Summary of Professor Tong Xiaolin's clinical experience of applying Rhizoma Coptidis(Huang Lian)

With the advantages of less toxicity and side effects, traditional Chinese medicine(TCM) is showing a bright future with a good clinical practice. Chinese herbal medicine, which usually contains various active ingredients, could provide multiple therapeutic effects. Professor Tong Xiaolin has accumulated abundant experience during many years of clinical practice and applies Rhizoma Coptidis(RC) well with the treatment of diabetes and its complications. Rhizoma coptidis is a classical natural herb which is used frequently by professor Tong Xiaolin. In this review, we summarize Tong Xiaolin's clinical experience of applying Rhizoma Coptidis(Huang Lian) in the treatment of disease from two aspects as well as introducing some traditional Chinese medical theory and clinical experience, with a prospect of guiding clinician to use RC more suitably and reasonably.

黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用

目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37℃,进样量为20μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性)。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00μg·mL-1,精密度和准确度均<2%,加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2~8℃保存1周、-80℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均<2%,检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2799.00μg·mL-1)、小檗碱(2358.03μg·mL-1)、京尼平苷(1793.34μg·mL-1)、巴马汀(945.30μg·mL-1)、黄连碱(192.00μg·mL-1)、黄芩苷(171.00μg·mL-1)。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。

黄连解毒汤加减治疗跟骨骨折术前肿胀的临床研究

目的:观察黄连解毒汤加减治疗跟骨骨折术前肿胀的临床疗效和安全性,并探讨其可能的作用机制。方法:将符合要求的70例SandersⅡ~Ⅳ型跟骨骨折患者随机分为2组,每组35例。2组患者入院后均给予石膏托外固定制动、抬高患肢、静脉滴注甘露醇注射液、皮下注射那屈肝素钙等常规治疗。常规治疗组在此基础上口服地奥司明片,每次0.9 g,每日1次,晚餐后服用,共服用7 d;黄连解毒汤组在常规治疗基础上口服黄连解毒汤加减,早晚各1次,共服用7 d。比较2组患者的患肢肿胀率、疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分、血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、血清白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)水平、中医证候积分及并发症发生情况。结果:①患肢肿胀率。2组患者的患肢肿胀率随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=246.771,P=0.000;F=282.982,P=0.000);治疗前2组患者患肢肿胀率的差异无统计学意义(t=0.596,P=0.553);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的患肢肿胀率均低于常规治疗组(t=2.147,P=0.035;t=2.799,P=0.007)。②疼痛VAS评分。2组患者的疼痛VAS评分随时间变化均呈逐渐降低的趋势(F=262.877,P=0.000;F=462.471,P=0.000);治疗前2组患者疼痛VAS评分的差异无统计学意义(t=0.432,P=0.667);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的疼痛VAS评分均低于常规治疗组(t=3.200,P=0.002;t=8.735,P=0.000)。③血清CRP水平。2组患者的血清CRP水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=1355.001,P=0.000;F=2271.167,P=0.000);治疗前2组患者血清CRP水平的差异无统计学意义(t=-0.470,P=0.570);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清CRP水平均低于常规治疗组(t=4.575,P=0.000;t=25.065,P=0.000)。④血清TNF-α水平。2组患者的血清TNF-α水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=366.536,P=0.000;F=811.863,P=0.000);治疗前2组患者血清TNF-α水平的差异无统计学意义(t=-1.019,P=0.312);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清TNF-α水平均低于常规治疗组(t=3.222,P=0.002;t=17.223,P=0.000)。⑤血清IL-6水平。2组患者的血清IL-6水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=895.505,P=0.000;F=1184.801,P=0.000);治疗前2组患者血清IL-6水平的差异无统计学意义(t=1.606,P=0.113);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清IL-6水平均低于常规治疗组(t=4.432,P=0.000;t=9.249,P=0.000)。⑥中医证候积分。治疗前2组患者的中医证候积分比较,差异无统计学意义(t=-0.595,P=0.554);治疗第7天,2组患者的中医证候积分均较治疗前减小(t=24.128,P=0.000;t=40.200,P=0.000);治疗第7天黄连解毒汤组的中医证候积分低于常规治疗组(t=9.272,P=0.000)。⑦并发症。2组各有2例患者发生下肢深静脉血栓,应用那屈肝素钙联合华法林治疗1周后血栓变小或吸收;黄连解毒汤组2例发生胃肠道不适、常规治疗组2例出现皮疹,均未予药物治疗,症状自行消失。2组患者并发症发生率的差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000)。结论:黄连解毒汤加减可有效减轻跟骨骨折患者的术前肿胀和疼痛,而且具有较高的安全性,其作用机制可能与其降低患者血清炎症因子水平有关。

