黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。

黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的探讨黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及可能机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型。分为黄芪糖蛋白治疗组和EAE对照组,隔天记录小鼠临床评分和体质量变化。HE染色和免疫荧光技术检测脊髓组织炎细胞浸润;MTT法检测细胞活性;Griess法检测一氧化氮(NO)释放;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌,γ干扰素(IFN-γ)释放;流式细胞术检测CD4+T细胞亚群变化。结果 HQGP处理可减轻EAE症状,抑制中枢神经系统炎细胞浸润。抑制脾淋巴单核细胞活性、NO和TNF-α、IL-6分泌,促进IFN-γ的分泌。增加CD4+CD25+、CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+T细胞亚群的比例。结论 HQGP通过调节T细胞亚群比例,抑制炎症细胞因子释放,减轻EAE炎症反应。

黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障作用的研究

目的观察黄芪糖蛋白(HQGP)对C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)血脑屏障(BBB)的影响,探讨HQGP治疗EAE的机制。方法选择C57BL/6雌性小鼠40只,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导建立EAE模型,并随机分为HQGP组和EAE组。HQGP组于免疫后第3天腹腔注射HQGP(1 mg/kg),EAE组每天给予等量生理盐水,直至免疫后第18天处死。观察小鼠的发病情况;检测小鼠脑组织含水量和伊文思蓝(EB)含量;免疫组织化学法检测小鼠脊髓组织中CD4+T细胞和CD68+巨噬细胞的浸润;Western blotting检测脊髓组织BBB紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达。结果与EAE组比较,HQGP组发病延缓,临床症状轻,脑组织含水量及EB含量降低。HQGP能降低小鼠脊髓组织中CD4+T细胞和CD68+巨噬细胞的浸润,显著增加脊髓组织中Occludin及ZO-1的表达。结论HQGP可以有效保护EAE小鼠的BBB,进而减轻EAE的临床症状。

黄芪糖蛋白抑制小鼠EAE的作用研究

目的探讨黄糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的抑制作用和可能的机制。方法将18～23 g体质量C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE组、黄芪糖蛋白(HuangqiGlycoprotein,HQGP)治疗组和佐剂组,EAE模型使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)对小鼠进行免疫,佐剂组用生理盐水代替。治疗组于免疫后第6 d按每天30 mg/kg腹腔注射HQGP,佐剂组和EAE组则注射等量生理盐水。观察各组发病情况,同时进行临床症状评分。在免疫后第20 d分离脾脏,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测各组淋巴细胞上清液中细胞因子INF-γ、IL-1β、IL-10和IL-4的水平。结果 HQGP能够显著改善EAE的发病,减轻炎性浸润,并且可抑制MOG35-55诱导的脾淋巴细胞增殖反应(P<0.01)及INF-γ和IL-1β分泌(P<0.05),促进IL-10的分泌(P<0.05),而对IL-4的分泌没有显著性影响。结论 HQGP能显著改善EAE小鼠的症状,可能与减少炎性细胞的浸润有关。

黄芪糖蛋白对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用及机制

目的观察黄芪糖蛋白(HQGP)干预肺纤维化小鼠的病理学改变及并分析机制。方法将60只健康ICR小鼠随机分为对照组、模型组及治疗组,每组20只。采用鼻腔滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型,造模次日起治疗组每天腹腔注射HQGP,模型组及对照组腹腔注射等体积的生理盐水,连续14 d;造模后第7、14、28天取材,取肺组织进行HE、Masson染色,观察肺泡炎及纤维化程度;免疫组化法检测肺组织转化生长因子(TGF)-β1表达。结果与模型组比较,第7、14、28天治疗组肺泡炎、肺纤维化程度明显减轻;肺组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 HQGP抑制小鼠肺纤维化的发展,其作用机制可能与降低肺组织中TGF-β1表达有关。

黄芪糖蛋白通过调控Nrf2/NQO1信号通路保护急性脊髓损伤大鼠模型神经功能

目的探讨黄芪糖蛋白对急性脊髓损伤大鼠模型的神经保护功能及机制。方法选取30只SD大鼠,随机分为3组:假手术组、模型组及观察组。观察黄芪糖蛋白对大鼠肢体运动功能的影响,检测各组大鼠脊髓组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase,NQO1)表达水平。结果观察组、模型组大鼠运动功能评分低于假手术组(P<0.05);观察组评分高于模型组(P<0.05)。观察组、模型组大鼠TNF-α、MPO、IL-6水平高于假手术组(P<0.05);观察组炎性因子水平低于模型组(P<0.05)。观察组、模型组大鼠脊髓组织Nrf2、NQO1mRNA表达水平低于假手术组(P<0.05);观察组表达水平高于模型组(P<0.05)。模型组与观察组Nrf2、NQO1蛋白量降低;观察组高于模型组(P<0.05)。结论黄芪糖蛋白可通过上调脊髓组织Nrf2、NQO1表达水平发挥急性脊髓损伤大鼠神经保护功能。

