花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠胰腺组织钙敏感受体表达及AKT活性的影响

目的:观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠胰腺组织钙敏感受体(CaSR)基因、蛋白表达量及AKT活性的影响,探究花旗泽仁改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制及钙敏感受体(CaSR)、AKT活性与2型糖尿病胰岛素抵抗发生的相关性。方法:雄性Wistar大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素及复合脂肪乳连续灌胃方式复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将成功造模后的大鼠随机分为花旗泽仁组、模型对照组及阳性药对照组,其中花旗泽仁组和阳性药对照组分别灌服花旗泽仁和罗格列酮,而空白对照组和模型对照组则灌服相同剂量的蒸馏水。连续4周,取各组大鼠的胰腺组织并检测其胰岛素敏感,感指数,采用蛋白印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测CaSR基因、蛋白及磷酸化AKT蛋白的表达量。结果:模型对照组大鼠体内的空腹血糖(FBG)及空腹胰岛素(FINS)含量与空白对照组相比明显升高,大鼠CaSR mRNA表达、胰岛素敏感指数(ISI)、CaSR蛋白表达及大鼠磷酸化AKT蛋白含量显著降低;与模型对照组比较,花旗泽仁组FBG及FINS水平明显降低,ISI、CaSR mRNA表达、CaSR蛋白表达及大鼠磷酸化AKT蛋白含量明显升高,同时阳性药对照组大鼠FBG及FINS水平显著降低,ISI、CaSR mRNA表达及磷酸化AKT蛋白表达水平上调。结论:花旗泽仁可能通过调节胰腺组织上钙敏感受体(CaSR)的表达量调控PI3K-AKT信号路AKT上的磷酸化水平,通过提升AKT的活性达到抗2型糖尿病胰岛素抵抗的作用。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠脂肪因子的影响Ⅰ

目的:观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠抵抗素(Resistin)和脂联素(APN)的影响,从脂肪因子角度探讨花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:应用复合脂肪乳复制2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,之后给予花旗泽仁进行干预,采用酶联免疫法检测血清中Resistin和APN的浓度。结果:花旗泽仁明显降低了血清Resistin浓度,同时升高了血清APN,差异显著(P<0.01)。结论:花旗泽仁可通过调节血清Resistin和APN浓度而改善2型糖尿病胰岛素抵抗状态。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠脂代谢的影响

目的:观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin ResistanceI,R)大鼠脂代谢的影响,探索花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:以复合脂肪乳连续灌胃配合双次腹腔注射链脲佐菌素的方法复制2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,造模成功后给予花旗泽仁进行干预,采用分光光度计比色法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)的浓度。结果:花旗泽仁显著降低了血清TG、TC和FFA水平,差异显著(P<0.01)。结论:花旗泽仁可通过降低2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠血清TG、TC、FFA水平而改善胰岛素抵抗时的高血脂状态。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的影响

目的:观察花旗泽仁对胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠胰岛素敏感性的影响,证实花旗泽仁改善2型糖尿病胰岛素抵抗的药理作用。方法:以复合脂肪乳连续灌胃配合双次腹腔注射链脲佐菌素的方法复制2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,造模成功后给予花旗泽仁进行干预,采用血糖仪测定空腹血清葡萄糖(FBG),放射性免疫分析法测定空腹血清胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果:花旗泽仁显著降低了血清FBG、FINS水平,升高了胰岛素敏感指数。结论:花旗泽仁可提高胰岛素敏感性而改善2型糖尿病胰岛素抵抗。

基于AMPK信号通路探讨花旗泽仁对2型糖尿病糖、脂代谢作用的实验研究

目的:基于AMPK信号通路探讨花旗泽仁对2型糖尿病糖、脂代谢的作用机制。方法:db/m小鼠10只,为空白组;db/db小鼠40只,随机分为4组,每组10只,为模型组、阳性药组(0.2 g/kg)、花旗泽仁高剂量组(32 g/kg)、花旗泽仁低剂量组(16 g/kg)。给药6周后,检测各组小鼠空腹血糖(FPG)及血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),Western blot法检测各组小鼠肝脏中单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、促进葡萄糖转运体4(GLUT4)、瘦素(Leptin)、过氧化物酶体增殖活化受体-1a(PGC-1a)蛋白质相对表达量。结果:花旗泽仁可显著降低FPG及血清中TC、TG和HDL-C的含量,上调小鼠肝脏中AMPK、GLUT4、Leptin、PGC-1a蛋白质相对表达量。结论:花旗泽仁可显著改善db/db小鼠糖、脂代谢紊乱,其作用可能与调节肝脏中AMPK相关信号通路有关。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠脂肪因子的影响Ⅱ

