基于EETs介导的细胞焦亡探讨化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的 探讨化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响及机制。方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组[20 g/(kg·d)]和瑞舒伐他汀组[1.55 mg/(kg·d)],每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。ApoE-/-小鼠喂饲高脂饲料12周复制AS模型。造模成功后,各组小鼠灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周。末次给药后,检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、5,6-环氧二十碳三烯酸(5,6-EET)、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平,主动脉组织中核因子κB抑制蛋白(IκB)、核因子κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平和IκB、NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β、IL-18蛋白表达水平,并观察主动脉组织形态学变化。结果 与模型组比较,化瘀祛痰方组及瑞舒伐他汀组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、IL-1β、IL-18水平,主动脉组织中IκB、NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平以及IκB、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),血清中5,6-EET、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET水平均显著升高(P<0.05);主动脉粥样斑块明显减少。结论 化瘀祛痰方可能通过EETs介导细胞焦亡发挥抗AS作用。

化瘀祛痰方干预糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方干预肝脏糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组和化瘀祛痰方组,每组8只。正常组给予基础饲料喂饲,模型组和化瘀祛痰方组给予高脂饲料喂养制备高脂血症模型。造模时间为4周,造模结束后灌胃给药4周。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方10 mL/(kg·d)灌胃,其余两组给予等量生理盐水。全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;HE及油红O染色观察大鼠肝脏组织形态学改变;ELISA法检测糖酵解关键酶己糖激酶-II(HK-II)、磷酸果糖激酶(PFKM)及丙酮酸激酶(PKM2)活性;用蛋白免疫印迹法(Western Blot法)检测肝脏HK-II、PFKM、PK、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏HK-II、PFKM、PKM2、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,HDL-C含量有下降趋势;HE染色显示大鼠的肝细胞肿胀明显,肝细胞脂肪变性;油红O染色显示胞浆内含有大量脂肪空泡蓄积;肝脏HK-II、PFK、PKM2活性降低;肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达降低,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达增高;与模型组比较,化瘀祛痰组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低,HDL-C含量有升高趋势。肝脏HK-II、PFKM、PKM2活性升高。肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达升高,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达降低;肝细胞形态恢复或者部分恢复,胞浆内脂滴含量明显减少。结论化瘀祛痰方可能通过调控糖酵解途径,抑制肝脏细胞凋亡,减轻肝脏细胞脂质沉积,进而防治高脂血症。

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P<0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P<0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。

健脾祛痰化瘀方调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬防治动脉粥样硬化机制研究

目的探讨健脾祛痰化瘀方调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬防治动脉粥样硬化(atherosclerotic,AS)的机制。方法将40只ApoE小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,8只C57BL/6 Cnc小鼠作为正常组。除正常组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模12周后,灌胃给药,正常组与模型组给予相应体积的生理盐水,阿托伐他汀组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组给予相应药物。4周后全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;HE染色观察主动脉病理及斑块变化情况;采用透射电镜观察主动脉自噬体超微结构的变化;实时荧光定量Q-PCR法检测miR-155、LC3、Rheb、GAPDHmRNA的表达;采用Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测LC3、Rheb、p70s6k、p-p70s6k、mTOR、p-mTOR及β-actin蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型组ApoE小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平均显著升高,HDL-C水平显著下降(P<0.01);HE染色结果显示模型组小鼠主动脉管腔中斑块面积范围较大、程度较重;电镜结果显示模型组小鼠主动脉超微结构自噬小体增多;模型组ApoEAS小鼠主动脉LC3-I、LC3-II、miR-155 mRNA表达显著下调(P<0.01),Rheb mRNA表达显著升高(P<0.01);模型组ApoEAS小鼠主动脉LC3-II/LC3-I显著下降(P<0.01),Rheb、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K蛋白表达显著升高(P<0.01)。经阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组治疗后,与模型组相比,阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组血清中TG、TC、LDL-C水平均发生显著性降低(P<0.01),HDL-C水平无明显变化趋势;HE染色结果显示阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组小鼠主动脉管腔中斑块面积范围明显减小、程度明显减轻;电镜结果显示阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组小鼠主动脉超微结构显示自噬小体减少;阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组LC3-I、LC3-II、miR-155mRNA表达显著上调(P<0.01或P<0.05),Rheb mRNA表达显著下调(P<0.01或P<0.05);阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组LC3-II/LC3-I表达有所上调(P<0.01或P<0.05),Rheb、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K蛋白表达显著下调(P<0.01或P<0.05)。结论健脾祛痰化瘀方可能通过调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬从而达到防治AS的作用。

