热休克蛋白70在肺癌侵袭和转移中的研究进展

肺癌是一种对人类身心造成严重危害的疾病,是全球的重大公共卫生问题。目前,尽管靶向药物、化疗药物及免疫药物的联合使用使肺癌患者的生存期和生活质量得到提升,但复发和远处转移的发生意味着肺癌治疗面临新的困难。热休克蛋白70(Hsp70)作为一种在进化上高度保守的分子伴侣,在包括肺癌在内的多种实体肿瘤细胞中高表达,通过抑制细胞凋亡、促进肿瘤微环境的形成、诱导上皮间充质转化及维持癌症干细胞的干细胞特性,促进肺癌的侵袭及转移,因此通过研究Hsp70在肺癌侵袭及远处转移中的相关机制,寻找治疗肺癌的新靶点,并与目前的常规治疗结合,可能为肺癌的治疗提供新的治疗策略,该文就以上方面进行综述。

紫锥菊及其复方对热应激蛋鸡抗氧化功能、蛋白酶及HSP70的影响

本试验通过观察紫锥菊及其复方对热应激蛋鸡抗氧化功能、蛋白酶及HSP70的影响,初步探讨紫锥菊及其复方抗热应激的作用机制。试验选用250只60周龄健康的海兰白蛋鸡,随机分成5个组,紫锥菊复方组、紫锥菊组、电解多维组在基础日粮中分别添加1.0%紫锥菊复方、1.0%紫锥菊、0.1%电解多维,高温组和常温组仅饲喂基础日粮。紫锥菊复方组、紫锥菊组、电解多维组和高温组的蛋鸡饲养在33℃~35℃的环境中,常温组蛋鸡环境温度为24℃~26℃。在试验14 d、28 d、42 d、56 d,采集各组鸡胃、胰腺和脾脏组织,检测胃蛋白酶及胰蛋白酶活性、抗氧化活性及HSP70含量变化。结果表明,紫锥菊复方、紫锥菊及电解多维均可恢复热应激导致的蛋鸡胃蛋白酶活性降低,同时紫锥菊复方的效果显著优于紫锥菊及电解多维(P<0.05);紫锥菊复方和紫锥菊可显著提高热应激蛋鸡的胰蛋白酶活性(P<0.05);紫锥菊复方能显著提高热应激蛋鸡脾脏中SOD、GSH-Px的活性(P<0.05);紫锥菊复方、电解多维能恢复热应激蛋鸡脾脏组织T-AOC的水平;同时,紫锥菊复方及紫锥菊能改善热应激蛋鸡脾脏中HSP70的表达。结果提示,紫锥菊复方及紫锥菊可以提高热应激蛋鸡的抗氧化活性、蛋白酶水平及HSP70的表达,并且紫锥菊复方的效果更佳。

热休克蛋白70在心血管疾病中的研究进展

热休克蛋白70(Hsp70)是进化上高度保守的一种蛋白质,具有多种生物学功能,并在维持细胞稳态中发挥重要作用。病理条件下,Hsp70异常表达会影响心血管疾病的发生与进展。因此,本文对Hsp70结构、功能及其在2型长QT综合征、心肌缺血再灌注损伤、扩张型心肌病等疾病中的作用机制作一综述,并探讨可进一步深化研究的方向。

热休克蛋白70与肺部疾病的相关性的研究进展

热休克蛋白70(HSP70)是应激状态或高温下能抑制细胞蛋白质变性或展开的蛋白质,在炎症因子表达、抑制细胞凋亡、抑制蛋白质聚集等方面发挥关键作用。该文阐述了国内外研究HSP70与肺癌、肺炎、肺结核、哮喘等肺部疾病发病机制的密切关系,为肺部疾病的快速诊断提供了新思路。

血清热休克蛋白70、热休克蛋白90和胃泌素水平对重症颅脑损伤并发应激性溃疡的预测

目的探讨血清热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)和胃泌素(GAS)水平对重症颅脑损伤并发应激性溃疡的预测价值。方法选取126例重症颅脑损伤患者,入院后均采用酶联免疫法(ELISA)检测血清HSP70、HSP90和GAS水平,并实施标准去大骨瓣减压术联合腰大池引流术。统计应激性溃疡发生率,分析血清HSP70、HSP90和GAS水平与患者并发应激性溃疡的关系及三者联合对该并发症的预测价值。结果应激性溃疡发生率为32.17%;并发应激性溃疡患者入院后血清HSP70、HSP90和GAS水平均高于未并发者(P<0.05);年龄、入院格拉斯哥昏迷量表(GCS)3~5分、入院后血清HSP70水平、入院后血清HSP90水平、入院后血清GAS水平、入院后转铁蛋白(TRF)水平、入院后随机血糖水平、低血压、低氧血症、代谢性酸中毒、应用糖皮质激素均是并发应激性溃疡的危险因素(P<0.05),入院后血红蛋白(Hb)水平、入院后红细胞压积(HCT)、应用保护胃黏膜药物、应用乌司他丁是其保护因素(P<0.05);血清HSP70、HSP90、GAS水平联合预测重症颅脑损伤并应激性溃疡的灵敏度均高于单独预测(P<0.01),曲线下面积(AUC)均高于单独预测(P<0.05),特异度均与单独预测差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清HSP70、HSP90、GAS水平升高可增加重症颅脑损伤并发应激性溃疡的风险,且年龄、入院GCS3~5分等也均是其危险因素,入院后Hb水平、入院后HCT等是其保护因素,血清HSP70、HSP90、GAS水平联合预测并发应激性溃疡的效能高。

