黄连解毒汤有效部位对实验性脑缺血的保护作用

摘要 目的:观察黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)对实验性脑缺血的保护作用。方法:采用三氯化铁所致大鼠单侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型观察HLJDTAF对局灶性脑缺血的保护作用;采用大鼠双侧颈总动脉结扎(CCAO)模型研究药物对脑毛细血管通透性的影响;采用小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注(CCAORR)模型观察药物对模型断头张口喘气时间、脑指数与脑含水量的影响,结果:HLJDTAF可明显减轻MCAO大鼠神经症状,减少脑梗塞范围(P<0.05,P<0.01);HLJDTAF还能显著降低CCAO大鼠血脑屏障毛细血管通透性及脑组织EB含量(P<0.05,P<0.01);该有效部位还可以延长CCAORR的断头张口喘气时间,降低脑指数,减轻脑水肿(P<0.05,P<0.01)。结论:HLJDTAF具有很好的脑保护作用。

黄连解毒汤对过氧化氢诱导大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的:观察黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)对培养皮层神经细胞过氧化氢损伤的保护作用。方法:体外培养新生大鼠皮层神经细胞,加入过氧化氢观察其对神经细胞的损伤及HLJDTAF的保护作用。结果:HLJDTAF 610,305 mg·kg-1可减少模型乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,305 mg·kg-1还可提高模型细胞活性(P<0.05;P<0.01)。同时HLJDTAF各剂量均可减少丙二醛生成,153 mg·kg-1还可减少一氧化氮生成。结论:HLJDTAF对培养神经细胞自由基损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关。

黄连解毒汤有效部位对一氧化氮诱导大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 :观察黄连解毒汤有效部位 (HJDAF)对培养皮层神经细胞一氧化氮损伤的保护作用。方法 :体外培养新生大鼠皮层神经细胞 ,加入硝普钠观察其对神经细胞的损伤及HJDAF的保护作用。结果 :HJDAF(15 3mg/kg)可减少受损细胞的乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率 ;6 10 ,30 5 ,15 3mg/kg可提高受损细胞的活性 ,减少丙二醛 (MDA)生成 (P <0 .0 5 ;P <0 .0 1) ;6 10mg/kg可提高受损细胞超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。结论 :HJDAF对培养神经细胞NO损伤具有一定的保护作用 ,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关。

黄连解毒汤有效部位对培养大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的保护作用

目的 观察黄连解毒汤有效部位 (HLJDTAF)对缺糖 /缺氧培养所致大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠皮层神经细胞 ,以缺氧加缺糖培养建立神经细胞“缺血”性损伤模型 ,观察HLJDTAF对培养神经细胞“缺血”性损伤的保护作用。结果 HLJDTAF 6 10mg·kg-1能明显增高模型细胞的活性 ;30 5mg·kg-1能显著降低模型细胞乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率 ;6 10、30 5、15 3mg·kg-1明显降低上清液中NO含量 ,降低裂解液中MDA含量 ,提高SOD活性。结论 HLJDTAF对正常细胞无明显影响 ,对培养神经细胞“缺血”性损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与其降低NO含量。

黄连解毒汤有效部位对神经细胞内钙超载的作用及机制分析

目的:研究黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)对神经细胞内钙超载的影响及相关机制。方法:低糖低氧损伤胎鼠皮层神经细胞模拟脑缺血,双波长荧光分光光度法测定神经细胞内钙含量,观察HLJDTAF对细胞内钙超载的抑制作用。并分别采用谷氨酸(Glu),KCl,A23187,乙酰甲胆碱(MCh)和咖啡因(CAF)处理神经细胞,以分析药物的作用环节。结果:HLJD-TAF对低糖低氧处理所致神经细胞钙超载有明显的抑制作用(P<0.05);对200μmol.L-1谷氨酸,50 mmol.L-1剂量的K+,0.05μmol.L-1钙离子载体A23187处理细胞引起神经细胞内钙超载有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01);正常外钙情况下和零外钙情况下,HLJDTAF对5 mmol.L-1CAF和Mch诱导神经细胞内钙超载有明显的抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论:HLJDTAF可显著抑制神经细胞拟缺血损伤后的钙超载,其机制可能是通过多途径抑制缺血缺氧后神经细胞内钙超载,从而拮抗脑缺血损伤。

