Hu蛋白作为豚鼠小肠肌间丛神经元标志物的研究

比较 5种神经元标志物在小肠肌间丛神经元中的特异性。应用新发现的神经元标志物Hu蛋白 ,对豚鼠肠神经系统 (ENS)的小肠肌间丛神经元进行免疫荧光染色研究 ,并与其他神经元标志物MAP 2 ,PGP 9 5 ,NSE ,TUJ 1进行比较。结果表明 :Hu蛋白主要分布于神经元胞浆中 ,神经元核也有较浅的染色 ,尤其在whole mount上 ,每个神经元都清晰可见。MAP 2作为神经元标志物 ,也能显示完好的细胞形态 ,但由于粗大神经纤维的强染色 ,使神经元计数不准确。PGP 9 5 ,NSE和TUJ 1对体外培养的小肠肌间丛神经元染色良好 ,但在whole mount上 ,神经纤维强染色 ,无法计数分析。结果提示在豚鼠肠神经系统小肠肌间丛神经元的计数研究中 ,Hu蛋白是理想的神经元标志物。

抗HU蛋白抗体抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成实验

目的探讨靶向金黄色葡萄球菌DNA结合蛋白HU的多克隆抗体是否能够抑制生物膜的形成。方法以金黄色葡萄球菌NCTC-8325基因组为模板,PCR扩增HU基因,构建重组表达载体p ET-28a-HU,亚克隆至大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过镍亲和树脂纯化获得HU蛋白。利用多克隆抗体制备技术获得兔源抗HU血清,利用Protein A树脂纯化多克隆抗体,利用ELISA和Western blot实验检测抗体亲和力,并通过金黄色葡萄球菌生物膜形成实验验证抗体活性。结果重组蛋白HU以可溶形式表达,成功制备了高滴度(>1∶100 000)的兔源抗HU多克隆抗体。生物膜形成后结晶紫染色数据显示抗HU多克隆抗体浓度在75μg/ml和0.6μg/ml时OD595读值分别为0.052和1.220,Confocal实验表明抗HU多克隆抗体能够明显抑制金黄色葡萄球菌生物的形成,且呈浓度依赖性。结论靶向金黄色葡萄球菌HU蛋白的多克隆抗体能够抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,这可能成为一种新的治疗金黄色葡萄球菌感染策略。