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HspX protein as a candidate vaccine against Mycobacterium tuberculosis: an overview 被引量:1
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作者 Arshid Yousefi-Avarvand Mohsen Tafaghodi +1 位作者 Saman Soleimanpour Farzad Khademi 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2018年第4期293-296,共4页
BACKGROUND: Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This disease with two million deaths per year has the highest mortality rate among bacterial infections... BACKGROUND: Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). This disease with two million deaths per year has the highest mortality rate among bacterial infections. The only available vaccine against TB is BCG vaccine. BCG is an effective vaccine against TB in childhood, however, due to some limitations, has not proper efficiency in adults. Also, BCG cannot produce an adequately protective response against reactivation of latent infections. OBJECTIVE: In the present study we will review the most recent findings about contribution of HspX protein in the vaccines against tuberculosis. METHODS: Therefore, many attempts have been made to improve BCG or to find its replacement. Most of the subunit vaccines for TB in various phases of clinical trials were constructed as prophylactic vaccines using Mtb proteins expressed in the replicating stage. These vaccines might prevent active TB but not reactivation of latent tuberculosis infection (LTBI). A literature search was performed on various online databases (PubMed, Scopus, and Google Scholar) regarding the roles of HspX protein in tuberculosis vaccines. RESULTS: Ideal subunit post-exposure vaccines should target all forms of TB infection, including active symptomatic and dormant (latent) asymptomatic forms. Among these subunit vaccines, HspX is the most important latent phase antigen of M. tuberculosis with a strong immunological response. There are many studies that have evaluated the immunogenicity of this protein to improve TB vaccine. CONCLUSION: According to the studies, HspX protein is a good candidate for development of subunit vaccines against TB infection. 展开更多
关键词 hspx protein Mycobacterium tuberculosis VACCINE
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不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较
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作者 杨瑜 王楠 +5 位作者 李华 吴玲 王琪 谢贝 刘志辉 孟繁荣 《新医学》 CAS 2023年第5期340-343,共4页
目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼... 目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 hspx基因 耐药性
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结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用 被引量:4
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作者 陈磊 徐苗 +7 位作者 都伟欣 陈保文 王志玉 王雅君 董娜 苏城 沈小兵 王国治 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期403-409,共7页
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化B... 目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定。纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况。结果成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 重组蛋白质 佐剂 AG85B hspx
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结核分枝杆菌HspX蛋白的原核高效可溶性表达及产物抗原性分析 被引量:1
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作者 李邦印 孙卫国 +4 位作者 王仲元 胡永亮 苏锐 李国利 程小星 《生物技术通讯》 CAS 2012年第1期38-41,共4页
目的:利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌HspX蛋白并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增HspX核酸序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3... 目的:利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌HspX蛋白并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增HspX核酸序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western印迹初步评价HspX的抗原性。结果:经IPTG诱导,HspX蛋白在原核系统内获得了可溶性表达,经镍柱亲和层析获得了纯度达95%以上的重组蛋白。Western印迹结果证明重组HspX蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应。结论:重组蛋白HspX在大肠杆菌中以可溶性形式表达,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 hspx蛋白 可溶性表达 抗原性分析
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结核分枝杆菌抗原Ag85B-Mpt64 190-198-HspX融合蛋白免疫原性的初步观察 被引量:2
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作者 李青 姜雯雯 +6 位作者 雒彧 于红娟 宋楠楠 王秉翔 刘昕 张颖 祝秉东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期103-107,共5页
目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190~198位的氨基酸多肽(CD8^+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX(AMH),并对其... 目的为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190~198位的氨基酸多肽(CD8^+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64 190-198-HspX(AMH),并对其免疫原性进行研究。方法PCR分别扩增Ag85B、Mpt64 190-198-HspX基因,并依次插入pET-28a质粒中,在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸(DDA+BCG—PSN)混合构建亚单位疫苗,分别于1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠3次,最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应。结果该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达,经Ni—NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原(PPD、Ag85B、Mpt64 190-198和HspX)的特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性。结论融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 融合蛋白 AG85B hspx
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结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的制备及其血清学诊断价值 被引量:1
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作者 宋广忠 石君帆 +4 位作者 李召东 杨明瑾 漏磊君 李涛 王秀芝 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2012年第4期260-263,共4页
目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基.陆D一硫代吡喃半乳糖苷(帆)诱导rPH融合蛋白表达,并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋... 目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX(rPH)融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基.陆D一硫代吡喃半乳糖苷(帆)诱导rPH融合蛋白表达,并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋白的免疫反应性。最后用ELISA法检测194份血清抗体样本,其中来源于肺结核患者94份,非结核肺部疾病患者52份,健康对照者48份。结果rPH融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性非包涵体形式表达,相对分子质量为51000。经亲和层析后得到了浓度为0.62ng/mL,纯度达92%的融合蛋白。Western印迹实验证实纯化后融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫应答。重组蛋白rPH血清检测的灵敏度为77.6%(73/94),特异性为92.0%(92/100)。结论成功表达和纯化了rPH融合蛋白,其用于结核病血清学诊断具有较好的灵敏度和较高的特异性,是ELISA的可靠抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rPstS1-hspx融合蛋白 血清学诊断
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