基于JAK/STAT通路研究化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠的网络药理学分析及实验验证

目的本文旨在通过网络药理学和体外实验,研究化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠(EP)的作用机制。方法筛选化瘀消癥颗粒的潜在有效成分,建立了PPI、MCODE、GO富集和KEGG途径分析。在JAK/STAT通路抑制剂与激动剂对照下,通过划痕实验和Transwell实验分别检测化瘀消癥颗粒对滋养细胞(HTR-8/SVneo细胞)迁移和侵袭的影响,通过Western blot检测化瘀消癥颗粒对JAK/STAT通路及相关蛋白的影响。结果共获得375个活性成分、45个已知靶点和207个预测靶点,通过构建PPI网络筛选出STAT3、MMP9、TLR4、HIF1-α等15个关键目标。划痕实验提示化瘀消癥颗粒对HTR-8/SVneo细胞迁移具有抑制作用,呈时间、剂量依赖性;化瘀消癥颗粒作用48 h后,Transwell实验提示HTR-8/SVneo细胞的过膜细胞数明显下降(P<0.05);Western blot实验提示,JAK/STAT信号通路蛋白表达显著降低(P<0.05);与JAK/STAT通路相关的uPA、HIF1-α和N-cadherin蛋白表达均受到抑制(P<0.05),趋势与通路抑制剂AG490一致,与通路激动剂IL-6相反。结论化瘀消癥颗粒抑制JAK/STAT通路及其相关蛋白uPA、HIF1-α和N-cadherin的表达,影响HTR-8/SVneo细胞的迁移和侵袭活性,这有助于阐明化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠(EP)的作用机制。

化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo增殖侵袭迁移及FGA、ITGB3表达的影响

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细胞的增殖情况;Transwell、细胞划痕分别检测化瘀消癥颗粒含药血清(低、中、高浓度组)对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测FGA、ITGB3 mRNA表达;Western blot检测FGA、ITGB3蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清高、中、低浓度组对HTR-8/SVneo细胞活性具有明显抑制作用。与对照组相比,各剂量化瘀消癥颗粒含药血清组对HTR-8/SVneo细胞增殖活性均有不同程度的抑制作用(P<0.05);不同剂量HTR-8/SVneo细胞穿过Transwell小室滤过膜数量均低于空白组,其中低剂量组HTR-8/SVneo细胞穿膜率最低(P<0.05)。化瘀消癥颗粒含药血清组FGA、ITGB3蛋白表达下调;低浓度化瘀消癥颗粒含药血清组FGA和ITGB3 mRNA表达下调,中、高浓度化瘀消癥颗粒含药血清组ITGB3 mRNA表达下调。结论化瘀消癥颗粒可能通过调控FGA/ITGB3通路抑制HTR-8/SVneo细胞粘附力,从而达到降低细胞活性的目的。

化瘀消癥颗粒治疗早期输卵管妊娠的临床疗效观察

【目的】观察化瘀消癥颗粒治疗早期输卵管妊娠的临床疗效。【方法】采用回顾性研究方法,收集2016年1月至2018年5月在广州中医药大学第一附属医院妇科病房住院治疗的早期输卵管妊娠患者共271例。所有患者均给予输卵管妊娠中西医结合治疗方案的药物治疗(包括宫外孕1号方加味、散结镇痛胶囊、丹参注射液、双柏散和甲氨蝶呤等的应用),其中治疗组165例使用化瘀消癥颗粒(由天花粉、紫草、桃仁、丹参、赤芍等组成)治疗,对照组106例使用血府逐瘀颗粒治疗。采用单因素分析方法对影响异位妊娠药物治疗的相关因素进行评价,采用多元回归分析方法进行协变量的筛选,评估化瘀消癥颗粒辅助治疗早期输卵管妊娠的临床疗效。【结果】(1)单因素分析结果显示:异位妊娠次数、治疗方法、血中β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)值各因素比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)多元回归分析筛选出的协变量为:治疗方法、血中β-HCG和孕酮(P)值、阴道流血天数、停经天数、腹痛天数、异位妊娠次数。(3)在校正了影响结局的变量之后,与对照组比较,治疗组疗效得到了显著提高[OR:0.3;95%CI(0.1,0.6)],2组疗效比较,差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】化瘀消癥颗粒联合中西医结合治疗方案治疗早期输卵管妊娠,疗效肯定,具有推广应用的价值。

