目前尚不清楚,已有研究证明环状RNA(circular RNA,circRNA)的表达与EEC的进展有关。本研究旨在检测hsa_circ_0007067在EEC中的表达,并探讨Hsa_circ_0007067与EEC临床病理特征的关系。方法:应用高通量测序分析2例EEC组织和2例正常子宫内膜组织基因表达水平,以|log2(Fold changes)|≥1.5且P<0.05为筛选标准,选择下调最显著的hsa_circ_0007067为研究对象,应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测36例EEC组织(EEC组)和36例正常子宫内膜组织(对照组)中hsa_circ_0007067的相对表达量。生物信息学分析预测hsa_circ_0007067的结合位点和编码能力。结果:EEC组中hsa_circ_0007067表达水平显著低于对照组(P<0.05),且表达水平与国际妇产科联盟(Inter-national Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期和组织分化程度有关;受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线显示曲线下面积(area under curve,AUC)为0.936,敏感度为0.833,特异度为0.889,最佳截断值为0.722,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hsa_circ_0007067具有翻译成多肽的潜能,circbank数据库预测其miRNA潜在结合位点共24个。结论:Hsa_circ_0007067与EEC的发生、发展相关,可能通过与下游靶基因miRNA结合或编码蛋白质功能影响EEC的进程,有望作为EEC早期筛查和判断预后的分子指标。

hsa_circ_0013058促进食管鳞状细胞癌侵袭和迁移的机制研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制。方法收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理资料的关系。采用划痕实验和Transwell实验检测ESCC细胞侵袭和迁移能力。采用生物信息学方法预测hsa_circ_0013058的靶基因。采用Rescue实验检测hsa_circ_0013058对下游基因的调控及对ESCC细胞侵袭、迁移的影响。结果qRT-PCR结果显示,ESCC组织中hsa_circ_0013058表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=5.078,P<0.05)。ESCC细胞株KYSE70中hsa_circ_0013058表达量高于人正常食管上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义(P<0.05)。在RNA水平上,hsa_circ_0013058与miR-548p呈负相关(r=-0.2542,P<0.05)。ESCC组织中,hsa_circ_0013058 RNA阳性表达率为72.00%,高于癌旁正常组织的17.33%,差异有统计学意义(χ2=6.862,P<0.05)。hsa_circ_0013058阳性表达与肿瘤浸润深度、分化程度和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。划痕实验结果表明,过表达hsa_circ_0013058增强KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05);敲低hsa_circ_0013058表达减弱KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05)。过表达hsa_circ_0013058后,ESCC细胞侵袭和迁移细胞数目增加,敲低hsa_circ_0013058表达后,侵袭和迁移细胞数目下降(P<0.05)。qRT-PCR实验证实,hsa_circ_0013058可调控微小RNA-548p(miR-548p)表达。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-548p与LPAR3为特异性结合,LPAR3是miR-548p的直接靶基因。Rescue实验结果表明,hsa_circ_0013058通过miR-548p/LPAR3信号轴调控ESCC细胞的侵袭、转移。结论ESCC中,hsa_circ_0013058抑制miR-548p表达,进而激活LPAR3信号通路,促进ESCC细胞的侵袭、迁移。

hsa_circ_0030042对口腔鳞状细胞癌作用的研究

目的:探究hsa_circ_0030042在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR检测OSCC细胞中hsa_circ_0030042的表达,在OSCC细胞中转染小干扰RNA(siRNA)以敲低hsa_circ_0030042,采用CCK-8、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测hsa_circ_0030042对OSCC细胞的增殖、侵袭、迁移作用影响。结果:hsa_circ_0030042在CAL27和HSC3细胞中的表达显著升高(P<0.001);与对照组相比,敲低hsa_circ_0030042后,CAL27、HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。结论:hsa_circ_0030042在OSCC细胞中的表达显著增高,可促进OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移。

环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA Hsa_circ_0006948(circ_0006948)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ_0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为pc-NC组、pc-circ_0006948组、si-NC组以及si-circ_0006948组,取正常培养的细胞作为NC组。CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高(P<0.05),由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验。与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05);与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化(EMT)有关。

hsa_circ_0090231与hsa_circ_0004543在急性脑梗死患者颈动脉斑块中的临床意义

目的探讨hsa_circ_0090231与hsa_circ_0004543在急性脑梗死(ACI)患者颈动脉斑块中的临床意义。方法选取2022年1月至12月于浙江省嘉兴市第一医院收治的60例ACI患者作为试验组,根据预后情况分为预后良好组(39例)和预后不良组(21例);选择同期于浙江省嘉兴市第一医院体检中心体检的50例健康体检者作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应测定hsa_circ_0090231和hsa_circ_0004543表达;采用Pearson分析hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543对ACI患者不良预后的诊断效能。结果试验组hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543及LDL-C水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543及LDL-C水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,ACI患者hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543表达均与LDL-C水平呈正相关(r=0.650、0.726,P<0.001)。ROC曲线显示,hsa_circ_0090231的曲线下面积为0.84375(95%CI:0.736~0.939),特异度为0.875,灵敏度为0.700;hsa_circ_0004543的曲线下面积为0.96875(95%CI:0.922~0.996),特异度为0.900,灵敏度为0.950。结论hsa_circ_0090231和hsa_circ_0004543在ACI患者中表达激活,其在不良预后患者中表达高于预后良好者,且其对患者不良预后具有一定诊断价值。

Role of hsa_circ_0007482 in pterygium development: insights into proliferation, apoptosis, and clinical correlations

AIM:To investigate the impact of hsa_circ_0007482 on the proliferation and apoptosis of human pterygium fibroblasts(HPFs)and its correlation with the severity grades of pterygium.METHODS:Pterygium and normal conjunctival tissues were collected from the superior area of the same patient’s eye(n=33).The correlation between pterygium severity and hsa_circ_0007482 expression using quantitative reversetranscription polymerase chain reaction(RT-qPCR)were analyzed.Three distinct siRNA sequences targeting hsa_circ_0007482,along with a negative control sequence,were transfected into HPFs.Cell proliferation was assessed using the cell counting kit-8.Expression levels of Ki67,proliferating cell nuclear antigen(PCNA),Cyclin D1,Bax,B-cell lymphoma-2(Bcl-2),and Caspase-3 were measured via RT-qPCR.Immunofluorescence staining was employed to detect Ki67 and vimentin expressions.Apoptosis was evaluated using flow cytometry.RESULTS:Hsa_circ_0007482 expression was significantly higher in pterygium tissues compared to normal conjunctival tissues(P<0.001).Positive correlations were observed between hsa_circ_0007482 expression and pterygium severity,thickness,and vascular density.Knockdown of hsa_circ_0007482 inhibited cell proliferation,reducing the mRNA expression of Ki67,PCNA,and Cyclin D1 in HPFs.Hsa_circ_0007482 knockdown induced apoptosis,increasing mRNA expression levels of Bax and Caspase-3,while decreasing Bcl-2 expression in HPFs.Additionally,hsa_circ_0007482 knockdown attenuated vimentin expression in HPFs.CONCLUSION:The downregulation of hsa_circ_0007482 effectively hampers cell proliferation and triggers apoptosis in HPFs.There are discernible positive correlations detected between the expression of hsa_circ_0007482 and the severity of pterygium.