Analysis and Study on Quality Control of Yao Medicine Damnacanthus macrophyllus Based on Methods in Chinese Pharmacopoeia

[Objectives]To establish a quality analysis method for Yao medicine Damnacanthus macrophyllus Sieb.ex Miq.var.giganteus(Makino)Koidz..[D.indicus Gaertn.f.var.giganteus Makino].[Methods]The moisture,total ash and alcohol extracts of D.macrophyllus medicinal materials were determined according to the experimental methods in the Chinese Pharmacopoeia(2020).[Results]All the 10 batches of D.macrophyllus medicinal materials from different collection times and different regions in Guangxi had the same plant morphological characteristics.The experimental results indicate that the moisture was 9.81%-11.52%,the total ash content was 7.37%-9.53%,the acid-insoluble ash content was 1.10%-1.97%,and the extract was 8.25%-10.22%.[Conclusions]This study provides a scientific basis for establishing a quality standard for Yao medicine D.macrophyllus medicinal materials,and it is expected to better utilize and develop D.macrophyllus.

虎刺的本草考证

最早记载于《证类本草》的“虎刺” ,经考证并非《开宝本草》中的“伏牛花” ,李时珍在《本草纲目》中将其归并于“伏牛花”项下是不正确的。虎刺的原植物为茜草科的虎刺DamnacanthusindicusGaertn f 。

超声波提取虎刺中总黄酮的工艺研究

采用超声波法提取虎刺中总黄酮,并以正交试验L9(34)优化其工艺,结果为:以70%乙醇为提取剂,料液比为1:25(g/ml),提取温度为50℃,提取时间40min,黄酮的提取率为15.01mg/g。

虎刺中总黄酮的含量测定

研究超声波辅助技术测定虎刺中总黄酮含量的方法。通过线性关系试验、精密度试验、稳定性试验、回收率试验和测定样品中总黄酮的含量,研究了利用超声波辅助技术测定虎刺中总黄酮含量的方法。在线性关系试验中,总黄酮浓度在8~60μg/ml,线性范围良好。在精密度试验中,RSD值为0.53%,表明精密度较好。在稳定性试验中,RSD值为1.12%,表明在0~60 min之间的稳定性较好。在回收率试验中,其平均回收率为99.9%,RSD为0.55%（n=5）。说明该方法具有良好的加样回收率。用该法测得的虎刺中总黄酮的平均含量为1.413%。该方法具有精密度、稳定性均较好,回收率高等优点,可以作为虎刺中总黄酮含量的测定方法。

反相高效液相色谱法测定不同产地虎刺中齐墩果酸和熊果酸的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定不同产地虎刺中齐墩果酸和熊果酸的含量。方法:虎刺样品以95%乙醇溶液超声提取,分析柱选用Kromasil C18色谱柱,以甲醇-2.0%磷酸水溶液(90∶10,v/v)进行洗脱,柱温:25℃,流速:0.8 mL/min,检测波长:210 nm。结果:齐墩果酸在0.124～1.24μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为97.6%(RSD=2.2%);熊果酸在0.192～1.92μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为102.4%(RSD=1.9%)。结论:该二种成分均以湖北产虎刺中含量最高,方法操作简便,精密度高,可为虎刺的质量控制和开发利用提供实验依据。

虎刺抗氧化和抗菌活性研究

考察虎刺80%乙醇提取物和石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水溶性部位的抗氧化和抗菌活性以及与总黄酮含量的关系。乙酸乙酯部位在清除DPPH自由基和还原力模型中抗氧化活性最强,水溶性部位在总抗氧化力模型中抗氧化活性最强,而石油醚部位抗氧化活性最弱。二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位具有一定的抑菌活性。虎刺黄酮类成分可能是其抗氧化的物质基础。

虎刺提取物对CCl_4致肝损伤的保护作用

目的:研究虎刺提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及与所含蒽醌类化合物之间的量效关系。方法:小鼠分为模型组,正常组,阳性药组(联苯双酯),石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、水部位组和75%乙醇提取物组。正常组小鼠每日灌胃(ig)生理盐水10 m L·kg^(-1),阳性对照组联苯双酯200 mg·kg^(-1),药物组按300 mg·kg^(-1)(高剂量组)、150 mg·kg^(-1)(低剂量组)剂量给药。连续给药6天后小鼠按剂量10 m L·kg^(-1)腹腔注射(ip)0.1%CCl_4花生油溶液,心脏取血,测血清谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)活性,并取肝脏做组织切片观察其病理学形态变化。采用高效液相(HPLC)法初步分析,采用醋酸-甲醇显色法测定各样品中总蒽醌的含量。结果:与模型组相比,虎刺水部位(300 mg·kg^(-1))能明显降低小鼠血清中ALT、AST的含量(p<0.01),水部位(150 mg·kg^(-1))和75%乙醇提取物(300 mg·kg^(-1))也能降低ALT、AST的含量(p<0.05)。病理切片发现水部位和总提物能明显减轻肝组织病理学症状。结论:虎刺提取物具有明显的肝保护作用,其中水部位活性最强,保护活性可能与蒽醌化合物有关。