目的:观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠血清瘦素(Leptin)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的影响,探索花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法:应用复合脂肪乳灌胃加链脲佐菌素腹腔注射的方法复制2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型;采用放射性免疫分析法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和瘦素(Leptin)水平。结果:花旗泽仁明显降低了血清TNF-α和Leptin水平,差异显著(P<0.01,P<0.05)。结论:花旗泽仁可通过调节血清TNF-α和Leptin水平而改善2型糖尿病胰岛素抵抗状态。

基于UPLC/QTOF-MS技术观察花旗泽仁对SD大鼠体内尿液代谢组学的影响

目的:观察中药复方花旗泽仁干预后,大鼠尿液内源性代谢物的变化,从尿液代谢组学的角度探讨花旗泽仁的作用机制。方法:取雄性SD大鼠10只,灌胃给予花旗泽仁水煎液,于给药前及给药后12 h采集尿液样本,采用UPLC/QTOF-MS技术结合主成分分析(PCA)方法分析其尿液代谢物变化。结果:在正离子检测模式下检测到13种差异性代谢物,负离子模式下检测到11种差异性代谢物。结论:中药复方花旗泽仁改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制可能与蛋白质的合成与代谢、芳香烃的生物降解、体内脂质代谢组织呼吸的氧化以及糖类无氧分解等过程有关。

基于钙敏感受体探讨花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制

目的通过观察花旗泽仁对胰岛素抵抗(IR)细胞中钙敏感受体(CaSR)基因、蛋白表达及AKT活性的影响,探究花旗泽仁改善IR的分子机制。方法采用肿瘤坏死因子(TNF-α)体外诱导培养法建立L6肌细胞IR模型;采用免疫荧光技术检测CaSR在L6肌细胞中的分布;采用qRT-PCR检测L6肌细胞内CaSR基因表达水平;采用Western blot法检测L6肌细胞内CaSR蛋白、及磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平,并观察CaSR激动剂对L6肌细胞IR模型AKT活性的影响。结果与正常对照组比较,模型对照组细胞的葡萄糖消耗量明显降低(P<0.05)、CaSR在模型组中的分布较稀疏、mRNA表达水平显著降低(P=0.000)、蛋白表达量显著降低(P=0.000)、细胞中磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达量明显下降(P=0.000);与模型对照组比较,花旗泽仁组CaSR的分布较密集、mRNA表达水平明显升高(P<0.01)、蛋白表达量明显增加(P=0.000)、细胞中磷酸化AKT(Ser473和Thr308)表达量明显上升(P<0.01)。结论L6肌细胞发生IR时,CaSR mRNA及蛋白表达量降低,AKT活性被抑制,CaSR激动剂可增强AKT活性,提示CaSR可以调控AKT;花旗泽仁可能通过上调CaSR表达水平,激活与IR关系密切的PI 3K/AKT信号通路中的AKT活性,从而改善IR。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠肝脏CaSR mRNA、蛋白表达及AKT活性的影响

目的:观察花旗泽仁对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏组织中钙敏感受体(Ca SR)mRNA、蛋白表达及蛋白激酶B(AKT)活性的影响,探讨花旗泽仁改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠用复合脂肪乳连续灌胃4周配合小剂量注射链脲佐菌素的方法复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型,将大鼠随机分为花旗泽仁组、阳性对照组、模型对照组、空白对照组。检测空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI);采用qRT-PCR、Western blot技术检测Ca SR mRNA、Ca SR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组组大鼠FBG及FINS水平明显增高,ISI显著降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠FBG和FINS水平明显降低,ISI明显升高;与空白对照组比较,模型对照组大鼠肝脏组织中Ca SR mRNA表达水平明显降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠肝脏组织中Ca SR mRNA表达水平显著增高;与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中Ca SR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达量均显著降低;与模型对照组相比,花旗泽仁组和阳性对照组大鼠肝脏组织中Ca SR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达量均明显增加。结论:花旗泽仁可能通过调节Ca SR基因及蛋白表达,改善2型糖尿病胰岛素抵抗。

