基于EETs介导的细胞焦亡探讨化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的 探讨化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响及机制。方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组[20 g/(kg·d)]和瑞舒伐他汀组[1.55 mg/(kg·d)],每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。ApoE-/-小鼠喂饲高脂饲料12周复制AS模型。造模成功后,各组小鼠灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周。末次给药后,检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、5,6-环氧二十碳三烯酸(5,6-EET)、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平,主动脉组织中核因子κB抑制蛋白(IκB)、核因子κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平和IκB、NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β、IL-18蛋白表达水平,并观察主动脉组织形态学变化。结果 与模型组比较,化瘀祛痰方组及瑞舒伐他汀组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、IL-1β、IL-18水平,主动脉组织中IκB、NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平以及IκB、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),血清中5,6-EET、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET水平均显著升高(P<0.05);主动脉粥样斑块明显减少。结论 化瘀祛痰方可能通过EETs介导细胞焦亡发挥抗AS作用。

化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢的影响

目的基于CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢探讨化瘀祛痰方防治血脂异常的机制。方法32只SPF级SD大鼠分为空白对照组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组8只。除空白对照组外,其他各组给予高脂饲料喂饲,建立高脂血症模型。于第13周开始,化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃,空白对照组、模型组给予相应体积的生理盐水灌胃,每日1次,灌胃4周。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;HE染色观察肝脏组织病理变化;Elisa检测各组大鼠肝脏14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)水平;Real time RT-PCR检测肝脏组织细胞色素P450表氧化酶2J3(Cytochrome P450 oxidase 2J3,CYP2J3)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)mRNA水平;Western blot法检测肝脏组织CYP2J3、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-actived protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase,ACC)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、CPT-1蛋白水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05);肝脏脂质沉积显著,可见大量脂滴;肝脏组织内14,15-EET含量显著降低(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经化瘀祛痰方及辛伐他汀干预后,大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.05);肝脏脂质沉积情况明显改善,脂滴数明显减少;肝脏组织内14,15-EET水平显著升高(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可有效改善高脂血症大鼠血脂异常,减轻肝脏脂质沉积情况,其机制可能与CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢密切相关。

祛痰化瘀消痛方联合常规西药治疗急性痛风性关节炎临床研究

目的:观察祛痰化瘀消痛方联合常规西药治疗急性痛风性关节炎的临床效果及对血清炎性因子的影响。方法:选取80例急性痛风性关节炎患者,按随机数字表法分为对照组和观察组各40例。对照组予以常规西药治疗,观察组在对照组基础上给予祛痰化瘀消痛方治疗。评价2组临床疗效,比较2组治疗前后症状评分、尿酸(UA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平,并比较治疗安全性。结果:观察组总有效率为97.50%,高于对照组85.00%(P<0.05)。治疗后,2组关节疼痛、红肿评分较治疗前降低(P<0.05),且观察组关节疼痛、红肿评分低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组UA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平较治疗前降低(P<0.05),且观察组UA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于对照组(P<0.05)。2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:祛痰化瘀消痛方联合常规西药治疗急性痛风性关节炎疗效确切,可有效改善症状,降低UA及炎性因子水平,且安全性良好。

基于AMPK调控ACC/CPT1信号通路介导脂肪酸代谢探究化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响

目的 观察化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,并探究其作用机制。方法 采用1 mmol/L油酸棕榈酸混合液诱导HepG2细胞24 h构建脂质沉积模型,分别给予化瘀祛痰方含药血清、AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase, AMPK]抑制剂及抑制剂+中药联合干预,油红O染色观察脂质沉积情况,试剂盒检测细胞中甘油三酯(triglyceride, TG)含量,蛋白印迹法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase, ACC)、p-ACC、肉碱棕榈酰基转移酶-1(Carnitine Palmitoyltransferase-1,CPT1)蛋白相对表达量,以及实时荧光定量法检测细胞中AMPK、ACC、CPT1 mRNA相对表达水平。结果 与模型组相比,化瘀祛痰方含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,细胞中p-AMPK、CPT1蛋白及CPT1 mRNA相对表达量升高,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),AMPK蛋白及基因相对表达水平无明显差别(P>0.05);AMPK抑制剂组细胞中脂滴及TG含量升高,AMPK、CPT1蛋白及mRNA相对表达量降低,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量升高(P<0.05或P<0.01);与AMPK抑制剂相比,抑制剂+中药含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,AMPK、p-AMPK蛋白及AMPK mRNA相对表达水平无显著差异(P>0.05),ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量降低、CPT1则相对表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论 化瘀祛痰方含药血清可能通过激活AMPK使其磷酸化,并调控ACC/CPT1信号通路,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸氧化,从而降低HepG2细胞内的甘油三酯水平及脂质沉积。

