华蟾素调控AKT介导的上皮间质转化抑制肝细胞癌肺转移裸鼠模型的作用机制

目的研究华蟾素通过调控肝细胞癌(HCC)上皮间质转化(EMT)抑制HCC转移的作用和机制。方法将36只6周龄雄性BALB/c裸鼠尾静脉注射MHCC97H细胞建立肝癌肺转移瘤模型,随机分为华蟾素高、低剂量组和对照组。建模当日起分别腹腔注射华蟾素120μL/kg、60μL/kg或生理盐水,每周2次。8周后取肺组织行HE染色检测肝癌肺转移率。MHCC97H细胞用华蟾素高、低剂量(2.5μL/m L、5μL/m L)干预,通过划痕实验、RT-PCR以及Western Blot检测细胞迁移能力和EMT相关分子的表达。用CoCl2孵育模拟低氧环境诱导MHCC97H细胞,同时加入高、低剂量华蟾素干预,通过划痕实验和Western Blot检测华蟾素对低氧诱导的细胞迁移能力和EMT的影响。使用转录组学分析华蟾素对MHCC97H细胞的效应机制。用Western Blot检验华蟾素干预对MHCC97H细胞的蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(P-AKT)表达水平的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用成组t检验。结果华蟾素干预组裸鼠较对照组肝癌肺转移率下降。与对照组相比,华蟾素干预使MHCC97H细胞划痕愈合率减小、上皮型分子表达上调(t=2.860,P<0.05),并使EMT转录因子和基质型分子下调(t值分别为3.545、2.022、2.852、2.341,P值均<0.05)。低氧诱导上调MHCC97H细胞划痕愈合率和基质型分子、EMT转录因子表达水平(P值均<0.05),华蟾素干预逆转EMT变化并抑制划痕愈合(P值均<0.05)。肝癌细胞转录组学分析显示,华蟾素组与对照组存在显著的基因差异,华蟾素主要影响了肿瘤、代谢、免疫和信号传导相关基因表达,其中AKT信号转导通路中的差异基因数量最多。进一步检测发现华蟾素干预可下调HCC细胞AKT、P-AKT和P-AKT/AKT的水平(t值分别为2.434、3.401、2.258,P值均<0.05)。结论华蟾素可抑制肝癌转移,尤其对于低氧环境诱导的肝癌转移具有显著抑制作用,调控AKT信号转导通路介导的HCC细胞EMT可能是其部分作用机制。

中药联合长春瑞滨治疗31例PS评分2.0的ⅢB/Ⅳ期非小细胞肺癌

目的观察消积饮、华蟾素联合长春瑞滨治疗体力状况(PS)评分2.0的ⅢB/Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效和毒副反应。方法对31例患者给予消积饮、华蟾素和长春瑞滨治疗,21天为1个周期,连续治疗4个周期。观察治疗前后瘤体变化、PS评分变化、中位生存时间、1年生存率、疾病无进展时间以及毒副反应。结果治疗后的客观有效率(CR+PR)为12.9%,稳定率(CR+PR+NC)为83.8%;中位生存期(MST)为6.0个月,1年生存率为22.5%,疾病无进展时间(TTP)为4.0个月。主要毒副反应有骨髓抑制,其中Ⅳ度白细胞下降1例(3.2%);2例(6.4%)出现中度贫血;3例(9.6%)轻度周围神经毒性。结论对于PS评分2.0的ⅢB/Ⅳ期非小细胞肺癌患者,消积饮、华蟾素联合长春瑞滨的治疗方案与目前文献报道比较,显示出较好的临床疗效,且毒副反应轻,患者易于耐受。

华蟾素对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖及p-PTEN表达的影响

目的观察华蟾素对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白表达的影响。方法将MCF-7、MDA-MB-231细胞按随机数字表法分为对照组、高剂量组、低剂量组。低、高剂量组分别加入0.5、5.0 mg/ml华蟾素注射液l00μl/孔进行干预;对照组加入等体积的RPMI-1640培养液。干预后6、12、24、48、72 h,采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖率,干预后72 h,采用Western blot法检测蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(protein kinase B/mammalian target of rapamycin,AKT/mTOR)通路蛋白及p-PTEN蛋白表达。结果与对照组比较,干预后24、48、72 h,高剂量组MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖率降低(P<0.05);低、高剂量组MCF-7、MDA-MB-231细胞p-AKT[MCF-7:(0.357±0.064)、(0.215±0.056)比(0.924±0.085);MDA-MB-231:(0.310±0.022)、(0.194±0.019)比(0.811±0.089)]、p-mTOR[MCF-7:(0.476±0.039)、(0.217±0.038)比(0.838±0.058);MDA-MB-231:(0.300±0.031)、(0.223±0.025)比(0.896±0.096)]、p-S6[MCF-7:(0.551±0.068)、(0.428±0.041)比(1.254±0.264);MDA-MB-231:(0.281±0.014)、(0.197±0.012)比(0.748±0.022)]、p-PTEN[MCF-7:(0.487±0.170)、(0.184±0.135)比(1.003±0.284);MDA-MB-231:(0.261±0.184)、(0.170±0.105)比(1.014±0.206)]表达降低(P<0.05)。结论华蟾素可抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖,推测可能与其下调AKT/mTOR信号通路上游蛋白p-PTEN蛋白表达有关。