双氢青蒿素诱导外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡及其可能的机制

目的：考察双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）诱导的外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡,并进一步研究其作用机制。方法：CCK-8法检测1～30μg/ml DHA对Hut-78细胞增殖的影响,运用Hochest 33258染色技术在共聚集显微镜下观察DHA对Hut-78细胞核形态的影响,流式细胞术检测DHA对Hut-78细胞凋亡的影响,10 mmol/L的活性氧（reactive oxygen species,ROS）清除剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理细胞1 h,观察ROS在DHA引起的细胞线粒体膜电位变化中的作用,Western blotting检测在Hut-78细胞凋亡过程中ROS对DHA引起的细胞色素C释放的影响。结果：DHA呈浓度依赖性抑制Hut-78细胞的增殖,并引起细胞核固缩,形成凋亡小体。5、10、20μg/ml DHA引起的细胞凋亡率分别为（25.1±2.8）%、（43.6±3.1）%、（68.9±2.6）%,与对照组相比差异有统计学意义（均P〈0.01）。20μg/ml DHA处理导致Hut-78细胞线粒体膜电位下降（59.4±2.6）%,而经ROS抑制剂NAC预处理之后,线粒体膜电位下降（38.4±2.1）%。DHA能够引起线粒体中细胞色素C的释放,而NAC的预处理能够明显地抑制这一过程,统计结果进一步证明这一点。结论：DHA能够抑制外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与DHA促进ROS依赖的细胞色素C释放有关。

人皮肤T细胞淋巴瘤系Hut-78细胞FHIT基因缺失的研究

目的 探讨抑癌基因FHIT在Hut 78细胞中的缺失情况。方法 用巢式RT PCR方法研究FHIT的缺失情况。结果 Hut 78细胞中FHIT基因mRNA比正常缩短 ,外显子 5丢失。结论 FHIT基因外显子 5的缺失可能是皮肤T细胞淋巴瘤FHIT基因失活的主要方式 。

菝葜提取物对Hut-78细胞Bcl-2基因转录水平的影响

目的探讨菝葜提取物对Hut-78细胞Bcl-2基因转录水平的影响。方法利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定给药后各组的吸光度值,计算各组的Bcl-2/GAPDH值,从而分析Bcl-2基因转录水平的变化。结果菝葜提取物对Bcl-2基因的转录水平具有下调作用,药物浓度在8μg·mL-1时的效果最为明显。结论该菝葜提取物可降低Hut-78细胞的Bcl-2基因的转录。

硼替佐米与吡喃阿霉素联合对T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨硼替佐米（BTZ）与吡喃阿霉素（THP）联合对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 不同浓度的BTZ、THP单药或两药联合作用于Hut-78细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否存在协同效应,在此基础上应用流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡情况,利用Western blot法检测细胞周期抑制蛋白P21的变化.结果 BTZ与THP单药对Hut-78细胞增殖具有显著的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,两药联合时,BTZ序贯THP组的细胞增殖抑制率显著高于BTZ与THP同时组及THP序贯BTZ组（P值均＜0.01）,当细胞增殖抑制率＞50%时,THP序贯BTZ呈拮抗效应,而BTZ与THP同时及BTZ序贯THP则表现为协同效应,随着增殖抑制作用的增加,仅BTZ序贯THP的协同作用更为显著.BTZ与THP单药能有效诱导Hut-78细胞凋亡,呈剂量依赖性,且BTZ序贯THP的细胞凋亡诱导作用较单药显著增强.BTZ单药可使细胞明显阻滞于G2/M期,上调P21蛋白的表达水平,序贯应用THP可显著增强BTZ对细胞周期的阻滞作用.结论 BTZ序贯THP可协同抑制Hut-78细胞增殖并诱导其凋亡,协同机制可能与序贯应用THP增强BTZ介导的P21表达上调及G2/M期细胞阻滞有关,提示BTZ与THP联合可能成为治疗T细胞非霍奇金淋巴瘤的新选择.

白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞增殖和凋亡影响观察

目的:研究白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphomas,CTCL)Hut-78细胞株体外增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度的白藜芦醇(5、10和20μmol/L)作用于人皮肤CTCL Hut-78细胞,24和48h后MTT检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;TUNEL末端标记法和AnnexinⅤ-FITC双标记流式法检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响。结果:经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,细胞A值分别为1.202±0.094、0.568±0.019和0.535±0.033,与0μmol/L A值(1.272±0.107)比较,差异有统计学意义,P<0.01。各浓度作用48h后,细胞A值分别为0.604±0.095、0.314±0.042和0.260±0.055,与0μmol/L A值(0.781±0.020)比较,差异有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度A值比较,差异均有统计学意义,P<0.01。随着时间和浓度的增加Hut-78细胞生长均受到不同程度的抑制,呈明显的浓度和时间依赖性。经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,HUT-78细胞抑制率分别为(5.28±2.64)%、(53.52±10.86)%和(56.13±10.79)%,与0μmol/L抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;HUT-78细胞凋亡率分别为92.35%、96.39%和98.56%,与0μmol/L凋亡率(55.7%)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;各浓度作用48h后,HUT-78细胞抑制率分别为(22.85±10.98)%、(59.77±5.44)%和(66.52±7.80)%,与0μmol/L细胞抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度细胞抑制率比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:达到5μmol/L的白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞产生明显的抑制增殖作用,白藜芦醇主要通过诱导HUT-78细胞凋亡,其中主要是早期凋亡抑制其增殖。

CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HuT-78细胞PD-1分子对其增殖能力的影响

利用CRISPR/Cas9技术成功敲除人T细胞系HuT-78细胞中编码PD-1分子的基因PDCD1,并比较敲除了PDCD1基因的及对照组的HuT-78细胞增殖能力的差异。实验结果显示敲除PDCD1基因的HuT-78细胞的增殖能力不受PD-L1的影响,为将此技术应用于肿瘤免疫治疗提供了实验依据。