化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)AS小鼠主动脉G6PD/NF-κB表达及炎症水平的影响

目的基于G6PD/NF-кB表达,探讨化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化(athrosclerotic,AS)小鼠斑块及炎症反应的影响及机制研究。方法24只ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,给予高脂饲料喂养12周。选用8只C57BL/6J小鼠作为空白组,给予普通饲料喂养。化瘀祛痰方组以及辛伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,空白组与模型组给予等量的生理盐水。4周后采用酶联免疫法(ELISA)检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉斑块形态学改变;ELISA法检测各组小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平;Western Blot法及实时荧光定量Q-PCR法检测主动脉IL-6、IL-1β、TNF-α、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量无明显改变(P>0.05),主动脉内膜增厚,管腔狭窄,大量粥样斑块形成,血清中IL-6、IL-1β、TNF-ɑ水平显著升高(P<0.05或P<0.01),主动脉内IL-6、IL-1β、TNF-ɑ、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量无明显改变(P>0.05),主动脉斑块较模型组明显减小,血清中IL-6、IL-1β、TNF-ɑ水平显著降低(P<0.05或P<0.01),主动脉内IL-6、IL-1β、TNF-ɑ、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方能够减小主动脉斑块大小,延缓AS进展,其机制可能与其调控G6PD/NF-κB表达,降低G6PD、NF-κB蛋白水平、抑制炎症反应有关。

祛痰化瘀调脂方治疗痰瘀互结型血脂异常临床观察

目的:观察祛痰化瘀调脂方治疗痰瘀互结型血脂异常患者的临床疗效。方法:将痰瘀互结型血脂异常患者70例随机分成两组各35例。对照组予生活方式干预,治疗组在对照组基础上予祛痰化瘀调脂方。治疗12周后,观察并记录两组患者疗效指标(血脂水平、中医证候积分)以及安全性指标。结果:治疗后,治疗组TC、TG及LDL-C水平较治疗前明显下降(P﹤0.05),总有效率为97.14%;对照组各血脂指标较治疗前变化均不明显(P﹥0.05),总有效率仅为57.14%,两组比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗组中医证候总有效率为94.29%,对照组为51.43%,两组比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。临床观察过程中,所有患者生命体征稳定,且均未出现明显肝肾功能损害、肌损害、胃肠道不适等不良反应。结论:祛痰化瘀调脂方治疗痰瘀互结型血脂异常的疗效明确,能明显降低患者TC、TG、LDL-C水平,改善患者症状。

化瘀祛痰方药调控PI3K/AKT/mTOR信号通路改善高脂血症大鼠肝脏脂质代谢的机制

目的:以PI3K/AKT/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的分子机制。方法:40只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、高脂血症组、化瘀祛痰方组及血脂康组(n=10)。正常组予正常饲料,其他组予高脂饲料,60 d后化瘀祛痰方组、血脂康组分别给予相应药物灌胃,其他组给予等体积磷酸盐缓冲0.9%氯化钠溶液灌胃30 d。HE与油红O染色观察大鼠肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清血脂水平;Western Blot检测肝脏PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果:高脂血症组大鼠肝脏脂肪变性明显,细胞肿胀,内含脂肪空泡及大量橘红脂滴,化瘀祛痰方组和血脂康组肝脏脂肪变性程度降低,脂质空泡及脂滴数明显减少;与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01),PI3K、AKT、mTOR蛋白表达水平显著上调(P<0.01),LC3A/B蛋白表达水平显著下调(P<0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组和血脂康组大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),PI3K、AKT、mTOR蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01),LC3A/B蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论:化瘀祛痰方可能通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,增强高脂血症大鼠肝脏自噬,进而改善肝脏脂质损伤。

化瘀祛痰方对油酸和棕桐酸诱导HepG2细胞脂质损伤及自噬的影响

目的:观察化瘀祛痰方含药血清对油酸和棕榈酸诱导HepG2细胞脂质损伤及自噬水平的影响,探讨化瘀祛痰方防治脂代谢紊乱的可能机制。方法:以不同终浓度(摩尔比为2∶1)的油酸和棕榈酸混合物孵育诱导HepG2细胞24h,采用CCK-8、油红O染色以及细胞内TG含量测定等方法筛选并建立最佳HepG2细胞脂质损伤模型;以大鼠空白血清作为空白对照、辛伐他汀含药血清作为阳性对照,采用油红O染色、Western Blot、细胞内TG含量测定法检测化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂肪损伤及自噬相关指标的影响。结果:选取终浓度为1mmol/L的油酸和棕榈酸作为最佳作用浓度。与模型组比较,化瘀祛痰方含药血清能明显使HepG2细胞内脂滴变小、数量减少并使细胞内TG含量显著减低(P<0.05),同时显著上调HepG2细胞自噬相关蛋白Atg3和Beclin1表达(P<0.05)。结论:化瘀祛痰方药含药血清可以减轻油酸和棕榈酸诱导的HepG2细胞内的脂质损伤,其机制可能与其影响自噬相关蛋白Atg3和Beclin1的表达有关。

