湖羊(Ovis aries)m^(6)A甲基转移酶基因METTL3的克隆及组织表达分析

本研究对湖羊(Ovis aries)m^(6)A甲基转移酶基因METTL3进行克隆和生物信息学分析,以探究其分子特征和时空表达变化规律。以湖羊肌肉组织cDNA为模板,通过克隆获得METTL3基因编码序列(coding sequence,CDS)区,并使用生物信息学软件进行相似性比对、系统进化树构建和生物信息学分析;利用实时定量PCR(real time quantitative PCR)检测METTL3 mRNA在湖羊9个不同组织中的表达水平。结果显示,湖羊METTL3基因完整CDS区全长1739 bp,编码579个氨基酸。湖羊METTL3基因与山羊(Capra hircus)的亲缘关系最近。METTL3蛋白等电点为6.05,半衰期为30 h,结构不稳定,属于亲水性蛋白。METTL3具有一个MT-A70保守结构域,无信号肽和跨膜结构域。预测共有59个潜在磷酸化位点。METTL3蛋白高级结构由无规则卷曲(50.09%)、α-螺旋(33.85%)、延伸链(12.44%)和β-转角(3.62%)组成,且主要与METTL14、WTAP等参与m^(6)A甲基化过程的相关蛋白紧密联系。实时定量PCR结果显示,METTL3 mRNA在湖羊9个组织中均有表达,与背最长肌相比,肾脏、脾脏和皮下脂肪中的表达量更高(P<0.01)。本研究成功克隆获得METTL3基因CDS区全长序列,并初步研究了其在湖羊各个组织中的表达变化规律,为探索METTL3基因在哺乳动物生长发育过程中发挥的作用提供理论依据。

用湖羊胎替代藏羊胎酶解制备羊胎素工艺研究

目的对以湖羊胎和传统羊胎素生产原料—藏绵羊胎为原料制备的羊胎素进行比较,提供湖羊胎替代藏羊胎作为羊胎素生产原料的科学依据。方法以产于杭嘉湖地区的湖羊胎为原料,以传统羊胎素生产原料—藏羊胎为对照,进行制备羊胎素的酶解正交试验。结果在设定料液比1:10、酶解时间4h的前提下,湖羊胎酶解的最佳条件为:温度45℃、酶浓度40U/g、pH值8.0。在此最佳条件下,湖羊与藏羊胎的水解度分别为35.36%和40.47%,两种羊胎素冻干粉的产率分别为17.56%、19.44%,两者的大分子均得到有效降解,氨基酸组成和含量无明显差异。结论湖羊胎是一种可以替代藏羊胎的羊胎素生产原料。

湖羊高繁殖力候选基因ESR的研究

利用PCR-SSCP技术对高繁殖力绵羊品种湖羊雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因第一外显子的部分序列进行单核苷酸多态性研究。结果表明,湖羊ESR基因中存在3种基因型AA,BB,AB,且A等位基因频率为0.554,B等位基因频率为0.446。经测序,BB型与AA型相比在外显子1第363位发生1处C→G的碱基突变。据产羔数统计,AB基因型和BB基因型的湖羊产羔数分别比AA基因型多0.98只(P<0.01)、1.47只(P<0.01)。说明ESR基因可能是控制湖羊多羔性能的一个主效基因或与之存在紧密遗传连锁的一个标记。