人软骨糖蛋白-40、热休克蛋白-70及儿茶酚胺对急性冠脉综合征患者病情严重程度的预警作用研究

目的:探究人软骨糖蛋白-40(YKL-40)、热休克蛋白-70(HSP-70)及儿茶酚胺与急性冠脉综合征(ACS)患者病情严重程度之间的关联性,为临床诊疗提供参考价值。方法:研究对象选取心血管内科就诊并进行治疗的急性冠脉综合征(ACS)患者共213例,并根据冠状动脉造影(CAG)及临床生理指标结果将所有患者分为急性心肌梗死(AMI)105例和不稳定心绞痛(UAP)108例;根据Gensini评分分为低危组(评分≤30分)59例、中危组(30分<评分≤60分)69例和高危组(评分>60分)85例;根据冠脉病变支数将患者分为单支组35例、双支组106例和多支组72例。①记录并比较AMI组、UAP组及对照组研究对象YKL-40、HSP-70、儿茶酚胺水平;②记录并比较低、中、高危组及对照组研究对象YKL-40、HSP-70、儿茶酚胺水平;③分析YKL-40、HSP-70、儿茶酚胺水平与冠脉病变支数的关联性;④分析YKL-40、HSP-70、儿茶酚胺水平与Gensini评分的相关性。结果:①与健康对照组相比,UAP组、AMI组患者YKL-40、HSP-70、儿茶酚胺水平均明显升高(均P<0.05);与UAP组相比,AMI组患者YKL-40、儿茶酚胺水平明显升高(均P<0.05),HSP-70水平无明显变化(P>0.05)。②随着患者病情严重程度的增加,YKL-40、儿茶酚胺水平显著升高(均P<0.05),且各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05);与低危组及中危组患者相比,高危组患者HSP-70水平显著降低(P<0.05)。③随着患者冠脉病变支数的增加,YKL-40、儿茶酚胺水平升高,HSP-70水平降低;与单支组及双支组患者相比,多支组患者YKL-40、儿茶酚胺水平显著升高(均P<0.05),HSP-70水平无明显变化(P>0.05)。④相关性分析显示,YKL-40、儿茶酚胺水平与Gensini评分均呈显著正相关,HSP-70评分与Gensini评分呈显著负相关。结论:ACS患者YKL-40、HSP-70及儿茶酚胺水平均明显高于健康人群;随着患者病情严重程度及冠脉病变支数的增加,YKL-40、儿茶酚胺水平升高,HSP-70水平降低。同时,YKL-40、HSP-70及儿茶酚胺水平均与Gensini评分显著相关,且能够很好的评估ACS患者病情及冠脉病变状况,具有较高的临床价值。

中药对急性热应激小白鼠肺、肾脏的热休克蛋白70及热休克因子1表达量的影响

文章旨在研究中药对急性热应激小白鼠肺、肾脏的热休克蛋白70及热休克因子1表达量的影响。试验选用体质健康,体重基本一致的6~7周龄健康SPF级昆明小白鼠90只,将其随机分为7组,分别为复方一组、复方二组和复方三组、紫锥菊组、王老吉组、阳性空白对照组、阴性空白对照组,每组10只。在试验第1、3小时每组取5只小白鼠,采用ELISA法测定小白鼠肺、肾脏组织热休克蛋白70(HSP70)和热休克因子1(HSF1)表达量。结果显示,中药复方组能有效提高热应激小白鼠肺脏和肾脏HSP70表达量,复方一,复方二和紫锥菊能提高热应激小鼠肺脏HSP70的含量,复方三和王老吉组能缓解其下降幅度。高热应激过程中小白鼠肺脏HSF1表达量呈上升趋势,复方二能显著提高肺脏HSF1的表达量;但肾脏HSF1的表达量却呈下降趋势,这与肾脏HSP70高表达有关。结果表明,在此试验中,通过HSP70的表达量变化阐明了中药对急性热应激的预防保护能力。