基于PCR Array技术探讨化瘀祛痰方对AS家兔小肠组织线粒体能量代谢相关基因的影响

目的:应用PCRArray技术,从"从脾论治"角度探讨化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(AS)家兔小肠组织线粒体能量代谢相关基因的影响。方法:采用45只健康SPF级雄性新西兰白兔,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方组。模型组、化瘀祛痰方组予高脂饲料喂养造模。8周后,化瘀祛痰方组给予药物干预,剂量为16g·kg^-1·d^-1,正常组与模型组给予相应体积0.9%氯化钠溶液。用药4周后检测家兔血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、小肠组织形态学变化,PCR Array技术检测与线粒体能量代谢相关基因的变化。结果:与正常组比较,模型组血清中TC、TG、LDL-C含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组TC、TG、LDL-C含量显著降低(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量显著升高(P<0.01)。形态学结果显示,化瘀祛痰方组家兔小肠脂肪空泡与脂质沉积减少。PCR Array结果显示,正常组与模型组以及化瘀祛痰方组与模型组之间比较均发生上调≥2倍或下调≤2倍的基因共15个基因,且均能够调控线粒体呼吸链复合物酶水平。结论:小肠线粒体能量代谢相关基因表达异常极有可能是AS的潜在机制,也可能是化瘀祛痰方防治AS的重要作用靶点。

化瘀祛痰方调控线粒体自噬相关蛋白减少动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的研究

目的观察化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(AS)家兔肝脏线粒体自噬相关蛋白的影响,探讨线粒体自噬对肝脏脂质沉积的调控作用。方法 SPF级健康雄性新西兰纯种家兔60只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组,正常组喂饲基础饲料,模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组喂饲高脂饲料造模。造模8周后,化瘀祛痰组、辛伐他汀组给予相应药物,正常组及模型组给予相应体积生理盐水。4周后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,HE染色观察肝脏组织的形态变化,油红O染色观察脂滴蓄积,Western blotting检测肝脏组织线粒体自噬相关蛋白FUNDC1、P62及LC3的相对表达量。结果与正常组相比,模型组家兔血清TC、TG、LDL-C含量显著上升(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.05);与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C含量显著下降(P<0.05),HDL-C含量显著上升(P<0.05)。HE染色结果,模型组家兔肝脏组织肿胀明显,脂肪空泡形成;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪空泡显著减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常。油红O染色结果,模型组肝细胞肿大变圆,胞浆疏松,胞浆内脂滴蓄积明显;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪变性程度降低,脂质空泡数量减少。Western blotting结果,与正常组相比,模型组家兔肝组织中线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著升高(P<0.05),P62相对表达量显著降低(P<0.05),而化瘀祛痰组及辛伐他汀组与模型组相比线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著降低(P<0.05),P62相对表达量显著升高(P<0.05)。结论化瘀祛痰方可调控线粒体自噬相关蛋白,减少AS家兔肝组织脂质沉积,减缓动脉粥样硬化的形成和发展。

Apo E^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏胆固醇代谢相关miRNA-mRNA网络构建及化瘀祛痰方的调控作用

