福氏2a志贺氏菌2457T HtpG蛋白诱导小鼠炎性反应

【目的】构建福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株和回复株,对HtpG蛋白的功能进行初步研究。【方法】采用λ-Red重组系统对htpG基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌2457T株的htpG缺失突变株,并利用低拷贝质粒构建了htpG突变株的回复株。在此基础上,对野生株、突变株和回复株的生长曲线、生化反应、豚鼠角膜试验进行了比较分析,并考察了野生株、突变株和回复株腹腔注射引起小鼠炎症反应的强弱。【结果】HtpG蛋白功能与福氏志贺氏菌的基本生化代谢无关,也不影响细菌穿透上皮细胞的能力,但腹腔注射后能够引起小鼠强烈的炎症反应。【结论】HtpG蛋白功能可能与细菌的免疫致病性相关。

结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定

目的克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性。方法采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒。重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通过镍柱纯化。Western blot鉴定表达蛋白,并使用HtpG重组蛋白经ELISA法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。结果成功构建了pET22b-HtpG重组质粒;在大肠埃希菌中表达出分子质量约73kDa的重组蛋白。Western blot鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ELISA法检测肺结核患者血清中存在特异性抗HtpG抗体。结论在大肠埃希菌内成功表达HtpG重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。