黄连解毒汤及其各部位群抗炎物质基础

目的:研究黄连解毒汤(HLJDT)全方及其各部位群抗炎活性,讨论HLJDT抗炎活性的物质基础。方法:通过鼠毛细管通透性和二甲苯致炎实验,建立动物模型以及确定黄连解毒汤的有效剂量,并依据全方的有效剂量计算出各组分群的给药剂量。将动物随机分为空白组,模型组,地塞米松组,HLJDT全方组,HLJDT上清液50%醇,HLJDT沉淀水洗,沉淀50%醇洗组,按传统给药方式连续3 d ig给药。末次给药60 min后尾静脉注射伊文思蓝(EB),然后立即进行小鼠二甲苯致炎实验,结合高效液相色谱(HPLC)研究HLJDT全方及其各部位群抗炎作用,比较各组间差异。结果:地塞米松,HLJDT全方,上清液50%醇洗和沉淀50%醇洗均能有效降低模型组的肿胀度,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。HLJDT全方,上清液50%醇洗和沉淀50%醇洗部位群均能有效降低耳片中EB含量,抑制肿胀度,EB含量分别为(11.8±1.8),(23.4±3.8),(25.2±3.2)ng·g-1;肿胀度抑制率分别为26.44%,29.89%,19.54%;HLJDT上清液50%醇洗抗炎作用比沉淀50%醇洗作用显著。结论:HLJDT,上清液50%醇洗和沉淀50%醇洗均能有效降低模型组的肿胀度,结合HPLC结果可推断,黄酮与生物碱相互作用后,可以降低生物碱副作用,增加环烯醚萜类成分后,抗炎效果更显著,为抗炎有效部位。

黄连解毒汤有效部位对脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及Cx43表达的影响

目的观察黄连解毒汤水提物及其有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对局灶性脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物组(800 mg/kg)、总生物碱组(44 mg/kg)、总黄酮组(50 mg/kg)、总环烯醚萜组(80 mg/kg),连续ig给药7 d,每天给药1次。HE染色观察脑组织病理学改变;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色观察星形胶质细胞活化;GFAP/Cx43免疫荧光双标染色检测Cx43表达;实时RT-PCR检测Cx43基因表达。结果模型组大鼠缺血半暗带区神经元数目减少,GFAP、Cx43基因及蛋白表达上调(P<0.01)。黄连解毒汤水提物及其3个有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)均可增加脑缺血大鼠缺血半暗带区神经元数目(P<0.05、0.01);降低缺血半暗带区GFAP及Cx43基因、蛋白表达(P<0.05、0.01)。结论黄连解毒汤水提物及其有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)通过抑制星形胶质细胞过度活化,干预Cx43表达,保护缺血半暗带区神经细胞。

黄连解毒汤的组合树脂精制物在脑缺血模型大鼠体内的整合药动学研究

目的:研究黄连解毒汤有效部位(Huanglian Jiedu Tang active fraction,HLJDTAF)在脑缺血模型大鼠体内的整合药动学。方法:采用电凝法阻断大鼠大脑中动脉(MCA),建立脑缺血模型(MCAO),假手术组及模型组灌胃给予黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)后按不同时间点采血,用高效液相色谱法测定小檗碱、巴马汀、黄芩苷、栀子苷在大鼠体内的血药浓度,绘制药-时曲线,建立整合药动学模型。比较单一成分的药动学参数与整合药动学参数的差异。结果:假手术组血浆药物浓度-时间曲线下面积(AUC)(0-t),C max分别为(17.95±3.18)mg·L-1·h,(1.37±0.51)mg·L-1,平均驻留时间(MRT)(0-t),t1/2z分别为(11.19±0.59)h,(68.28±44.56)h;模型组AUC(0-t),C max分别为(18.65±1.00)mg·L-1·h,(1.61±0.12)mg·L-1,MRT(0-t);t1/2z分别为(9.61±0.39)h,(15.04±3.73)h。可知,相对于假手术组,模型组AUC(0-t),C max较高,MRT(0-t),t1/2z较小。说明黄连解毒汤有效部位在脑缺血模型大鼠体内吸收较好,达峰浓度更高;同时代谢加快,在体内停留时间较短。结论:黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF)的整合药动学特征与单个成分的药动学特征基本一致。所获参数能够最大程度上表征中药复方多效应成分整体的体内处置规律,为建立中药复方药代动力学研究提供了一种研究方法。

黄连解毒汤抗原代皮层神经元缺氧缺糖损伤的活性部位筛选

目的观察黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction,HJD)各部位和指标性成分对大鼠原代皮层神经元缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)再灌注损伤的保护作用。方法采用大孔吸附树脂法分离制备30%、50%、75%和95%乙醇的洗脱物(HJDFE30、HJDFE50、HJDFE75和HJDFEg5),采用反向高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法测定各部位中指标性成分的含量。建立连二亚硫酸钠诱导的大鼠原代皮层神经元OGD再灌注损伤模型,运用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTr)比色法,观察HJD的4个部位(HJDFE30、HJDFE50、HJDFE75和HJDFE95)和7个指标性成分对神经元活性的影响。结果 HJDFE30主要含有栀子苷;HJDFE50主要含有黄芩苷、巴马汀、小檗碱和汉黄芩苷;HJDFE75主要含有黄芩苷、小檗碱、黄芩素和汉黄芩素。原代皮层神经元OGD 20 min再灌注1 h后,细胞活性降低(P<0.01),HJD、HJDFE30、HJDFE50和HJDFE75可提高神经元存活率(P<0.05,P<0.01)。各指标性成分栀子苷、黄芩苷、黄芩素、巴马汀、汉黄芩苷和汉黄芩素均可提高神经元存活率(P<0.05,P<0.01)。结论 HJDFE30、HJDFE50和HJDFE75对大鼠原代皮层神经元OGD损伤具有保护作用,是HJD的活性部位。栀子苷、黄芩苷和黄芩素是HJD的主要有效成分。