薏苡仁与花旗泽仁给药后9-HODE在大鼠血浆中的药动学比较

目的:通过建立HPLC-MS/MS分析方法,研究单味药薏苡仁及复方花旗泽仁中9-羟基-(10E,12E)-十八碳二烯酸(9-HODE)在大鼠血浆中的比较药代动力学。方法:将雄性SD大鼠随机分为花旗泽仁组和薏苡仁组,分别灌胃给药。于不同时间点进行血浆样品采集,采用HPLC-MS/MS法测定9-HODE的血药浓度。结果:本研究建立的HPLC-MS/MS分析方法,仪器精密度良好,方法专属性较强,各成分的回收率、重现性与稳定性均符合生物样品检测要求,适用于9-HODE的血浆含量检测。9-HODE的主要药动学参数达峰浓度Cmax为802.9±88.64μg/L;达峰时间T_(max)为0.5 h;半衰期t_(1/2)为7.737±3.309 h;药时曲线下面积AUC_(0-t)为1820±154.2μg/L·h;平均滞留时间MRT0-t为5.862±1.304 h;血浆清除率CL为0.190 5±0.013 22 L/h/kg。本实验结果示,与薏苡仁组比较,花旗泽仁组血浆消除率(CL)明显降低(P<0.05),主要药代动力学参数如药时曲线下面积(AUC)、平均滞留时间(MRT)、半衰期(t_(1/2))等未出现显著性差异(P>0.05)。结论:薏苡仁配伍为花旗泽仁后,对9-HODE的血药浓度吸收未产生明显影响,而在消除方面,降低了其在体内的血浆清除率(CL),使9-HODE在体内作用时间延长。

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中CaSR基因、蛋白表达及AKT活性的影响

目的:通过观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中钙敏感受体(CaSR)基因、蛋白表达及AKT活性的影响,探究花旗泽仁治疗胰岛素抵抗的作用机制。方法:取雄性Wistar大鼠持续灌胃脂肪乳、腹腔注射链脲佐菌素的方式复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将造模成功的胰岛素抵抗大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、花旗泽仁组。花旗泽仁组给予花旗泽仁水煎液,阳性对照组给予罗格列酮药液。给药结束后,分别检测各组大鼠空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI),并且取大鼠肌肉组织,采用qRT-PCR和Western blot技术检测钙敏感受体CaSR mRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平。结果:胰岛素抵抗大鼠模型被成功建立。CaSR mRNA、CaSR蛋白表达水平明显降低(P<0.001),磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白含量明显下降(P<0.001,P<0.01);花旗泽仁组与模型组比较,FBG及FINS水平明显降低(P<0.01),ISI显著升高(P<0.01),CaSR mRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平均明显增加(P<0.01,P<0.05)。结论:花旗泽仁可能通过上调CaSR表达水平,上调与胰岛素抵抗关系密切的PI3K/AKT信号通路中的AKT蛋白(Ser473、Thr308位点)磷酸化水平,从而改善胰岛素抵抗。

花旗泽仁主要活性成分在大鼠体外肠道菌群中代谢研究

目的 :观察花旗泽仁主要活性成分在大鼠肠道菌群中的代谢情况,研究花旗泽仁主要活性成分在SD大鼠体外肠道菌群的代谢规律并探索其原型成分与代谢产物的相关性。方法 :通过超高效液相色谱-飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)分析手段,检测花旗泽仁主要活性成分含量,鉴定代谢产物结构。结果 :①花旗泽仁的主要活性成分人参皂苷Rb1(G-Rb1)、泽泻醇A-24-醋酸酯(Alisol A 24-acetate)和9-羟基-(10E,12E)-十八碳二烯酸(9-HODE)可以被肠道菌群代谢,且肠道菌群对G-Rb1的代谢较快,而Alisol A 24-acetate和9-HODE的代谢速度相比较慢。②本研究确定了G-Rb1的4个代谢产物人参皂苷Rd(G-Rd)、人参皂苷F2(G-F2)、人参皂苷C-K(C-K)和20(S)原人参二醇(Ppd),Alisol A 24-acetate的1个代谢产物泽泻醇A(Alisol A)。结论 :本研究通过体外肠菌代谢实验,明确了花旗泽仁中主要活性成分及其代谢产物在肠道菌群中的代谢规律,并确定代谢产物结构。