黄连温胆汤联合靳三针治疗胆汁反流性胃炎对胃肠激素及血清环氧化酶 核因子-κB的影响

目的探讨黄连温胆汤联合靳三针治疗胆汁反流性胃炎对胃肠激素及血清环氧化酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)的影响。方法共纳入2022年6月至2023年6月就诊于河南省三门峡市中医院的112例胆汁反流性胃炎患者,按随机数字表法分为对照组(56例,采用铝碳酸镁咀嚼片治疗)和研究组(56例,在对照组治疗方案基础上采用黄连温胆汤联合靳三针治疗),2组患者均进行为期1个月的治疗。比较2组患者治疗前后中医证候积分,胃肠激素指标及血清COX-2、NF-κB的变化,随访2组患者半年,比较复发情况。结果治疗后2组患者胃脘痛、嗳气等中医证候积分与治疗前比较均下降,研究组较对照组低(均P<0.05);治疗后2组患者胃肠激素相关指标水平与治疗前相比均上升,研究组较对照组高(均P<0.05);治疗后2组患者血清COX-2、NF-κB较治疗前下降,研究组较对照组低(均P<0.05);对照组患者有2例复发,复发率为3.6%,研究组患者未见复发,2组复发率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胆汁反流性胃炎患者应用黄连温胆汤联合靳三针治疗,可有效缓解临床症状,对胃肠激素起到调节作用,并可减轻胃内炎症反应。

双黄连注射剂中1,5-二咖啡酰奎宁酸致敏家兔后血清中特异性抗体的测定

目的检测双黄连注射剂中1,5-二咖啡酰奎宁酸致敏家兔后血清中特异性抗体效价。方法双黄连注射剂中疑似小分子半抗原物质1,5-二咖啡酰奎宁酸与正常家兔血清体外孵育制备完全抗原,免疫家兔获得特异性抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清的抗体效价。间接竞争ELISA测定血清特异性并绘制抑制曲线。采用兔免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒检测各组家兔抗血清中IgE抗体的含量。结果1,5-二咖啡酰奎宁酸浓度分别为0.25 mg/ml、0.50 mg/ml、1.00 mg/ml、2.00 mg/ml、4.00 mg/ml时效价[吸光度(A值)]对应的分别为0.364±0.020、0.334±0.010、0.322±0.020、0.332±0.010、0.298±0.020,均高于阴性对照组A值(0.095±0.010)。得到回归方程I=0.1952 lgC+0.2734,R2=0.9958,半数抑制浓度(IC50)=33.494 mg/ml。家兔体内产生了外源性IgE型抗体。结论在本实验条件下双黄连注射剂中疑似半抗原物质1,5-二咖啡酰奎宁酸具有致敏性。

液质联用技术在医药院校药物分析专业实验教学中的应用

液相色谱-质谱联用技术是一门综合性分析技术,在样品分离及结构鉴定中发挥着重要的作用。本文以双黄连口服液主要药效物质分析实验的教学为例,把液质联用技术引入到药物分析专业的本科实验教学中,介绍了方法建立、色谱分离、质谱鉴定和数据分析完整的实验流程,可以增强该专业本科生对前沿研究技术的了解,开拓学生的视野,对于培养该专业学生的科研创新思维、实践能力和问题分析能力起着非常重要的作用,也为培养更多高水平技术人才做准备。

