黄连解毒汤含药血清对Toll样受体34、型及其下游信号转导通路的影响

目的:研究黄连解毒汤含药血清对细菌脂多糖和双链RNA病毒核酸类似物聚肌胞刺激的小鼠巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路的影响。方法:用脂多糖、聚肌胞分别刺激RAW264.7细胞,同时给予黄连解毒汤含药血清进行干预,24 h后,取细胞培养上清液,ELISA法测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量,荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路髓样分化因子88(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),TOLL样受体相关分子(TRAM)和TOLL样受体相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达,Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达,同时用细胞免疫荧光法分析MyD88,TRAF-6蛋白表达的强弱,在mRNA水平和蛋白水平探讨黄连解毒汤对Toll样受体的作用机理。结果:黄连解毒汤含药血清显著降低LPS诱导的TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRlF的高表达(与单纯LPS刺激组比较,P<0.05或P<0.01);Poly(I:C)刺激后,黄连解毒汤含药血清仅对TRAM利TRIF的表达有明显的降低作用(P<0.01)。结论:黄连解毒汤能阻断TLR4高表达,阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径(以阻断非依赖途径为主),抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR4拮抗剂样作用。黄连解毒汤也可直接作用于接头蛋白TRAM和TRIF,影响TLR3信号转录的MyD88非依赖性途径,抑制IFN-β的过度分泌。

黄连解毒汤提取物的药理作用研究

黄连解毒汤提取物能明显降低酵母所致的大鼠体温升高;对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀和醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高均有显著抑制作用;单次给予家免后能明显抑制实验性血栓形成和ADP诱导的血小板聚集,作用呈剂量依赖性。此外,黄连解毒汤提取物可明显延长小鼠断头后的喘气时间,并使急性脑缺血大鼠脑含水量和过氧化脂质显著降低,超氧化物歧化酶活力升高。

黄连解毒汤含药血清对LPSTNF-α诱导的人中性粒细胞与血管内皮细胞间粘附的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)为模型 ,应用蛋白染料染色法 ,观察HLJDT含药血清及其与LPS INF -α共同处理HUVEC4h、12h、2 4h后 ,对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响。结果显示 ,HLJDT含药血清不仅能抑制非致炎状态下中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附 ,而且能抑制致炎因子所诱导的中性粒细胞与血管内皮细胞粘附作用增强 。

建立中药复方用半仿生提取研究的技术平台

半仿生提取法(SBE法)是针对中药药效物质提取中存在的“唯成分论”和“通则论”,采用“灰思维方式”将整体药物研究法与分子药物研究法相结合,从生物药剂学的角度为经消化道给药的中药制剂创立的一种提取新技术。经对多种中药及其复方的研究,结果皆提示:半仿生提取法有可能替代(WE法水提取法);(SBAE法半仿生提取醇沉淀法)有可能替代(WAE法水提醇沉淀法)。本文以黄连解毒汤和慈航丹为例,对建立中药复方半仿生提取研究的技术平台作了介绍。