虎刺提取物抗炎作用的初步研究

目的:探讨虎刺水提物和醇提物的抗炎作用。方法:(1)采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀,实验分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松5 mg/kg)、虎刺水提物低(0. 6 g/kg)、中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组和醇提物低(0. 6 g/kg)、中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组,每组10只,给药7 d,检测各组大鼠耳肿胀度和肿胀抑制率;(2)采用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀,实验分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松5 mg/kg)、虎刺水提物低(0. 4 g/kg)、中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组和醇提物低(0. 4 g/kg)、中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组,每组10只,给药7 d,检测各组大鼠足肿胀度和血清TNF-α、IL-1β。结果:(1)虎刺水提物中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组和醇提物中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组能有效抑制小鼠耳肿胀;(2)虎刺水提物各剂量组能显著抑制大鼠足肿胀;虎刺水提物各剂量和醇提物中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组能抑制TNF-α、IL-1β水平。结论:虎刺水提物和醇提物具有一定的抗炎作用,可抑制炎症因子水平。

虎刺提取物对佐剂性关节炎大鼠治疗作用及机制探讨

目的:通过佐剂性关节炎大鼠(AA大鼠)模型探究虎刺水提取和醇提物对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用及其机制。方法:采用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎,大鼠随机分成9组:正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(甲氨蝶呤3 mg/kg)、虎刺水提物低剂量(0.4 g/kg)、中剂量(0.8 g/kg)、高剂量(1.6 g/kg)组和虎刺醇提物低剂量(0.4 g/kg)、中剂量(0.8 g/kg)、高剂量(1.6 g/kg)组,每组10只。观察大鼠体质量、足肿胀度、关节炎评分指数、免疫器官(胸腺、脾脏)指数及血清中细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的变化。结果:在给药第14 d后,虎刺水提物低剂量、中剂量、高剂量组和醇提物中剂量、高剂量组能抑制AA大鼠足肿胀;虎刺水提物低剂量、中剂量、高剂量组和醇提物高剂量组关节炎指数低于模型对照组;虎刺水提物和醇提物各组别的胸腺指数均高于模型对照组;虎刺水提物中剂量、高剂量)组和醇提物高剂量组均能改善降低炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,升高IL-10水平。结论:虎刺水提物和醇提物能有效改善AA大鼠关节炎症,提示虎刺具有一定抗类风湿性关节炎(RA)作用。该抗RA作用可能与调节细胞因子水平和免疫保护作用相关。

高效液相色谱法测定瑶药虎刺中熊果酸的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定瑶药虎刺中熊果酸的含量。方法采用HPLC法测定瑶药虎刺中熊果酸的含量。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇∶乙腈∶0.2%磷酸溶液(18∶67∶15),流速1.0 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长为210 nm。结果熊果酸在11.13~111.3μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为98.67%(RSD=2.72%)。结论采用HPLC法测定瑶药虎刺中熊果酸的含量操作简单,重现性好,可为瑶药虎刺的质量控制和开发利用提供科学依据。

瑶药绣花针的质量标准研究

目的建立瑶药绣花针质量标准,为该药材质量控制提供实验依据。方法建立瑶药绣花针的性状、显微特征、薄层鉴别及含量测定方法;按照中国药典2020年版(第四部)通则中相关方法,对绣花针药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物等进行测定。结果瑶药绣花针的性状、显微特征、薄层鉴别等均有明显的专属特征。瑶药绣花针药材含水量为7.4%~13.3%,总灰分为5.4%~9.6%,酸不溶性灰分为3.4%~7.8%,水溶性浸出物为13.3%~47.6%。虎刺醛浓度在20.6~144.2μg·mL^(−1)(r^(2)=0.999)内有良好的线性关系,平均加样回收率为98.38%。11批药材样品中虎刺醛含量在0.049%~0.107%,平均含量为0.085%。结论建立的瑶药绣花针质量标准具有很好的专属性、稳定性和重现性,可用于瑶药绣花针药材的质量控制。