伤寒黄疸方“麻黄连轺赤小豆汤”证候分析、方中连轺考证及对连翘药用价值和研究的启示

麻黄连轺赤小豆汤是伤寒黄疸三方之一,但未受重视,方中连轺来源不明,地位作用难辨。本文首先对方中麻黄功用和全方证候进行剖析,确定了本方主要用来“清利湿热”以退黄;在此基础上考证“连轺”为“连翘之根”,而非“翘根”,今人以连翘代连轺使用效果相当;接着分析了方中“连翘”的重要地位,并根据连翘作用广泛但缺乏主治病证的特点对连翘药用、研究开发指出了一些有价值的方向,为深入开展连翘理论和实践研究提供了借鉴启示。

HPLC双波长法同时测定黄连上清片中栀子苷和盐酸小檗碱的含量

研究开发同时测定黄连上清片中栀子苷和盐酸小檗碱两种有效成分的定量方法。采用ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相:A泵为乙腈,B泵为0.2%磷酸,切换波长检测:0~10分钟检测栀子苷(λ=238nm)、10~50分钟检测盐酸小檗碱(λ=345nm),流速为1.0ml/min,梯度洗脱,柱温为30℃,进样10μL。可使各组分有效分离,栀子苷的回归方程:y=43651x-1027(r=0.9996)、加样回收率的平均值为98.95%(RSD=1.5%);盐酸小檗碱的回归方程:y=27519x-2836(r=0.9995)、加样回收率的平均值为99.07%(RSD=1.7%)。结果说明此法快速、专属性高,可用于对黄连上清片的质量控制。

黄连油纱条换药治疗热毒炽盛型肛痈术后创面愈合的临床效果

目的:分析黄连油纱条换药治疗热毒炽盛型肛痈术后创面愈合的临床疗效。方法:选取50例热毒炽盛型肛痈患者,随机数字表法分为试验组(25例)和对照组(25例),两组均采用椎管内麻醉下低位肛周脓肿切开引流的术式,手术当日至术后4日每天静脉滴注同种抗生素以抗感染,并使用止血药静脉滴注以预防创面出血,术后第2日起每日排出粪便后及换药前使用专科熏洗2号方进行肛门局部熏洗。此外,对照组25例使用凡士林纱条填塞创面换药,试验组25例采用黄连油纱条填塞创面换药。记录两组患者第7、14、21日的创面面积和创面愈合率,记录两组患者第3、7、10日的创面分泌物、疼痛情况,记录创面愈合时间和最终治疗效果。结果:两组总有效率均为100%(25/25),提示两组患者均得到治愈,术后第3、7、10日比较,两组患者术后创面分泌物、疼痛情况差异存在统计学意义(P <0.05)。两组患者术后第7、14、21日的创面面积和创面愈合率比较,差异存在统计学意义(P <0.05)。两组的创面最终愈合时间比较,差异存在统计学意义(P <0.05)。结论 :黄连油纱条换药治疗热毒炽盛型肛痈术后创面的疗效更好,对于缩小术后创面面积,减少术后创面分泌物,缩短创面愈合时间,提高术后创面愈合率,减轻术后创面疼痛,以及促进术后创面愈合等具有积极作用,且安全可靠,宜推广运用。

黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞自噬相关基因表达的影响

目的:考察黄连解毒汤含药血清对RAW264.7巨噬细胞自噬的影响,初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃干预SD大鼠,制备含药血清;经MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20%的含药血清干预体外培养的巨噬细胞,采用荧光定量PCR方法检测自噬相关基因Beclin1和m TOR的mRNA表达水平;Western blot检测Beclin1、p-m TOR蛋白的表达变化。结果:与正常对照组血清相比,黄连解毒汤含药血清干预后诱导了Beclin1 mRNA及蛋白的表达,抑制了m TOR mRNA及p-m TOR蛋白的表达。结论:黄连解毒汤含药血清可诱导RAW264.7巨噬细胞自噬相关基因Beclin1的表达、抑制m TOR的表达,这可能是该方抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。

“双黄连”注射剂与气雾剂的人体生物利用度研究

利用紫外分光光度法,以“双黄连”中两种主要成分黄苓甙,绿原酸为控制指标,测定注射剂与气雾剂的人体血药浓度。求出AUC^(0～6h)Cmax、TP值和绝对生物利用度。并对两种剂型的AUC^(0～6h)、Cmax,Tp作t检验。结果表明,气雾剂的绝对人体生物利用度为89%。双黄连气雾剂和注射剂的AUC^(0～6h),Cmax,Tp无显著性差异。