基于NOX5-ERK1/2信号通路探讨健脾祛痰化瘀方对动脉粥样硬化小型猪炎症反应的影响

目的 观察健脾祛痰化瘀方对动脉粥样硬化(AS)小型猪氧化应激和炎症反应的影响,基于NOX5-ERK1/2信号通路探讨其作用机制。方法 将12只巴马小型猪随机分为对照组、模型组和健脾祛痰化瘀方低、高剂量组,每组3只。采用高脂饮食饲养24周构建动脉粥样硬化模型,给药组同时在饲料中添加健脾祛痰化瘀方。分别于给药0、16、24周检测小型猪一般体征(体长、腹围、体质量、食物摄入量和粪便含水量),HE染色观察主动脉形态,油红O染色观察主动脉和心肌组织脂质沉积,透射电镜观察胸主动脉组织超微结构,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,ELISA检测血清活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量,Western blot检测主动脉组织NADPH氧化酶5(NOX5)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、VCAM-1、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组小型猪16、24周腹围、体质量、食物摄入量增加(P<0.01),主动脉内膜明显增厚,内皮细胞破坏,脂质沉积,平滑肌细胞水肿,线粒体肿胀明显,血清TC、LDL-C含量及ROS、IL-6、IL-10、TNF-α、hs-CRP、VCAM-1、ICAM-1含量升高,HDL-C含量降低(P<0.01);主动脉组织NOX5、p-ERK1/2、VCAM-1、PCNA蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,健脾祛痰化瘀方低、高剂量组16、24周腹围、体质量、食物摄入量减少(P<0.05,P<0.01),斑块面积和脂质沉积减少,内皮细胞破坏减轻,血清TC、LDL-C含量及ROS、IL-6、IL-10、TNF-α、hs-CRP、VCAM-1、ICAM-1含量降低,HDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05);主动脉组织NOX5、p-ERK1/2、VCAM-1、PCNA蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论 健脾祛痰化瘀方可减轻小型猪AS,其机制可能与抑制NOX5-ERK1/2信号通路激活、减轻氧化应激诱导的炎症反应有关。

健脾祛痰化瘀法对高脂血症大鼠肝脏脂质过氧化的影响及其可能机制

目的观察健脾祛痰化瘀法对高脂血症大鼠肝脏细胞铁死亡的影响,探讨其对肝脏脂质过氧化的影响及作用机制。方法将32只SPF级SD大鼠随机分为4组,分别为空白组、模型组、化瘀祛痰方组[13.846 mg/(kg·d)]以及辛伐他汀组[1.575 mg/(kg·d)]。空白组给予正常饮食;模型组、化瘀祛痰方组及辛伐他汀组大鼠给予高脂饲料。8周后,化瘀祛痰方组和辛伐他汀组进行灌胃给药;空白组和模型组给予等体积的生理盐水进行灌胃。末次给药后通过全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量;HE染色观察肝脏病理变化;油红O染色观察各组大鼠肝脏脂质沉积情况;比色法检测肝脏铁离子含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝脏组织中ROS、GSH含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western blotting法检测肝脏组织中GPx4、SLC7A11、TFR1 mRNA及蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.01);肝脏脂肪空泡布满视野,肝细胞体积变大;并且可见明显红色脂滴分布;肝脏组织中ROS、Fe^(2+)含量显著升高,GSH含量显著下降(P<0.01);肝脏组织中TFR1 mRNA和蛋白的表达显著升高、GPx4和SLC7A11 mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.01)。化瘀祛痰方及辛伐他汀可使TC、TG、LDL-C含量显著降低,HDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01);脂肪变性程度明显缓解,肝细胞脂肪空泡明显减少;脂滴分布明显减少;肝脏组织中ROS、Fe^(2+)含量显著降低,GSH含量显著升高(P<0.05或P<0.01);肝脏组织中TFR1 mRNA和蛋白的表达显著降低,GPx4和SLC7A11 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论健脾祛痰化瘀法改善高脂血症大鼠的作用机制可能与调控SLC7A11/GPx4/ROS信号通路介导的铁死亡的发生有关。

