化痰祛湿和益气健运方药对巨噬细胞泡沫化的影响及自噬机制研究

目的:观察王琦教授自拟化痰祛湿方(薏脂颗粒)和益气健运方(茯元颗粒)对泡沫细胞脂质的影响,并探索其自噬机制。方法:培养RAW264.7细胞,用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)构建泡沫细胞模型。通过cell titer-blue法进行细胞活力测定,通过油红O染色法检测细胞脂质含量,通过蛋白质印迹法检测CD36和轻链3蛋白表达,用自噬蛋白芯片进一步研究两方对泡沫细胞自噬的影响。结果:油红O染色结果显示,ox-LDL模型组细胞脂质含量升高,泡沫细胞造模成功。两方干预后,细胞脂质含量降低。蛋白质印迹法结果显示:两方干预后CD36表达均升高,化痰祛湿方50 ng/μL组和益气健运方50 ng/μL、100 ng/μL组轻链3Ⅱ/轻链3Ⅰ水平升高。自噬芯片结果显示:与空白对照组比较,ox-LDL模型组P62升高。与ox-LDL模型组比较,化痰祛湿方组P62下降,自噬相关蛋白10上调,益气健运方组的自噬相关蛋白10、自噬相关蛋白12、自噬相关蛋白4A上调。结论:两方均可降低泡沫细胞脂质含量,可能是通过增强巨噬细胞的自噬作用从而促进脂质代谢,减少泡沫细胞的形成。

化痰祛湿方联合揿针干预腹型肥胖的临床疗效

目的:从“体-病”结合角度探讨化痰祛湿方联合揿针干预腹型肥胖的疗效。方法:2021年3月至2021年7月,选取腹型肥胖受试者112例,按随机数字表法分为对照组、中药组、揿针组、联合组,对其给予12周持续干预,观测受试者干预前后的腰围、体质量、体质量指数(BMI)、甘油三脂、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及体质量表、压力知觉量表、贝克抑郁量表等指标,建立数据库进行统计分析。结果:①干预后,联合组、中药组、揿针组的腰围、体质量、BMI均显著小于干预前(P<0.05);②联合组在主要疗效指标、次要疗效指标及情绪指标方面的改善均较为显著(P<0.05);③中药组在主要疗效指标、情绪指标方面的改善较为显著(P<0.05);④揿针组仅在主要疗效指标方面改善较为显著(P<0.05);⑤体质分析结果显示,腹型肥胖受试者中痰湿质占比为56.04%,最为多见。结论:化痰祛湿方联合揿针干预腹型肥胖具有较好的临床疗效,在腰围的改善方面效果尤为突出,由此可见“体-病”结合的干预更为有效。

化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠相关氧化应激因子的影响

目的:通过预实验观察化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠血清及肝组织中相关氧化应激因子的影响,初步探讨其治疗NASH的作用机制。方法:SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白组予普通饲料,其余组给予高脂饲料联合四环素腹腔注射造模。造模第9周处死全部实验动物,HE染色观察肝组织病理结构,ELISA法测定血清及肝组织中MCP-1、PTGS2、NOS2、MDA含量。结果:各用药组血清及肝组织中MCP-1、PTGS、NOS2、MDA含量均低于模型组(P<0.01或P<0.05),高剂量组降低最显著,优于对照组(P<0.05)。结论:化痰祛湿活血方可减轻NASH大鼠炎症损伤,其机制可能与其能够下调氧化应激相关因子MCP-1、PTGS2、NOS2、MDA表达有关。

中医干预肥胖人群的3个问题

随着经济发展,人们生活方式发生改变,尤其是膳食结构的改变,肥胖发病率呈逐年上升趋势。由肥胖引起的一系列严重合并症,如高血压病、胰岛素抵抗等对人类的健康构成了严重的威胁。根据文献记载和流行病学调查,我们将肥胖分为三型:痰湿型、气虚型和痰湿挟瘀型,其中与痰湿体质关系最为密切。减肥并不等于减轻体质量,中医采取加减法并用减肥,研制了"化痰祛湿方",对肥胖人群进行干预,取得了良好的疗效。可改变脂质代谢,纠正痰湿体质偏颇。因此,从体质角度入手,综合运用药物、改变生活方式对肥胖进行干预,具有重要的理论和实践意义。

化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠相关炎性因子的影响

目的:探讨化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠相关炎性因子抗炎的作用机制。方法:72只大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和化痰祛湿活血方高、中、低剂量组。取肝组织观察HE染色变化及肝组织匀浆;检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)水平;运用ELISA法测血清及肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1α、IL-6、IL-10的蛋白表达。结果:与模型组比较,对照组和化痰祛湿活血方组治疗后血清ALT、AST、TG水平均显著下降(P<0.05),其中化高组降低最为显著(P<0.05),血清及组织中TNF-α、IL-1α、IL-6的表达明显下降,IL-10的表达则显著上升(P<0.01,P<0.05)。结论:化痰祛湿活血方用于抗大鼠NASH有显著效果,其机制可能与下调TNF-α、IL-1α、IL-6及上调IL-10表达有关。