黄连解毒汤有效部位对实验性脑缺血的保护作用

摘要 目的:观察黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)对实验性脑缺血的保护作用。方法:采用三氯化铁所致大鼠单侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型观察HLJDTAF对局灶性脑缺血的保护作用;采用大鼠双侧颈总动脉结扎(CCAO)模型研究药物对脑毛细血管通透性的影响;采用小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注(CCAORR)模型观察药物对模型断头张口喘气时间、脑指数与脑含水量的影响,结果:HLJDTAF可明显减轻MCAO大鼠神经症状,减少脑梗塞范围(P<0.05,P<0.01);HLJDTAF还能显著降低CCAO大鼠血脑屏障毛细血管通透性及脑组织EB含量(P<0.05,P<0.01);该有效部位还可以延长CCAORR的断头张口喘气时间,降低脑指数,减轻脑水肿(P<0.05,P<0.01)。结论:HLJDTAF具有很好的脑保护作用。

黄连解毒汤对动脉粥样硬化大鼠血sICAM-1和sVCAM-1的影响

目的探讨黄连解毒汤对动脉粥样硬化大鼠血清中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平的影响及其作用机制。方法雄性SD大鼠,随机分成正常对照组、模型对照组、黄连解毒汤低中高3个剂量组及阿托伐他汀组,每组10只。除正常对照组喂普通饲料外,其余喂以高脂饲料,同时定期灌服维生素D3(60万U/次,第2,4,6周)造模8周,从第6周开始每天灌胃给药1次,黄连解毒汤低剂量组2.7g/kg,中剂量组5.3g/kg,高剂量组10.6g/kg,阿托伐他汀钙片组1.8mg/kg,正常对照组灌服等量蒸馏水,连续4周。结果黄连解毒汤中剂量组,高剂量组及阿托伐他汀组均与模型对照组的ICAM-1,VCAM-1表达均比模型对照组低(P<0.05～0.01)。结论黄连解毒汤对动脉粥样硬化起到一定干预作用,其机制可能与抑制炎症反应有关。

黄连素对糖尿病性神经病变大鼠神经传导速度的影响及激素的调节

探讨黄连素对糖尿病性神经病变大鼠神经传导速度的影响及内分泌激素的调节。本文用链脲霉素 (STZ)制备动物模型 ,用电生理方法测定神经传导速度 (NCV) ,用放免法 (RIA)测定胰岛素 (INS)、生长激素 (GH)和生长抑素 (SS)。结果表明 ,该药能降低血糖 (P <0 .0 1) ,改善大鼠神经传导速度 (P <0 .0 5 ) ,升高血清胰岛素 (P <0 .0 1)和生长抑素 (P <0 .0 5 ) ,降低血清生长激素 (P <0 .0 5 )。黄连素治疗糖尿病及其并发症糖尿病性神经病变的机理 ,推测在降低血糖的同时 ,改善与糖尿病相关的多种激素水平可能有一定的关系。

乌头碱中毒及双黄连干预对心肌雷诺定受体表达的影响

目的:研究乌头碱中毒及双黄连注射液干预对心肌雷诺定受体(rynanodine receptor 2,Ry R2)表达的影响,探讨双黄连对抗乌头碱致心律失常毒性的作用机制。方法:将52只SD大鼠随机分成3组:乌头碱组(A组,n=20),双黄连组(B组,n=20)和对照组(C组,n=12)。A,B两组先予乌头碱0.3 mg/kg灌胃,30 min后A组予生理盐水腹腔注射,B组予双黄连100 mg/kg腹腔注射;对照组两次均予生理盐水处理,连续给药10 d。于第1,3,6,10天记录大鼠心电图变化并进行心律失常评分,采用免疫荧光染色及实时定量PCR技术检测大鼠心肌组织Ry R2蛋白及基因的表达变化。结果:各时间点B组的心律失常评分均较A组低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);第1天A组心肌Ry R2蛋白及Ry R2m RNA表达即较B,C两组增加,但差异无统计学意义(P>0.05);第3,6,10天A组Ry R2蛋白及Ry R2 m RNA表达较B,C两组均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:双黄连可有效治疗乌头碱中毒引起的心律失常,其机制可能与降低乌头碱引起的Ry R2异常高表达有关。