罗非鱼冷藏期间内源蛋白酶和热休克蛋白70对肌原纤维解离的影响

为研究罗非鱼冷藏期间内源蛋白酶和热休克蛋白70与肌原纤维解离的关系,实验测定了罗非鱼肉在4℃真空包装冷藏48 h内肌原纤维小片化指数、肌原纤维解离、内源蛋白酶活性和热休克蛋白70含量的变化,并对其进行相关性分析。结果表明鱼肉冷藏期间肌原纤维小片化指数变化整体呈增加的趋势,最终为初始值的3.52倍;解离的肌球蛋白重链和肌动蛋白的含量呈升高的趋势,最终分别较初始值提高了70%和65%;pH变化为先减少后略微回升,变化范围为6.5~7.0;组织蛋白酶B、L活性持续增加,组织蛋白酶D和钙激活蛋白酶活性呈先增加后减少的趋势,且分别在8、12 h到达最大值;热休克蛋白70含量为先增加后减少,在4 h时达到最大值,最终相比初始值下降了22.27%;肌原纤维小片化指数与组织蛋白酶B、L活性呈极显著正相关(P<0.01),与肌原纤维解离的肌球蛋白重链和肌动蛋白含量均呈极显著正相关(P<0.01),与热休克蛋白70含量呈显著负相关(P<0.05);热休克蛋白70含量与与组织蛋白酶L呈显著负相关(P<0.05)。组织蛋白酶B、L是影响肌原纤维完整性的关键蛋白酶,热休克蛋白70能与肌原纤维粗丝和细丝结合稳定肌原纤维结构,且组织蛋白酶L可能通过降解热休克蛋白70来影响肌原纤维粗丝和细丝的解离。

合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析

采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。

脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。

温度刺激下栉孔扇贝不同组织热休克蛋白HSP70的表达研究

采用免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)方法,研究了热激栉孔扇贝不同组织内热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的表达变化.免疫印迹结果显示,HSP70的诱导表达有组织特异性,即热休克可以使扇贝鳃组织中HSP70的表达明显升高,但在肌柱、外套膜和性腺组织中,未检测到HSP70 的表达.流式细胞术结果表明:在不同的季节,相同的热刺激对扇贝血淋巴中HSP70的诱导表达存在差异.高温刺激后,栉孔扇贝血淋巴细胞中HSP70的表达量逐渐升高,在诱导7h时达到最高.

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

研究不同热休克条件对H22小鼠肝癌细胞的HSP70mRNA及蛋白表达的影响,以期获得最佳诱导条件.分别用MTT、RT-PCR、免疫荧光和FCM检测等方法观察不同热休克条件对鼠H22细胞的生存率、胞内HSP70mRNA转录水平及胞膜HSP70蛋白表达水平的改变.结果表明,H22细胞经轻度热休克(42～43℃),细胞生存率无影响,而中重度热休克(44～45℃)则随休克时间的延长,细胞生存率明显下降;42℃热休克初期(0.5～4小时)胞内HSP70mRNA水平低于对照组,休克后期(8～12小时)mRNA水平有所恢复并逐渐增高;不同时间热休克组H22细胞胞膜HSP70表达均较对照组显著增高(P<O.005),其中非致死性热休克以12小时表达最高,42℃为59.5%,43℃为96.8%.因此适当热休克条件可引起H22细胞HSP7OmRNA的改变及膜上HSP70蛋白表达的增加,从而增加肿瘤细胞的免疫原性.

猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70(Dnak)的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHP)是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1 803 bp,编码600 aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较,发现Yin-1株与232株、J株、7 448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3%～99.4%,氨基酸同源性为99.2%～99.3%,而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64.5%～74.4%和59.3%～77%。这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒,原核表达DnaK C末端大小为1 kb左右的基因,对表达的蛋白进行纯化后,通过Western blot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41 ku的目的蛋白,经Western blot证实,纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应,具有免疫活性。

团头鲂(Megalobrama amblycephala)两种热休克蛋白70(HSP70s)的原核表达、纯化及鉴定

采用PCR方法扩增团头鲂组成型HSC70和诱导型HSP70基因完整的编码区片段,并分别克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达。采用Ni-NTA His Bind Resins亲和层析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析对目的蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,成功构建了团头鲂两种重组表达质粒pET-22b(+)/Ma-HSC70和pET-22b(+)/Ma-HSP70,表达融合蛋白的相对分子量均约为72kDa,并能与兔抗人HSP70多抗进行特异性结合,这两种HSP70s融合蛋白经纯化后的纯度均达到95%以上。本实验选择融合蛋白Ma-HSC70在25℃和Ma-HSP70在30℃下分别诱导7h作为可溶性表达的最佳条件。