化瘀消癥颗粒调控Talin1抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭迁移的研究

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法制备化瘀消癥颗粒含药血清,CCK8实验检测不同浓度化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响并筛选后续实验药物浓度,划痕实验、Transwell实验检测化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清可抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭和迁移;与空白对照组比较,化瘀消癥颗粒含药血清可下调侵袭相关因子Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀消癥颗粒含药血清可能通过调控Rap1/Talin1/ITGB3通路而下调Talin1表达来发挥杀胚作用。

化瘀消癥颗粒治疗早期输卵管妊娠临床疗效观察

目的观察化瘀消癥颗粒治疗早期输卵管妊娠的临床疗效,分析影响化瘀消癥颗粒临床疗效的相关因素。方法研究纳入2016年1月—2021年3月在广州中医药大学第一附属医院住院并选择药物治疗的输卵管妊娠患者共374例,均给予输卵管妊娠中西医结合治疗方案,根据是否使用化瘀消癥颗粒,分为化瘀消癥颗粒组270例,血府逐瘀颗粒组104例。比较两组患者治疗前后血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)值、盆腔包块最大径线值、盆腔积液最大径线值,分析临床疗效;并采用单因素及多因素逻辑回归分析探讨影响化瘀消癥颗粒临床疗效的可能相关因素。结果与治疗前比较,两组患者治疗第7天血β-hCG值均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);化瘀消癥颗粒组患者治疗后盆腔包块最大径线、盆腔积液最大径线较治疗前明显缩小,差异有统计学意义(P<0.01),与血府逐瘀颗粒组相比,化瘀消癥颗粒组患者血β-hCG值、盆腔包块最大径线值下降更为明显,两组间比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。自然分娩史、异位妊娠史、治疗前血β-hCG值、治疗前血清孕酮(P)值是影响化瘀消癥颗粒治疗输卵管妊娠疗效的独立危险因素,当血β-hCG值>820.0 IU·L^(-1)、血P值>19.5 nmol·L^(-1)时,可能对使用化瘀消癥颗粒治疗输卵管妊娠的疗效产生影响。结论化瘀消癥颗粒可以提高早期输卵管妊娠临床疗效,显著降低血β-hCG值,缩小盆腔包块,减少盆腔积液,安全性好,具有推广应用价值。

化瘀消癥颗粒对盆腔炎性疾病后遗症中医证候评分及不同证型间炎症因子的影响

目的探讨化瘀消癥颗粒治疗盆腔炎性疾病后遗症(Pelvic inflammatory disease sequelae,SPID)的临床疗效。方法收集2018年1月—2019年11月广州中医药大学第一附属医院妇科门诊SPID90例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各45例。对照组口服血府逐瘀颗粒,观察组口服化瘀消癥颗粒,连续治疗14 d后评价临床疗效。对比患者治疗前后中医证候评分的变化情况、临床疗效及炎症因子的变化。结果观察组总有效率97.78%(44/45),对照组总有效率84.44%(38/45),2组差异有统计学意义(P<0.05)。在给药后第14天(节点2)、停药后7 d,观察组患者的中医证候总评分、白细胞计数、中性粒细胞百分比、超敏C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A、盆腔积液改善程度均较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),湿热瘀结证比气虚血瘀证更为明显。结论化瘀消癥颗粒治疗SPID能降低中医证候总评分,快速改善临床症状,降低炎症因子指标,临床疗效确切。