目的:利用mRNA转录组学与miRNA测序技术构建ApoE^(-/-)动脉粥样硬化(AS)小鼠胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络,阐明ApoE^(-/-)小鼠脂代谢紊乱分子机制及化瘀祛痰方调控作用。方法:10只C57BL/6J小鼠为空白对照组,20只ApoE^(-/-)小鼠予高脂饲料喂养8周后分为模型组和中药组,每组10只。中药组予化瘀祛痰方20 g/kg体质量灌胃,其他两组予等量蒸馏水灌胃,给药8周后取材。生化分析仪检测小鼠血清血脂水平,HE染色观测肝脏组织形态学变化、油红O染色观测肝脏脂质沉积情况,mRNA转录组学与miRNA测序技术构建ApoE^(-/- )AS小鼠胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络,qRT-PCR验证表达趋势并明确化瘀祛痰方的干预作用。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著上升,HDL-C水平显著下降(P<0.01);肝脏细胞排列紊乱且肿胀,脂肪空泡变性严重,肝脏油红着色脂滴存在;胆固醇代谢相关基因SREBP2、PCSK9、LDLR、HMGCR、CYP7A1表达下调,qRT-PCR验证结果一致(P<0.01,P<0.05)。在调控他们的miRNAs中,有71个差异miRNAs,其中13个下调,58个上调,总体呈现负调控趋势,71个miRNAs与5个靶基因形成了一个分子调控网络,其中9个miRNAs对3个以上靶基因具有负调控作用,qRT-PCR验证结果一致(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,中药组TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.01);肝脏细胞肿胀与脂肪空泡样变性明显改善,油红着色脂滴明显减少;SREBP2、PCSK9、LDLR和CYP7A1mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05),miR-677-5p和miR-7043-3p显著下调(P<0.05)。结论:胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络可能在ApoE^(-/-)小鼠脂代谢紊乱中发挥关键作用,化瘀祛痰方可能通过调控PCSK9、SREBP2、LDLR和CYP7A1改善胆固醇稳态失衡,上游机制可能与其调控miR-677-5p和miR-7043-3p有关。

化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化模型小鼠肠道菌群驱动TMA/FMO3/TMAO通路的影响

目的探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法24只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组和化瘀祛痰组,每组8只。8只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。除空白对照组外,其余各组给予高脂饲料喂养制备AS模型。造模后辛伐他汀组给予辛伐他汀2.275mg/(kg·d)灌胃,化瘀祛痰组给予化瘀祛痰方20g/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予等体积(0.5ml)生理盐水灌胃。每日1次,灌胃4周。观察肝脏病理组织形态,检测盲肠内容物肠道菌群,血浆三甲胺(TMA)、氧化三甲胺(TMAO)含量,肝脏黄素单加氧酶3(FMO3)mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,化瘀祛痰组细胞肿胀明显减轻,脂肪空泡显著减少,脂滴沉积减少。与空白对照组比较,模型组血浆TMA、TMAO含量,肝脏FMO3蛋白及mRNA水平升高(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和化瘀祛痰组血浆TMA、TMAO含量,肝脏FMO3蛋白及mRNA水平降低P<0.05);辛伐他汀组和化瘀祛痰组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。肠道菌群Beta多样性分析,各组样本能够显著区分。基于属水平,与空白对照组比较,模型组拟普雷沃菌属、拟杆菌属、大肠杆菌科志贺菌、副拟杆菌属相对丰度下降,gLachnospiraceaeUCG-006、罗氏菌属相对丰度升高(P<0.05);与模型组比较,化瘀祛痰组厌氧棍状菌属、gEubacteriumxylanophilumgroup、gLachnospiraceaeUCG-006、gRikenellaceaeRC9gutgroup、罗氏菌属相对丰度下降,拟杆菌属、柠檬酸杆菌属、大肠杆菌科志贺菌属、副拟杆菌属、葡萄球菌属相对丰度升高(P<0.05)。拟杆菌属、副拟杆菌属与TMA呈负相关,拟普雷沃菌属、拟杆菌属、副拟杆菌属与TMAO呈负相关(P<0.05)。结论化瘀祛痰方可能通过改变肠道菌群结构,减少TMA生成,降低肝FMO3表达,抑制TMAO合成,从而抑制AS发生发展。

基于肠道菌群-胆汁酸-法尼醇X受体信号途径探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:基于肠道菌群-胆汁酸-法尼醇X受体(FXR)信号途径探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:24只ApoE-/-小鼠给予高脂饲料8周,随机分为模型组、辛伐他汀组和化瘀祛痰方组,每组8只。另8只C57BL/6J小鼠作为空白对照组,给予基础饲料。于第9周开始,辛伐他汀组和化瘀祛痰方组分别给予对应药物治疗4周。观察主动脉病理组织形态学,检测心功能,血脂,胆汁酸(血清、肝脏、回肠、胆汁、粪便),回肠胆汁酸组分,肝脏胆固醇,盲肠内容物肠道菌群,回肠FXR、FGF-15和肝脏CYP7A1 mRNA、蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠LVAWd、LVIDs显著增加(P<0.05),EF和FS显著降低(P<0.05),LDL-C、TG、TC水平显著升高(P<0.05),肝脏、胆汁和粪便的胆汁酸含量显著降低(P<0.05),回肠胆汁酸和肝脏胆固醇含量显著升高(P<0.05),回肠TCA和TCDCA水平显著升高(P<0.05),UDCA和β-MCA水平显著降低(P<0.05),Bacteroides水平显著降低(P<0.05),回肠FXR、FGF-15 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),肝脏CYP7A1 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,化瘀祛痰方组小鼠EF和FS显著增加(P<0.05),LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.05),胆汁和粪便的胆汁酸含量显著升高(P<0.05),回肠胆汁酸和肝脏胆固醇含量显著降低(P<0.05),回肠CA、DCA、TCA、TDCA水平显著降低(P<0.05);肠道Bacteroides、Clostridium水平显著升高(P<0.05);回肠FXR、FGF-15 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),肝脏CYP7A1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:化瘀祛痰方通过影响肠道菌群结构,增加胆汁酸外排,抑制肠肝FXR/FGF15轴,促进肝脏胆汁酸的合成,维持胆固醇代谢平衡,最终实现其改善动脉粥样硬化的作用。