花旗泽仁主要活性成分在小鼠体内肠道菌群中的代谢研究

目的:通过对花旗泽仁主要活性成分及其代谢产物在体内肠道菌群中的代谢研究,探索花旗泽仁体内代谢过程,为确定花旗泽仁的药效物质及临床合理用药奠定基础。方法:成年ICR小鼠随机分为空白组(n=6)及给药组(n=12),给药组灌服花旗泽仁水煎液后,分别收集两组小鼠4 h和12 h累积粪便,动物处死后迅速打开腹腔,取出盲肠内容物。利用UPLC-Q-TOF-MS方法对粪便和盲肠内容物中各原型化合物及其代谢产物进行快速分离和含量测定。结果:花旗泽仁的主要活性成分人参皂苷Rb_1(G-Rb_1)在1 h达峰,泽泻醇A-24-醋酸酯(Alisol A24-acetate)和9-羟基-(10E,12E)-十八碳二烯酸(9-HODE)在给药后12 h含量达到最高峰,但12 h的盲肠内容物里却检测不到G-Rb_1,而Alisol A 24-acetate和9-HODE在48 h仍可被检出;G-Rb_1的代谢产物G-Rd在给药后4 h含量达到最高峰,8 h后G-F_2、C-K和Ppd含量相继达到较高水平,而Alisol A 24-acetate的代谢产物Alisol A含量在12 h达峰,且在48 h仍可检测到微量的Alisol A。结论:明确花旗泽仁中主要活性成分及其代谢产物在体内肠道菌群中的代谢规律,证实了肠道菌群对花旗泽仁的代谢转化具有重要作用。

基于CaSR表达及AKT磷酸化水平的花旗泽仁改善胰岛素抵抗作用机制

目的基于CaSR表达及AKT磷酸化水平考察花旗泽仁改善胰岛素抵抗的作用机制。方法采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立IR L02肝细胞模型,并通过葡萄糖消耗实验对细胞模型进行鉴定。采用免疫荧光法和qRT-PCR技术检测CaSR表达的细胞定位以及CaSR mRNA表达,同时采用Western blot技术检测CaSR蛋白、磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达。结果高浓度胰岛素诱导后的L02肝细胞模型葡萄糖消耗量和摄取率明显下降(P<0.01)。免疫荧光实验结果表明,模型对照组的CaSR分布较稀疏,相对应的,给予花旗泽仁后的CaSR分布较密集。通过qRT-PCR实验发现,模型对照组的CaSR mRNA表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,花旗泽仁组、阳性对照组中CaSR mRNA表达明显上调(P<0.01)。同时Western blot检测结果表明,模型对照组的CaSR和磷酸化AKT(Thr308和Ser473)蛋白表达显著下降(P<0.01),与模型对照组比较,花旗泽仁组、阳性对照组中CaSR和磷酸化AKT(Thr308和Ser473)蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论该实验证明了花旗泽仁通过影响PI3K通路改善胰岛素抵抗,可能与通过调节CaSR,激活PI3K/AKT信号通路AKT上的2个(Thr308,Ser473)磷酸化位点的蛋白表达有关。

基于KDSR基因探究花旗泽仁改善HepG2细胞胰岛素抵抗机制研究

目的花旗泽仁是临床治疗IR的经验良方,其机制尚不明确。该文从KDSR基因角度,探讨花旗泽仁是否通过干扰KDSR的表达而改善IR。方法正常HepG2细胞中过表达KDSR基因,给药花旗泽仁,同时建立IR细胞模型,给药花旗泽仁,利用qRT-PCR、Western blot技术检测KDSR表达水平;应用HPLC-MS技术检测细胞中神经酰胺含量;采用Western blot技术检测IR相关信号通路PKCζ/Akt/Foxo1的磷酸化水平,利用GOD-POD实验检测给药前后细胞中葡萄糖含量,观察IR状态。结果给药后,IR细胞及KDSR过表达细胞中KDSR的表达水平明显下降,神经酰胺含量降低,且PKCζ/Akt/Foxo1信号通路表达异常的状态有所改善,同时,给药后两种细胞中葡萄糖含量明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论花旗泽仁改善IR的作用机制之一可能是通过下调KDSR的表达,降低神经酰胺含量,进而调节PKCζ/Akt/Foxo1信号通路上关键蛋白的表达,从而减少细胞中葡萄糖含量而改善IR。