化瘀消癥颗粒对低氧状态下滋养细胞增殖、黏附与自噬的影响

目的探讨化瘀消癥颗粒治疗输卵管妊娠的可能作用机制。方法人源妊娠滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞消化计数后接种至96孔板,分别设空白组、低氧组和化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组,每组3个复孔。低氧组和化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组每孔加入含400μmol/L二氯化钴(CoCl2)0.1 ml作用24 h建立低氧模型。造模后化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组在培养液中分别加入20 mg/ml化瘀消癥颗粒母液50、100、150μl分别作用24 h、48 h、72 h后,采用CCK8法筛选后续实验药物干预时间。采用同上分组及干预方法,根据CCK8检测结果确定作用时间,采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况并计算细胞迁移率,采用Western-blot法检测细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)与自噬标志蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3蛋白Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达。结果根据CCK8法检测结果确定作用时间为48 h继续后续实验。与空白组比较,低氧组细胞迁移率升高,HIF-1α、N-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量均升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低(P<0.05)。与低氧组比较,化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组细胞迁移率降低,HIF-1α、N-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);化瘀消癥颗粒高、低剂量组E-cadherin蛋白相对表达量升高,且化瘀消癥颗粒高剂量组升高更显著(P<0.05)。结论化瘀消癥颗粒可能通过抑制低氧所导致的滋养细胞的增殖、黏附、自噬活性,而发挥治疗输卵管妊娠的作用,以高剂量效果更佳。

基于自噬稳态调控的化瘀消癥颗粒治疗输卵管妊娠机制研究

目的:观察化瘀消癥颗粒对输卵管妊娠滋养细胞自噬的影响。方法:不同浓度的化瘀消癥颗粒处理细胞后,MTS检测细胞增殖活力,自噬荧光双标检测自噬流,免疫印迹法检测自噬相关蛋白的表达,联用雷帕霉素,检测自噬稳态在化瘀消癥颗粒干预滋养细胞中的作用。结果:与0mg/mL化瘀消癥颗粒比较,0.8、1.6、3.2、6.4mg/mL化瘀消癥颗粒均可抑制HTR-8/SVneo细胞增殖,并呈现浓度依赖性;与0h作用比较,化瘀消癥颗粒干预12、24h可显著抑制增殖,并呈现时间依赖性;0.8mg/mL化瘀消癥颗粒干预后,滋养细胞内自噬体和自噬溶酶体均增多,其中以自噬溶酶体的累积最为明显;免疫印迹结果显示,0.8、1.6mg/mL化瘀消癥颗粒干预后,自噬相关蛋白Beclin1、ATG5、P62及LC3-Ⅱ/Ⅰ表达均上调;0.8mg/mL化瘀消癥颗粒联合50μmol/L雷帕霉素浓度与化瘀消癥颗粒比较,细胞活力进一步下降。结论:化瘀消癥颗粒可抑制滋养细胞增殖,诱导自噬,抑制自噬流,引起自噬性细胞死亡。

化瘀消癥颗粒调控滋养细胞铁死亡敏感性治疗输卵管妊娠的机制研究

目的:研究化瘀消癥颗粒含药血清(HYXZ)对GPx4抑制剂RSL3损伤HTR-8/SVneo细胞中铁沉积及脂质过氧化的影响,探讨HYXZ治疗输卵管妊娠(TP)的潜在分子机制。方法:予RLS3和/或HYXZ干预HTR-8/SVneo细胞,采用CCK8分析细胞增殖活力;检测GPx和MDA含量;分别用DCFH-DA、C11-BODIPY581/591及FeRhoNox-1探针检测细胞内活性氧簇(ROS)、脂质ROS、不稳定铁池(LIP);Western blot检测铁死亡相关蛋白GPx4、SLC7A11、TfR1、ACSL4表达。结果:HYXZ增强RSL3诱导的HTR-8/SVneo细胞铁死亡敏感性与抑制GPx活性(P<0.01)、增加细胞内(P<0.01)及脂质ROS水平、提高LIP含量(P<0.01)有关。HYXZ进一步降低RSL3诱导的GPx4、SLC7A11蛋白表达(P<0.05),提高ACSL4蛋白表达(P<0.05)。RSL3抑制了HTR-8/SVneo的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01),HYXZ可加强RSL3对HTR-8/SVneo细胞功能的抑制作用。结论:在GPx4抑制诱导HTR-8/SVneo细胞铁死亡中,HYXZ协同干预促进了细胞死亡,从而治疗TP。