黄芪糖蛋白对肺纤维化小鼠肺组织中α-SMA表达的影响

目的观察黄芪糖蛋白(Huang Qi Glycoprotein,HQGP)对肺纤维化小鼠肺组织病理形态、细胞因子及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。方法将80只雌性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、HQGP组,每组20只。空白组鼻腔滴注生理盐水,其余3组鼻腔滴注博来霉素(15 mg/kg)诱导肺纤维化,造模后第1天起,各组小鼠给予相应药物腹腔注射,连续治疗14 d。给药后的第7、28天分两批取材,用HE染色和ELISA测定肺组织TNF-α和IL-1β含量来观察对肺泡炎程度的影响;Masson染色评价对肺纤维化程度的影响;采用免疫组化和Western Blot法分别检测肺组织中α-SMA蛋白表达。结果与模型组比较,第7、28天HQGP组小鼠的肺泡炎、肺纤维化程度明显减轻;第7、28天HQGP组小鼠肺组织中α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论HQGP对肺纤维化的干预机制可能与抑制肺组织中α-SMA的表达有关。

黄芪糖蛋白对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的治疗作用及机制

目的:观察黄芪糖蛋白(Huang Qi Glycoprotein,HQGP)对肺纤维化小鼠的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:选取60只健康ICR小鼠,随机分为对照组、模型组及观察组,每组20只。采用鼻腔滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型,造模次日起观察组每天每只小鼠腹腔注射HQGP,连续14 d,模型组及对照组腹腔注射等体积的生理盐水;给药后第7、28天每组分别处死5只动物,取肺组织,评价HQGP对肺组织病理形态、肺系数、肺组织羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响。结果:与模型组比较,第7、28天HQGP观察组小鼠的肺纤维化程度减轻,肺组织的TGF-β_1、Hyp、MDA水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),肺组织SOD水平及肺系数显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HQGP可能通过降低胶原合成,提高机体的抗氧化能力,对肺纤维化的发生发展起到治疗作用。

黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素和氢化考的松体外免疫抑制作用的比较研究

目的:比较黄芪糖蛋白与雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松的体外免疫抑制作用。方法:不同浓度黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松作用于小鼠脾细胞,MTT法测定4种药物对ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪测定4种药物对脾细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-6含量的影响。结果:4种药物对体外培养的脾细胞增殖均表现出显著的抑制活性(P<0.05),药效强度依次为雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松、黄芪糖蛋白。但黄芪糖蛋白主要表现为对T细胞的抑制作用。黄芪糖蛋白促进淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6,而其它3种药物却抑制IFN-γ、IL-6的分泌(P<0.05)。结论:黄芪糖蛋白对于淋巴细胞体外增殖的抑制作用不同于雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松,推测其具有独特的作用机制。

黄芪糖蛋白对小鼠脾淋巴细胞的体外作用

目的研究黄芪糖蛋白(Huangqi glycoprotein,HQGP)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、细胞周期、分泌白介素2(IL-2)的影响。方法 MTT法测定不同浓度黄芪糖蛋白对ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应以及对混合淋巴反应(MLR)的影响;流式细胞法测定黄芪糖蛋白对细胞周期、脾细胞分泌IL-2的影响。结果黄芪糖蛋白明显抑制ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖,抑制混合淋巴反应;细胞周期分析表明,黄芪糖蛋白抑制T淋巴细胞增殖于G0G1期;抑制培养的脾细胞分泌IL-2。结论黄芪糖蛋白在体外具有抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的作用,其机制可能与抑制IL-2的分泌有关。

黄芪糖蛋白对T淋巴细胞增殖活性的影响

目的:探讨黄芪糖蛋白(HQGP)对T淋巴细胞增殖与给药时间的关系、T淋巴细胞增殖与活化程度的关系,以及对双向混合淋巴反应的影响。方法:体外培养小鼠脾细胞,MTT法测定在不同时间给予一定浓度HQGP、给予相同浓度HQGP和不同浓度ConA刺激,双向混合淋巴反应对T细胞增殖的影响。结果:HQGP在不同时间对ConA刺激的T淋巴细胞增殖均有抑制作用,但培养12h给药的抑制作用最强;其抑制作用与T细胞的活化程度无相关性;能明显抑制双向混合淋巴反应,并呈剂量依赖性。结论:在体外实验中,HQGP对小鼠脾淋巴细胞增殖具有免疫抑制活性,且与活化程度无相关性。