化瘀祛痰方对痰瘀互结证急性冠脉综合征患者血小板功能及活性的影响

目的 探讨影响痰瘀互结证急性冠脉综合征(Acme coronary syndrome, ACS)患者血小板功能及活性的相关因素及化瘀祛痰方对其的作用。方法 前瞻性开放标签招募2022年6月—2023年6月就诊于辽宁中医药大学附属医院心内科,符合痰瘀互结证ACS诊断标准同时服用双联抗血小板聚集药物患者50例为研究对象,给予化瘀祛痰方治疗4周。检测化瘀祛痰方治疗前后血小板压积(Plateletcrit, PCT)、花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)最大聚集率、二磷酸腺苷(Adenosinediphosphate, ADP)最大聚集率、血小板活化标记物全血P选择素CD62p、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物PAC-1水平,探讨化瘀祛痰方对其的作用。同时采用Pearson、Spearman相关系数分析探讨血小板功能及活性参数与ACS重要危险因素:吸烟史、体质量指数(Body Mass Index, BMI)、血脂水平、2型糖尿病病史、高血压病病史的相关性。结果 1.化瘀祛痰方治疗后,痰瘀互结证ACS患者血清总胆固醇(Total Cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein, LDL-C)水平明显下降,载脂蛋白A1(Apoprotein A1,APO-A1)水平明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);血清甘油三酯(Triglycerides, TG)、载脂蛋白B(Apoprotein B,APO-B)、脂蛋白A[Lipoprotein(a),LPa]水平呈下降趋势,高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein, HDL-C)水平呈上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.化瘀祛痰方治疗后,痰瘀互结证ACS患者血小板压积减低,AA最大聚集率下降,CD62p、PAC-1含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);ADP最大聚集率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3.吸烟史、BMI、血脂水平与AA、ADP最大聚集率、CD62p、PAC1、血小板压积均无明显关系;2型糖尿病病史与血小板压积之间存在显著相关关系(P<0.05),且为正相关;高血压病病史与AA最大聚集率、CD62p之间存在显著相关关系(P<0.05),且均为正相关。结论 化瘀祛痰方能够一定程度上降低痰瘀互结证ACS患者血小板聚集功能及活性,发挥其防治痰瘀互结证ACS的作用。吸烟史、BMI以及血脂水平与痰瘀互结证ACS患者血小板聚集功能及活性均无明显相关性。2型糖尿病病史与痰瘀互结证ACS患者血小板压积之间存在正相关。高血压病病史与痰瘀互结证ACS患者AA最大聚集率、CD62p之间存在正相关。

宣肺祛痰化瘀法联合多索茶碱治疗慢性阻塞性肺疾病的疗效及对血气分析PaO_(2),PaCO_(2)的影响

目的:探究布宣肺祛痰化瘀法联合多索茶碱治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的疗效及对血气分析血氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))的影响。方法:选取2021年3月~2022年3月我院老年病科收治的120例COPD患者为研究对象,按照随机数字表法分为研究组(n=60)和对照组(n=60),对照组予多索茶碱治疗,研究组患者在此基础上加用刘方柏教授协定方宣肺祛痰方,比较两组治疗后临床有效率、中医证候积分、血气指标[pH值、PaO_(2)、PaCO_(2)]、肺功能[第一秒末用力呼气量(FEV1)、呼气流量峰值(PEF)及气道阻力(Reff值)]及生活质量[圣·乔治呼吸问卷(SGRD)]。结果:研究组临床有效率96.67%高于对照组83.33%(P<0.05);治疗后,两组中医证候积分均有所下降,且研究组低于对照组(P<0.05);治疗后,两组pH值、PaO_(2)均有所升高,且研究组高于对照组(P<0.05),PaCO_(2)均有所下降,且研究组低于对照组(P<0.05);治疗后,两组FEV1及PEF均有所升高,且研究组高于对照组,Reff均有所降低,且研究组低于对照组(P<0.05);两组SGRD评分各指标均有所降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。结论:宣肺祛痰化瘀法联合多索茶碱治疗COPD患者疗效显著,能够有效缓解患者临床症状,增强患者肺部功能,改善血气状况,提高生活质量。

