huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究

利用QSepharoseH .P .离子交换柱层析在 8mol L尿素变性条件下对huGM CSF(9 12 7) IL 6 (2 9 184)融合蛋白进行初步纯化 ,然后再利用SephacrylS 2 0 0分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白 ,其纯度达到 95 %以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行QSepharoseH .P .离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题 ,获得了较好的复性效果 ,复性率达到 80 %以上。使用该纯化方案 ,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程 。

huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白基因的构建及表达

目的构建及表达具有huGM-CSF和huIL-6双重生物学活性的huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白分子。方法应用PCR技术对huGM-CSF和huIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成pBV220-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)表达质粒,表达质粒导入E.coliDH5α中诱导表达。通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用huGM-CSF依赖细胞株TF1和huIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果pUC18-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coliDH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的25%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。融合蛋白具有huGM-CSF和huIL-6的双重生物学活性,其促进huGM-CSF依赖细胞株TF-1和huIL-6依赖细胞株B9增殖的比活性分别为1.08×108U/mg和1.95×107U/mg。结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白。

HuGM-CSF的生物学功能及临床应用

人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (HuGM CSF)是一种能促进骨髓粒系、单核细胞系、巨噬细胞系分化和成熟 ,并增强其成熟细胞功能的多效应细胞因子。DNA重组技术的发展 ,使得利用基因工程方法大量生产细胞因子成为可能。近年来 ,随着对GM CSF研究的不断深入 ,认识也日趋成熟 ,临床应用则非常广泛。本文将就HuGM CSF的生物学功能及其在临床方面的应用做以下综述。