化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏病理的影响

目的探讨化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织病理学的影响。方法72只SD大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和中药高、中、低剂量组,每组12只。空白组给予普通饲料,剩余各组均给予高脂饲料联合盐酸四环素腹腔注射建立NASH大鼠模型。从造模第2周起,对照组给予多烯磷脂酰胆碱胶囊混悬液28.5mg/(100g·d)灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予化痰祛湿活血方混悬液5.0、2.52、1.26g/(100g·d)灌胃;正常组、模型组给予等剂量生理盐水灌胃。5周后测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,肝组织切片行HE及油红O染色,观察肝组织病理及脂肪沉积面积变化。结果与模型组比较,对照组和中药高、中、低剂量组治疗后血清ALT、AST、TG、TC水平均显著下降(P<0.01),且中药高剂量组降低血清ALT、AST、TG、TC水平更显著(P<0.05或P<0.01)。给药各组与模型组比较,肝细胞脂肪沉积的面积显著缩小或减少(P<0.01),并且以中药高剂量组效果最优(P<0.01)。结论化痰祛湿活血方能有效减轻肝脏损伤,改善肝细胞脂肪沉积,且以高剂量效果最优。

基于ADPN/PI3K/AKT信号通路探讨化痰祛湿活血方改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠炎症损伤的机制

目的:基于ADPN/PI3K/AKT信号通路探讨化痰祛湿活血方改善非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠炎症损伤的机制。方法:72只SD雄性大鼠随机分为空白组,模型组,西药对照组,中药高、中、低剂量组,每组12只。除空白组外,其余5组均给予高脂饲料造模。模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,西药对照组灌胃多烯磷脂酰胆碱混悬液,中药高、中、低剂量组分别灌胃相应浓度的化痰祛湿活血方混悬液,连续10周。观察大鼠体质量、肝湿重、肝指数的变化,HE染色、油红O染色观察大鼠肝组织病理变化,免疫组化法检测大鼠肝组织Kupffer细胞的活化水平,实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织ADPN、AdipoR2、PI3K、AKT1、AKT2、NF-κB mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,中药高剂量组大鼠体质量、肝湿重、肝指数显著降低(P<0.01),肝细胞脂肪变、小叶内炎症、肝细胞气球样变评分及NAS总分均显著降低(P<0.05),肝组织Kupffer细胞活化水平显著降低(P<0.05),肝组织ADPN、AdipoR2、PI3K、AKT2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),NF-κB mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:化痰祛湿活血方可能通过调控ADPN/PI3K/AKT信号通路改善NASH大鼠炎症损伤。

化痰祛湿活血方含药血清对HepG 2.2.15细胞乙型肝炎病毒复制能力及脂肪代谢相关基因表达的影响

目的探讨化痰祛湿活血方治疗慢性乙型肝炎(CHB)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的可能作用机制。方法60只SD大鼠随机分为恩替卡韦组、化痰祛湿活血方组、联合组和正常组,每组15只。恩替卡韦组给予恩替卡韦分散片0.5mg/(kg·d)灌胃,化痰祛湿活血方组给予化痰祛湿活血方颗粒剂15g/(kg·d)灌胃,联合组给予恩替卡韦分散片和化痰祛湿活血方颗粒剂灌胃,剂量同上,正常组给予正常饲料喂养,10天采血制备含药血清。细胞实验分为对照组、模型组、恩替卡韦血清组、化痰祛湿活血方血清组、联合血清组、激动剂组、联合+激动剂组,每组3个复孔。除对照组外,其余各组均用浓度50μmol/L油酸处理HepG 2.2.15细胞建立CHB合并NAFLD细胞模型。造模后对照组和模型组给予10%正常大鼠血清,恩替卡韦血清组、化痰祛湿活血方血清组、联合血清组给予10%相应血清,激动剂组给予10%大鼠正常血清+T0901317,联合+激动剂组给予10%联合血清+T0901317。培养48h后比较各组细胞活力、细胞凋亡率,检测细胞中肝X受体a(LXRa)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达和细胞培养上清液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量。结果模型组和对照细胞活力和细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,恩替卡韦血清组细胞活力升高、细胞凋亡率降低,而激动剂组细胞活力降低、细胞凋亡率升高(P<0.01),化痰祛湿活血方血清组和联合血清组细胞凋亡率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组LXRa mRNA降低、HBV DNA含量升高(P<0.01);与模型组比较,化痰祛湿活血方血清组和联合血清组SREBP-1c mRNA降低,恩替卡韦血清组和联合血清组HBV DNA含量降低(P<0.01);激动剂组LXRa、SREBP-1c、FAS mRNA和HBV DNA含量均高于联合血清组,而联合+激动剂组LXRa、SREBP-1c mRNA低于激动剂组(P<0.01)。结论化痰祛湿活血方可能通过调控脂代谢相关基因表达影响肝细胞内脂肪合成,从而增强恩替卡韦抑制HBV DNA复制能力。