祛痰化瘀方加减联合西药对痰浊血瘀型冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血脂及血管内皮功能指标的影响

目的探讨祛痰化瘀方加减联合西药对痰浊血瘀型冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者血脂水平及血管内皮功能指标的影响。方法选取中国人民解放军联勤保障部队北戴河康复疗养中心2019年2月至2022年12月收治的痰浊血瘀型冠心病患者98例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各49例。两组患者均予西药对症治疗,观察组患者加用祛痰化瘀方加减,均治疗28 d。结果两组患者均未发生严重不良反应。观察组总有效率为91.84%,显著高于对照组的69.39%(P<0.05)。治疗后,两组患者血清低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇均显著低于治疗前(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇显著高于治疗前(P<0.05),且观察组均显著优于对照组(P<0.05);两组患者肱动脉血管舒张功能、一氧化氮水平均显著高于治疗前(P<0.05),内皮素水平显著低于治疗前(P<0.05),且观察组均显著优于对照组(P<0.05);两组患者的西雅图心绞痛量表(SAQ)评分均显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论祛痰化瘀方加减联合西药治疗痰浊血瘀型冠心病的临床疗效良好,可提高患者的血管内皮功能,调节血脂代谢,提高生活质量。

健脾祛痰化湿化瘀方联合强化生活方式干预治疗腹型肥胖患者的临床效果及对糖脂代谢的影响

目的观察健脾祛痰化湿化瘀方联合强化生活方式干预治疗腹型肥胖患者的临床效果及对糖脂代谢的影响。方法选取2021年1月至2023年6月新余市中医院体检中心收治的200例腹型肥胖患者作为研究对象,按就诊顺序分为对照组和观察组各100例。对照组给予强化生活方式干预治疗;观察组在对照组基础上给予健脾祛痰化湿化瘀方联合治疗。对两组患者同时进行为期3个月的观察,评估两组有效率,并比较腹围(WC)、体重指数(BMI),总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及糖化血红蛋白(HbA1c)和空腹血糖的变化情况。结果治疗后,观察组总有效率(80.00%)高于对照组(64.00%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组WC、BMI水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组TC、TG、LDL-C、HbA1c、空腹血糖水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾祛痰化湿化瘀方联合强化生活方式干预治疗腹型肥胖患者在临床上治疗效果明显,能降低患者BMI、WC水平,纠正糖脂代谢异常。

补肾化瘀祛痰方治疗多囊卵巢综合征的临床研究

目的了解补肾化瘀祛痰方治疗多囊卵巢综合征的临床疗效及可能的作用机制。方法以补肾化瘀祛痰中药为主的水煎内服方及外敷方(必要时联合西药二甲双胍)治疗多囊卵巢综合征46例,连续治疗6个月为1个疗程;观察治疗前后临床症状和体征(肥胖、多毛、痤疮及黑棘皮症评分)、血清激素水平及胰岛素释放试验的变化情况。结果治疗后患者多毛、痤疮、黑棘皮症评分值及肥胖评分值与治疗前比较均明显下降(P<0.01,P<0.05);血清睾酮(T)水平较治疗前显著降低(P<0.05);胰岛素试验中空腹胰岛素值与治疗前比较下降(P<0.01),糖负荷后30min、60min胰岛素值及胰岛素曲线下面积(IAUC)与治疗前比较亦有明显下降(P<0.05)。结论以补肾化瘀祛痰方可以显著改善多囊卵巢综合征患者的症状和体征,改善患者的卵巢功能。