栉孔扇贝热休克蛋白70(HSP70)基因的BAC-FISH定位

利用BAC-FISH技术,将包含HSP70基因的BAC克隆定位到栉孔扇贝的一对同源染色体的长臂上。HSP70基因的染色体定位将对深入研究该基因的结构及功能并将其应用于生产实践提供基础支持。同时,本研究是首次对栉孔扇贝低拷贝基因进行染色体定位的实践,其结果将为栉孔扇贝的染色体的深入研究以及染色体鉴别等工作提供必要的参考。

模拟失重及再超重对猕猴腮腺组织热休克蛋白HSP70表达的影响

目的探讨模拟失重30 d及再超重对猕猴腮腺组织中热休克蛋白HSP70表达的影响。方法选用雄性猕猴23只,随机分为对照组(A组),失重(B组),超重+13 Gx/230s(C组),失重后再超重(D组,依据不同的+Gx强度和时间分为4个亚组:分别是+11 Gx/270s D1组、+13 Gx/230s D2组、+15 Gx/200s D3组、+13 Gx/230s后恢复9 d D4组)。通过HE染色观察腮腺组织形态学的变化,通过免疫组织化学染色及Western blot技术检测HSP70在腮腺中的表达。采用SPSS17.0对数据进行统计分析。结果对照组腮腺结构基本正常,实验组腮腺组织中可见不同程度的局灶性淋巴细胞浸润、腺泡细胞萎缩,导管扩张,血管扩张充血;对照组腮腺组织HSP70表达阴性,实验组腮腺组织HSP70表达阳性,随着+Gx强度的加大而表达增强的趋势。实验组(除D4组外)HSP70在蛋白水平的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论模拟失重、超重环境可造成猕猴腮腺出现轻度病理变化,腮腺组织中HSP70表达显著增强。

猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定

以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别。以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠。筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11。Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应。抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF11分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链。相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位。

热休克蛋白70(hsp70)基因对利什曼原虫中国分离株的系统发育分析

目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并构建系统发育树,同时与国外利什曼原虫分离株的hsp70序列共同分析,观察利什曼原虫中国分离株在世界范围利什曼原虫的系统发育和分子进化中的地位。结果中国各流行疫区利什曼原虫均获得约1 300bp长度的hsp70基因片段,存在丰富的多态位点。中国23株利什曼原虫经hsp70基因分型聚集为四群,其中人来源的原虫分离株均在A群,为杜氏利什曼原虫(L.donovani),并分为杜氏利什曼原虫指名亚种(L.donovani)和杜氏利什曼原虫婴儿亚种(L.infantum)两个亚支;分离自新疆沙鼠或白蛉的6株利什曼原虫聚在B群,为都兰利什曼原虫(L.turanica);分离自新疆白蛉和内蒙古沙鼠的两株利什曼原虫为C群沙鼠利什曼原虫(L.gerbilli);分离自内蒙古蜥蜴和新疆白蛉的两株原虫为D群蜥蜴利什曼原虫(Sauroleishmania)。结论利什曼原虫中国分离株属于利什曼原虫亚属的不同种和蜥蜴利什曼原虫亚属,我国利什曼原虫分离株的种系发育复杂多样。

慢性萎缩性胃炎热休克蛋白70(HSP70)表达的相关研究

目的探讨热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSP70)在人胃粘膜组织中的表达。方法采用免疫组化SABC方法检测HSP70在浅表性炎、慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃窦腺癌组织中的表达。结果HSP70在浅表性炎、慢性萎缩性胃炎伴高级别上皮内瘤变(CAG和H-IN)、胃癌组织中的阳性率分别为27%、49%、67%,过表达率分别为3%、37%、58%,细胞核内阳性过表达率分别为0%、14%、55%。结论HSP70在胃癌、CAG和H-IN中过度表达,可能在其致病过程中起着重要的作用,进一步研究其分子机制将为胃癌的防治提供理论依据。

庆大霉素对人肾小管上皮细胞系(HK-2)热休克蛋白(HSP)70表达的影响

目的观察了庆大霉素在体外对肾小管上皮细胞内HSP70表达的影响。方法将庆大霉素(100mg·L-1)作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),用MTT法检测庆大霉素对HK-2细胞增殖活力的影响,应用免疫细胞化学和Westernblot法观察了HSP70蛋白表达的改变,采用RT-PCR法检测HSP70mRNA表达的变化。结果庆大霉素在作用HK-2细胞24、48、72h后,MTT吸光度值为0·166±0·02、0·181±0·009、0·237±0·016,均低于对照组0·187±0·011、0·32±0·016、0·515±0·035(P<0·01);HSP70蛋白阳性表达率(%)分别为69±17、86±21、89±25,均高于对照组6±3、4±3、7±2(P<0·01);还可增加HSP70蛋白和mRNA表达(P<0·01)。结论庆大霉素在降低人肾小管上皮细胞系细胞增殖活力的同时,增加HSP70的表达。