益气健脾化瘀祛痰方对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪探究行为的影响

目的观察益气健脾化瘀祛痰方对脾虚痰浊动脉粥样硬化(AS)巴马小型猪探究行为的影响。方法将26只巴马小型猪随机分为正常组5只、手术组21只,正常组给予基础饲料,手术组给予高脂饲料喂饲。第2周对手术组小型猪行冠状动脉球囊挤压术,术后将21只小型猪随机分为模型组、中药组和西药组,每组7只。第4周开始对除正常组外的各组小型猪加入跑步过劳训练制备脾虚痰浊AS模型,共持续4周。24周后评价模型,评价后中药组给予益气健脾化瘀祛痰方1.625 g/(kg·d),西药组予单硝酸异山梨酯缓释片1.142 mg/(kg·d)。24周后采用监视仪器对各组小型猪咬物品、咬同伴、拱物品、拱同伴、闻物品、闻同伴6项探究行为进行观察。结果与正常组比较,模型组小猪探究行为中咬同伴、拱物品行为频次下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组探究行为频次均呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);中药组在咬物品、拱物品、闻物品方面频次多于西药组,其中咬物品差异有统计学意义(P<0.05)。结论益气健脾化瘀祛痰方可增加脾虚痰浊AS小型猪探究行为活动,且对小型猪探究行为改善作用较单硝酸异山梨酯缓释片更显著。

祛痰化瘀中药复方对心房颤动模型大鼠心肌超微结构及氧化应激的影响

目的 探讨祛痰化瘀中药复方治疗心房颤动(AF)的可能作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,维拉帕米组及祛痰化瘀高、中、低剂量组,每组10只。除空白组外其余各组大鼠采用尾静脉注射乙酰胆碱(Ach,66μg/ml)-氯化钙(CaCl2,10 mg/ml)混合液连续7天建立AF大鼠模型。从造模第2天起,祛痰化瘀高、中、低剂量组大鼠分别给予祛痰化瘀中药复方41.25、20.63、10.31 g/(kg·d)灌胃,维拉帕米组给予维拉帕米溶液25 mg/(kg·d)灌胃,空白组和模型组灌服8.93 ml/(kg·d)生理盐水,连续灌胃2周。最后一次灌胃后12 h记录各组大鼠肢体Ⅱ导联心电图,监测AF持续时间;透射电镜下观察各组大鼠心肌超微结构变化;ELISA法检测大鼠血清中晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 空白组大鼠为正常心电图,心房肌细胞的肌小节完整清晰,线粒体结构正常。与空白组相比,模型组大鼠心电图显示为AF心律,血清中AOPP、MDA、ROS含量升高,SOD含量降低(P<0.05或P<0.01),心房肌细胞的肌小节断裂,“Z”带不连续,排列混乱,“I”带模糊不清,线粒体肿胀、增多。与模型组比较,各给药组大鼠AF持续时间明显缩短;祛痰化瘀高、中剂量组大鼠血清AOPP、ROS、MDA含量降低,SOD含量升高(P<0.05或P<0.01),维拉帕米组大鼠血清AOPP、ROS含量降低,SOD含量升高(P<0.05);祛痰化瘀高、中剂量组和维拉帕米组大鼠心房肌细胞的肌小节轻微断裂,排列相对整齐,线粒体稍有肿胀、增多,结构相对完整,而祛痰化瘀低剂量组大鼠心肌超微结果改善不明显。结论 祛痰化瘀中药复方可以缩短心房颤动持续时间,改善心肌损伤,其机制可能与抑制氧化应激有关,且以高中剂量效果为佳。