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。

化瘀祛痰方对动脉粥样硬化家兔肝脏细胞线粒体自噬相关基因表达的影响

目的：通过观察化瘀祛痰方调控线粒体自噬相关基因表达对动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的影响,从线粒体自噬的角度揭示化瘀祛痰方干预动脉粥样硬化的分子生物学机制。方法：普通级健康雄性新西兰纯种白兔60只,随机分为正常对照组15只,造模组45只,正常组喂饲普通饲料,造模组喂饲高脂饲料,自由摄食,饮水不限。8周后,将造模组45只家兔随机分为模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组,化瘀祛痰组、辛伐他汀组给予相应正常组及模型组给予等量生理盐水。四周后,腹主动脉取血,分离血清,全自动生物化学分析仪检测血清中TC,TG,LDL-C及HDL-C的含量,HE染色比较各组兔肝组织结构和形态变化,Western-bolt检测各组兔肝组织自噬相关蛋白ClpX,PHB1及SirT3的表达。结果：与正常组相比,模型组血清中TC,TG,LDL-C水平明显升高、HDL-C水平明显降低;与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组血清中TC,TG,LDL-C水平明显降低、HDL-C水平明显升高。HE染色显示正常组家兔肝细胞索排列正常,肝细胞形态正常,核圆、大、居中,胞浆内无脂滴蓄积,小叶内无炎症细胞浸润;模型组家兔肝脏脂肪变性明显,肝细胞肿大变圆,胞浆疏松,内含大的脂肪滴,部分细胞可见细胞核挤向胞膜,细胞浆内可见大小不等的圆形脂肪空泡和炎性细胞;化瘀祛痰组及辛伐他汀组家兔肝脂肪变性的程度降低,脂质空泡的数量减少,肝细胞体形态较为正常。与正常组相比,模型组家兔肝组织中细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白ClpX,PHB1及SirT3表达降低,化瘀祛痰组及辛伐他汀组的家兔肝组织中细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白ClpX,PHB1及SirT3的表达明显升高。结论：化瘀祛痰方可能通过调控线粒体自噬相关基因改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积。

化瘀祛痰方含药血清通过ATF6/CHOP内质网应激途径抑制ox-LDL诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞凋亡

目的:巨噬细胞凋亡在动脉粥样硬化的发生发展中起重要作用,尤其对动脉粥样硬化晚期斑块的稳定性起重要作用。因此,抑制晚期巨噬细胞的凋亡对AS晚期斑块的稳定性具有重要意义。研究从体外的角度探讨化瘀祛痰方含药血清对ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡的影响,并从ATF6/CHOP内质网应激途径探讨其抗凋亡的机制。方法:实验选取小鼠RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组,ox-LDL处理组、化瘀祛痰方低、中、高处理组,通过Hoechst 33342法检测RAW 264.7巨噬细胞凋亡情况;通过免疫荧光法检测ATF6激活情况;通过免疫印迹法检测ERS通路以及下游凋亡相关蛋白CHOP、bcl-2表达情况。结果:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,抑制ATF6的激活,下调CHOP蛋白表达,上调bcl-2蛋白表达,并且呈剂量依赖方式。结论:化瘀祛痰方可有效抑制ox-LDL诱导的RAW 264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制ATF6/CHOP ERS通路激活有关。

李延教授运用化瘀祛痰汤治疗顽固性失眠的效果及对血清细胞因子的影响

目的探讨李延教授运用化瘀祛痰汤治疗顽固性失眠的临床效果及对血清细胞因子的影响。方法选取2018年10月~2019年9月在李延名医工作室门诊就诊的60例顽固性失眠患者,采用随机数字表法将其分为对照组和治疗组,各30例。对照组给予艾司唑仑片治疗,治疗组在对照组的基础上给予化瘀祛痰汤治疗。10 d为1个疗程,共3个疗程。比较两组治疗前后中医证候评分及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分,观察两组临床疗效及治疗前后血清细胞因子水平变化情况,并记录不良反应发生情况。结果两组治疗后中医证候总积分及PSQI总评分均明显低于治疗前(P<0.05),且治疗组治疗后的中医证候总积分及PSQI总评分均明显低于对照组(P<0.05)。治疗组临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后血清白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-6水平均明显低于治疗前(P<0.05),且治疗组治疗后血清IL-1β、TNF-α及IL-6水平均明显低于对照组(P<0.05)。两组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论化瘀祛痰汤治疗顽固性失眠患者可明显改善临床症状及睡眠质量,提高治疗效果,降低血清IL-1β、TNF-α及IL-6水平,且安全性较好,具有推广应用价值。