试论中药方剂配伍——代谢关系

配伍是方剂发挥药效的关键,其内在的物质基础是配伍与其有效成分体内代谢特征之间存在着的对应关系,即方剂配伍-代谢关系。以双黄连复方为实例,通过对双黄连复方和黄芩单方中主要药效成分黄芩苷在大鼠体内的代谢产物,以及灌胃给予不同组合配方后药代动力学的比较,初步揭示中药双黄连复方方剂配伍-代谢关系。方剂配伍-代谢关系的研究对阐明方剂配伍的科学内涵有重要意义。

“三黄连”合剂抗炎作用研究

通过观察"三黄连"合剂体内对二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型和体外对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞所致炎性反应的影响,研究该复方制剂的抗炎效果。结果表明,"三黄连"合剂高剂量(30mL/kg)、中剂量(15mL/kg)组小鼠耳肿胀率与空白对照组差异极显著(P<0.01);除中剂量组的胸腺指数外,各试验组小鼠肝脏、肾脏、脾脏和胸腺指数与空白对照组无显著差异(P>0.05)。"三黄连"合剂对LPS刺激的RAW264.7细胞的NO、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平的升高具有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。"三黄连"合剂在体内和体外均具有良好的抗炎效果,并且在体内无明显毒副作用和免疫抑制作用。

黄连解毒汤对AD小鼠学习记忆能力的影响

目的：观察黄连解毒汤对改善阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆能力的作用。方法：3月龄APP/PS1双转基因AD小鼠60只随机分为0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）组（等体积0.5%CMC灌胃）、安理申组（3 mg/kg安理申灌胃）、黄连解毒汤大剂量组（865 mg/kg黄连解毒汤灌胃）、黄连解毒汤中剂量组（433 mg/kg黄连解毒汤灌胃）、黄连解毒汤小剂量组（216 mg/kg黄连解毒汤灌胃）,各12只,各组给药1次/d,连续给药3个月。于6月龄时行Morris水迷宫实验,检测并比较各组小鼠定位航行逃避潜伏期及平均游泳距离。结果：与CMC组比较,安理申组、黄连解毒汤大、中剂量组第2天~第5天逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）,4 d的平均游泳距离缩短（P〈0.05）;黄连解毒汤小剂量组逃避潜伏期及4 d的平均游泳距离缩短差异无统计学意义。结论：一定剂量黄连解毒汤对AD小鼠学习记忆能力有明显的改善作用。

黄连解毒汤不同剂型抗菌药效实验研究

目的从体外抗菌效果的角度比较黄连解毒汤颗粒剂和黄连解毒汤煎剂两种剂型的药效。方法用试管内药液两倍稀释法分别测定黄连解毒汤颗粒剂和黄连解毒汤煎剂对不同细菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果两种剂型对各实验菌的MIC分别为:黄连解毒汤颗粒剂介于0.0020～0.5000g·ml-1;黄连解毒汤煎剂对大肠埃希氏菌不敏感(>0.50g·ml-1),对其余实验菌介于0.0078～0.1250g·ml-1。结论黄连解毒汤颗粒剂的抑菌作用优于黄连解毒汤煎剂,可以作为黄连解毒汤煎剂的替代品。

加味黄连阿胶汤对顺铂致肾损伤大鼠TGF-β_1表达的影响

目的：观察加味黄连阿胶汤对顺铂致肾损伤大鼠TGF-β1表达的影响。方法：采用尾静脉注射顺铂的方法,制备顺铂肾毒性大鼠模型,然后给以相应的药物治疗,连续8周。剖取肾脏行HE、免疫组织化学染色,观察肾组织TGF-β1的表达情况,测定其平均吸光度。结果：模型组大鼠24h尿蛋白定量、NAG含量及TGF-β1的平均吸光度均明显高于正常对照组（P〈0.01）,而各治疗组均明显低于模型组（P〈0.05或P〈0.01）。结论：加味黄连阿胶汤可明显下调肾小管上皮细胞内TGF-β1的表达,减轻顺铂引起的肾小管和肾小管间质损伤。