黄地安消胶囊含药血清抑制NLRP3介导的细胞焦亡对糖尿病认知功能障碍细胞模型的保护作用

探讨黄地安消胶囊(Huangdi Anxiao Capsules,HDAX)含药血清对高糖诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞认知功能障碍的保护作用及可能的分子机制。构建高糖诱导PC12细胞糖尿病认知功能障碍模型,使用mcc950抑制NLRP3。将PC12随机分为正常(control)组、模型(model)组、HDAX含药血清组、NLRP3受体阻断剂(mcc950)组、HDAX含药血清+NLRP3受体阻断剂(HDAX含药血清+mcc950)组。PC12细胞按照分组分别处理后通过MTT法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258/PI染色检测细胞焦亡,ELISA法测定PC12中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18水平,Western blot检测PC12中突触后致密物(postsynaptic density,PSD)、焦亡相关通路蛋白NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N、裂解的半胱天冬酶-1前体(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1,cleaved caspase-1)蛋白水平;RT-PCR检测PC12中NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA表达量,免疫荧光检测焦亡标志指标GSDMD-N、NLRP3表达情况。结果显示,与control组相比,model组细胞增殖活性显著降低,PI阳性率增加,PSD-95表达降低,促进焦亡相关通路蛋白NLRP3、ASC、GSDMD-N、GSDMD、cleaved caspase-1表达,增加NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA含量,同时提升促炎因子IL-18、IL-1β的表达;与model组相比,HDAX含药血清组、mcc950抑制剂组以及HDAX含药血清+mcc950组可以提高细胞存活率,改善PC12细胞形态,显著降低PI阳性率,降低焦亡相关通路蛋白NLRP3、ASC、GSDMD-N、GSDMD、cleaved caspase-1的蛋白表达,减少NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA含量,同时抑制促炎因子IL-18、IL-1β的表达。综上,HDAX含药血清可抑制NLRP3介导的细胞焦亡,对高糖诱导PC12细胞认知功能障碍具有保护作用。