祛瘀化痰方对动脉粥样硬化大鼠血液流变学的影响

目的：观察祛瘀化痰方对动脉粥样硬化大鼠血液流变学的作用。方法：采用维生素D3结合高脂饲料法建立大鼠动脉粥样硬化模型,经药物治疗8周后,取腹主动脉血测定血液流变学相关指标。结果：与模型对照组比较,祛瘀化痰方两个剂量组能显著降低血细胞比容（P〈0.001）,也能降低两个剂量组的血浆黏度和全血黏度的水平（P〈0.05～P〈0.001）,对高剂量组血浆纤维蛋白原含量也能明显降低（P〈0.05）,对血小板聚集有明显降低趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。结论：祛瘀化痰方可改善动脉粥样硬化大鼠血液流变学异常,阻止动脉粥样硬化病变发展。

化瘀祛痰方干预糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方干预肝脏糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组和化瘀祛痰方组,每组8只。正常组给予基础饲料喂饲,模型组和化瘀祛痰方组给予高脂饲料喂养制备高脂血症模型。造模时间为4周,造模结束后灌胃给药4周。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方10 mL/(kg·d)灌胃,其余两组给予等量生理盐水。全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;HE及油红O染色观察大鼠肝脏组织形态学改变;ELISA法检测糖酵解关键酶己糖激酶-II(HK-II)、磷酸果糖激酶(PFKM)及丙酮酸激酶(PKM2)活性;用蛋白免疫印迹法(Western Blot法)检测肝脏HK-II、PFKM、PK、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏HK-II、PFKM、PKM2、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,HDL-C含量有下降趋势;HE染色显示大鼠的肝细胞肿胀明显,肝细胞脂肪变性;油红O染色显示胞浆内含有大量脂肪空泡蓄积;肝脏HK-II、PFK、PKM2活性降低;肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达降低,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达增高;与模型组比较,化瘀祛痰组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低,HDL-C含量有升高趋势。肝脏HK-II、PFKM、PKM2活性升高。肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达升高,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达降低;肝细胞形态恢复或者部分恢复,胞浆内脂滴含量明显减少。结论化瘀祛痰方可能通过调控糖酵解途径,抑制肝脏细胞凋亡,减轻肝脏细胞脂质沉积,进而防治高脂血症。

补肾化瘀祛痰方对雄激素致不孕大鼠卵巢局部调控因子的影响

目的:观察补肾化瘀祛痰方(Bushen Huayu Qutan Recipe,BHQR)对雄激素致不孕大鼠(androgen- sterilized rat,ASR)卵巢局部调控因子的影响。方法:选择9日龄幼年SD雌性大鼠105只,随机分为病理模型组(90只)和溶媒对照组(15只),丙酸睾丸酮诱导形成ASR。造模成功的30只大鼠随机分为中药干预组和模型对照组。中药干预组用BHQR灌胃干预,模型对照组及溶媒对照组给予蒸馏水灌胃处理,疗程30d。疗程结束后观察大鼠性周期情况,用放射免疫方法检测血睾酮和胰岛素(insulin,INS)含量,用免疫组织化学方法检测卵巢组织抑制素(inhibin,INH)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)和血管内皮生长因子(vascular endo- thelial growth factor,VEGF)的表达。结果:BHQR不仅能明显降低大鼠血INS水平(P<0.05),还能显著降低INH、IGF-Ⅰ和VEGF在卵巢局部的表达(P<0.01)。大鼠排卵恢复率为66.67%。结论:BHQR可能通过改善胰岛素抵抗,降低INH、IGF-Ⅰ及VEGF水平,改善卵巢内部环境,多途径、多靶点促使卵巢功能恢复,促进卵泡生长发育,诱发排卵。

化瘀祛痰汤治疗脑梗塞的临床疗效观察

目的:观察化瘀祛痰汤治疗脑梗塞的临床疗效。方法:63例脑梗塞患者,随机分为治疗组(32例)和对照组(31例)。治疗组在常规治疗基础上给予化瘀祛痰汤,对照组在常规治疗基础上给予微量阿斯匹林,治疗2周后观察患者神经功能缺损积分,生活活动能力积分及血黏度的变化。结果:治疗组、对照组的有效率分别为84.4%、64.5%,两组之间有显著性差异(P<0.05);与治疗前相比,两组患者治疗后神经功能缺损积分减少,血黏度、红细胞聚集指数下降,生活活动能力积分增加,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01);治疗后治疗组与对照组比较,部分指标也有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:化瘀祛痰汤对脑梗塞具有良好的治疗效果,值得临床推广应用。