幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB转化烟草的研究

幽门螺杆菌被世界卫生组织认定为一类致癌因子,其热休克蛋白(HSP)具有较强的免疫原性,存在着发展为疫苗成分的可能性。四川省农科院生物技术核技术研究所构建了幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB植物表达载体pYHWHRI并转化进入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,EHA105)。本文采用农杆菌介导的叶盘法对烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片进行遗传转化。在含有卡那霉素(Kan)的MS筛选分化培养基上筛选,获抗性烟草植株。经PCR分子检测,其中6株已成功导入HspB基因。

山羊小热休克蛋白Hspb10基因cDNA克隆及序列分析

通过RT-PCR和RACE方法克隆了山羊Hspb10基因cDNA序列并进行了序列分析。结果表明:山羊Hspb10 cDNA全长1 056 bp,编码区全长780 bp,共编码259个氨基酸,提交至GenBank数据库中,收录号为JX067553。用Clustal W方法比对不同物种氨基酸序列同源性,山羊Hspb10与牛的同源性最高,核苷酸和氨基酸序列相似性分别为93.4%和96.5%;编码氨基酸序列BLAST比对结果也表明,哺乳动物Hspb10氨基酸序列极为保守,与禽类差异较大。获得山羊Hspb10 cDNA序列,可以为分子水平上研究山羊Hspb10的生物学功能奠定基础。

中国荷斯坦牛HSPB8基因与热应激反应性状相关性研究

为筛选中国荷斯坦牛热应激耐受力相关遗传标记,本研究从细胞水平探究了HSPB8基因的表达变化及其多态与热应激反应性状的相关性。奶牛外周血单核细胞和牛肾细胞经42℃热处理后,HSPB8基因的表达水平极显著上调;采用DNA混池测序在1 665头中国荷斯坦牛中筛查到HSPB8基因的2个SNPs,通过竞争性等位基因特异性PCR对这2个位点进行分型,与3个热应激反应性状(直肠温度、呼吸评分和流涎指数)的估计育种值(EBVs)进行关联分析,并对2个位点的连锁不平衡情况进行分析。结果显示:位于内含子2的位点g.58406728G>A与流涎指数显著相关,其中AA型和AG型个体的EBVs显著低于GG型;而位于3’UTR区的位点g.58406042A>G则与直肠温度显著相关,AA型个体的EBVs极显著低于GG型。此外,2个位点具有较紧密的连锁关系,选取优势单倍型组合(H1H1、H1H2、H2H2)与各性状EBVs进行关联分析,3种单倍型组合与各性状EBVs均无显著相关。本研究证明了奶牛HSPB8基因的表达受热应激诱导,g.58406728G>A和g.58406042A>G位点可作为重要的遗传标记用于中国荷斯坦牛耐热性能的选育。

鸡HSPB1基因多态性及其低氧表达差异分析

为研究热休克蛋白B1(HSPB1)与藏鸡胚胎低氧适应性的关系,试验对藏鸡和茶花鸡在常氧(O2,21%)和低氧(O2,13%)孵化条件下胚胎尿囊绒毛膜(CAM)和心脏组织HSPB1mRNA表达进行检测以及对HSPB1启动子区活性位点进行筛选验证。结果显示:在鸡胚孵化期第11~16天藏鸡CAM组织中HSPB1基因在低氧环境下的表达显著高于茶花鸡(P<0.05),第14~16天藏鸡心脏组织中HSPB1基因在低氧环境下的表达显著高于茶花鸡(P<0.05)。筛选到位于HSPB1启动子区-593bp处的突变位点,且藏鸡优势基因型TT低氧时转录活性显著高于茶花鸡优势基因型AA(P<0.05)。研究提示HSPB1启动子区含有调控其低氧差异表达的活性位点,且相较于茶花鸡,低氧下藏鸡胚胎尿囊绒毛膜组织和心脏组织HSPB1mRNA的高表达,维持了低氧条件下CAM的血管生成平衡和心脏的正常功能,有利于藏鸡胚胎适应低氧环境。

HSPB1基因对脂多糖诱导的鸡巨噬细胞炎症反应的调控机制

为了探究热休克因子结合蛋白1(heat shock factor binding protein 1,HSPB1)基因对脂多糖(LPS)诱导的鸡巨噬细胞(HD11细胞)炎症反应的调控机制,试验以不同浓度的LPS刺激HD11细胞不同时间,构建HD11细胞炎症模型,利用HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1瞬时转染HD11细胞后再用最佳浓度的LPS进行刺激,并以仅转染pcDNA3.1和pcDNA3.1-HSPB1的HD11细胞为对照,采用实时荧光定量PCR方法检测转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1后对白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和α干扰素(IFN-α)基因表达的影响。结果表明:在LPS浓度为1μg/mL、刺激时间为9 h时炎症因子IL-1β基因相对表达量极显著升高(P<0.01),成功构建出HD11细胞炎症模型;与转染pcDNA3.1质粒相比,转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1后能极显著下调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01);受LPS刺激且仅转染pcDNA3.1质粒后,能极显著上调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01),诱发细胞的炎症反应;而与受LPS刺激且仅转染pcDNA3.1质粒相比,转染HSPB1基因过表达质粒pcDNA3.1-HSPB1的HD11细胞受LPS刺激后能极显著下调IL-6、IL-1β和IFN-α基因的相对表达量(P<0.01),降低LPS刺激的炎症反应。说明HSPB1基因具有抗炎作用,与LPS联用有颉颃作用,能抑制由LPS刺激的HD11细胞炎性因子的表达水平,从而缓解细胞炎症反应。

HSPB8基因变异导致远端型遗传性运动神经病2A型一家系

目的分析1个远端型遗传性运动神经病(distal hereditary motor neuropathy,dHMN)家系临床特征和基因变异特点。方法收集该家系先证者及其他成员的临床资料,对先证者进行神经电生理检查、肌肉活检病理检查和全外显子测序检查。结果该家系主要表现为远端型肌无力,先证者电生理提示远端型运动神经病,不伴感觉神经受累,肌肉病理提示神经源性肌萎缩,基因检测发现HSPB8基因第2外显子存在c.421A>G(p.K141E)杂合变异,为该基因的热点突变。结论HSPB8基因变异相关dHMN2A在国内尚未见报道,p.K141E为其致病性变异,本研究结果丰富了国内dHMN突变谱系。