基于HnRNPC基因探究花旗泽仁改善HepG2细胞胰岛素抵抗机制研究

目的从HnRNPC基因和Pkcζ/Akt/FOXO1通路的角度,深入探讨花旗泽仁治疗胰岛素抵抗(IR)的作用机制,为将花旗泽仁开发为治疗IR的中药新药制剂奠定基础。方法应用qRT-PCR、Western blot、液质联用及GOD-POD实验分别检测细胞内HnRNPC的表达量、Cer含量、Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路磷酸化水平及葡萄糖含量。结果于IR细胞内给与花旗泽仁后与IR组进行比较,发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路活性下降且葡萄糖含量减少,结果均有显著性统计学意义(P<0.001);过表达HnRNPC的HepG2细胞给予花旗泽仁后与正常HepG2细胞相比,亦发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,逆转Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路过度激活状态且葡萄糖含量减少,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论花旗泽仁可通过减少HnRNPC的表达降低Cer的含量,进而通过抑制Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路改善IR。

泽泻与复方花旗泽仁给药后泽泻醇A-24-醋酸酯在大鼠体内的比较药代动力学研究

目的:建立HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中泽泻醇A-24-醋酸酯浓度的方法,比较单味药泽泻与复方花旗泽仁中有效成分——泽泻醇A-24-醋酸酯在大鼠体内的药代动力学差异,评价配伍对泽泻醇A-24-醋酸酯的动力学影响。方法:雄性SD大鼠12只,随机分为泽泻组与花旗泽仁组,灌胃给药后在不同时间点进行采血,采用DAS2. 0数据处理软件的非房室模型法(统计矩法)计算药代动力学参数。结果:泽泻单独给药时泽泻醇A-24-醋酸酯最大浓度(Cmax)为(71. 88±13. 43)μg/L;达峰时间(T_(max))为0. 50 h;半衰期(t_(1/2))为(6. 065±2. 246) h;浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)为(350. 60±47. 70)μg/(L·h);平均驻留时间(MRT0-t)为(7. 644±0. 692) h;清除率(CL)为(0. 397 7±0. 056 9)L/(h·kg);配伍后泽泻醇A-24-醋酸酯Cmax为(67. 46±22. 10)μg/L; T_(max)为1 h; t_(1/2)为(5. 543±1. 515) h; AUC0-t为(492. 50±69. 79)μg/(L·h); MRT0-t为(7. 667±1. 127) h; CL为(0. 288 5±0. 047 4) L/(h·kg)。结果:花旗泽仁组中泽泻醇A-24-醋酸酯的浓度-时间曲线下面积和清除率与泽泻组比较有显著性差异(P <0. 05),其他参数比较均无显著性差异(P> 0. 05)。结论:配伍后泽泻醇A-24-醋酸酯药时曲线依然存在明显的双峰现象;泽泻配伍为花旗泽仁可使泽泻醇A-24-醋酸酯在大鼠体内起效时间延长,吸收程度增加,血浆清除率降低。

花旗泽仁主要活性成分在大鼠胰岛素抵抗脂肪组织的分布

目的采用高效液相串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,研究花旗泽仁在大鼠体内药代动力学特征,进行花旗泽仁药动学成药性研究。方法用HPLC-MS/MS方法,完成各胰岛素抵抗脂肪组织3种活性成分浓度检测方法学考察。分别于花旗泽仁3种活性成分药时曲线上吸收相、分布相和消除相选取时间点,给予大鼠花旗泽仁水煎液1次灌胃后,检测3种活性成分于不同时间点脂肪组织浓度,观察这些成分在脂肪组织中的分布特点及浓度随时间变化的规律。结果组织方法学考察结果显示,仪器的精密度良好,方法的专属性较强,各成分的回收率、重现性与稳定性均符合生物样品检测要求,适用于花旗泽仁3种活性成分脂肪组织的含量测定。人参皂苷Rb 1在给药后在脂肪组织分部较少;泽泻醇A-24-醋酸酯在脂肪、浓度相对较高;9-羟基(10E、12E)十八碳二烯酸(9-HODE)在脂肪中分布较多。结论3种活性成分在胰岛素抵抗脂肪组织中均有分布。