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自然杀伤细胞与丙型肝炎病毒感染的Huh7.5细胞体外共培养后的功能变化 被引量:1
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作者 胡姚 张婷 +2 位作者 叶颖子 王晓红 俞蕙 《中国循证儿科杂志》 CSCD 北大核心 2016年第4期290-294,共5页
目的探讨体外丙型肝炎病毒(HCV)感染对NK细胞功能产生的影响及其可能的机制。方法利用质粒JC1-Flag2体外转录得到的HCV感染性颗粒(HCVcc)以MOI4.8感染Huh7.5细胞(Huh7.5-HCVcc),与健康人外周血分离得到的NK细胞进行共培养。与Huh7.5-HC... 目的探讨体外丙型肝炎病毒(HCV)感染对NK细胞功能产生的影响及其可能的机制。方法利用质粒JC1-Flag2体外转录得到的HCV感染性颗粒(HCVcc)以MOI4.8感染Huh7.5细胞(Huh7.5-HCVcc),与健康人外周血分离得到的NK细胞进行共培养。与Huh7.5-HCVcc细胞共培养前后,采用ELISA法和MTT比色法分别检测NK分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-10的水平和细胞杀伤活性,以评估HCV感染对NK细胞功能的影响。结果与MOI4.8的Huh7.5-HCVcc细胞共培养,NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10水平受到抑制,其中IFN-γ在共培养6 h(P<0.001)、9 h(P<0.001)、12 h(P<0.001)受到显著抑制,TNF-α在共培养6 h(P<0.001)、9 h(P<0.001)、12 h(P=0.001)受到显著抑制,IL-10在共培养6 h(P<0.001)、9 h(P=0.006)受到显著抑制;且NK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-10的功能均在共培养6 h受到的抑制效应最大,平均抑制率分别为24.1%、20.7%和24.3%。NK细胞杀伤活性在共培养6 h(P=0.023)受到抑制,平均抑制率为16.6%。结论在体外与MOI4.8的Huh7.5-HCVcc细胞共培养,NK细胞分泌细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-10)和细胞杀伤功能均受到抑制,且在不同时间点受到的抑制程度不同,提示NK细胞在HCV感染的不同阶段可能起到不同的作用。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 丙型肝炎病毒 huh7.5细胞 共培养
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Legalon-SIL downregulates HCV core and NS5A in human hepatocytes expressing full-length HCV 被引量:3
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作者 Marjan Mehrab-Mohseni Hossein Sendi +3 位作者 Nury Steuerwald Sriparna Ghosh Laura W Schrum Herbert L Bonkovsky 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2011年第13期1694-1700,共7页
AIM: To determine the effect of Legalon-SIL (LS) on hepatitis C virus (HCV) core and NS5A expression and on heme oxygenase-1 (HMOX-1) and its transcriptional regulators in human hepatoma cells expressing full length H... AIM: To determine the effect of Legalon-SIL (LS) on hepatitis C virus (HCV) core and NS5A expression and on heme oxygenase-1 (HMOX-1) and its transcriptional regulators in human hepatoma cells expressing full length HCV genotype 1b. METHODS: CON1 cells were treated with 50 μmol/L or 200 μmol/L LS. Cells were harvested after 2, 6 and 24 h. HCV RNA and protein levels were determined by quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blotting, respectively. RESULTS: HCV RNA (core and NS5A regions) wasdecreased after 6 h with LS 200 μmol/L (P < 0.05). Both 50 and 200 μmol/L LS decreased HCV RNA levels [core region (by 55% and 88%, respectively) and NS5A region (by 62% and 87%, respectively) after 24 h compared with vehicle (dimethyl sulphoxide) control (P < 0.01). Similarly HCV core and NS5A protein were decreased (by 85%, P < 0.01 and by 65%, P < 0.05, respectively) by LS 200 μmol/L. Bach1 and HMOX-1 RNA were also downregulated by LS treatment (P < 0.01), while Nrf2 protein was increased (P < 0.05).CONCLUSION: Our results demonstrate that treatment with LS downregulates HCV core and NS5A expression in CON1 cells which express full length HCV genotype 1b, and suggests that LS may prove to be a valuable alternative or adjunctive therapy for the treatment of HCV infection. 展开更多
关键词 Hepatitis Hepatitis C virus SILYMARIN SILYBIN Genotype huh7.5 CON1
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带荧光标记的新型丙型肝炎病毒感染性克隆的构建及其活性鉴定
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作者 陈晨 张永宏 《贵州医药》 CAS 2016年第3期258-259,共2页
丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科丙型肝炎病毒属。研究[1]发现在HCV NS5A结构域Ⅲ中可插入大量异源序列如绿色荧光蛋白(EGFP),从而对HCV感染的活细胞进行可视化研究。本次实验将探索利用新型全长HCV感染性克隆(包括HCV基因2a型,同... 丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科丙型肝炎病毒属。研究[1]发现在HCV NS5A结构域Ⅲ中可插入大量异源序列如绿色荧光蛋白(EGFP),从而对HCV感染的活细胞进行可视化研究。本次实验将探索利用新型全长HCV感染性克隆(包括HCV基因2a型,同时构建HCV基因5a型嵌合体),建立带有报告基因EGFP、mCherry的HCV基因2a及5a型的活病毒,在完整HCV生命周期的水平上研究感染情况,为寻找HCV新药物提供治疗靶点。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 绿色荧光蛋白 MCHERRY huh7.5肝癌细胞 感染
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一种改进型基于荧光蛋白重定位系统的丙型肝炎病毒滴度检测方法的建立
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作者 毕研伟 李智华 +5 位作者 龙琼 张辉 陈晨 李亚东 李育中 寸韡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期181-187,共7页
目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素β启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulator-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸... 目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素β启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulator-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸(C462-540)的基因序列及含有SV40核定位信号的IPS-1(C462-540)基因序列,插入经同样酶切的慢病毒表达载体LV-CAG--EGFP-WPRE、LV-CAG—mCherry(RFP)-WPRE,构建表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-NLS-IPS-1(C462-540)的慢病毒重组表达质粒;在此基础上构建含有IPS-1(C462-540)-2A-EGFP-puro、IPS-1(C462-540)-IRES-EGFP-puro的慢病毒重组表达质粒;利用293T细胞包装含有IPS-1(C462-540)蛋白的重组慢病毒;感染Huh7.5细胞,流式细胞仪筛选稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的Huh7.5细胞,或用puromycin筛选稳定表达EGFP的Huh7.5细胞;利用10倍系列稀释的HCV感染上述细胞,检测HCV的滴度。结果测序表明4种慢病毒表达质粒构建正确;收获的慢病毒感染Huh7.5细胞48 h后,可见EGFP或RFP表达,经流式细胞仪分选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-IPS-1(C462-540)的细胞系,经puromycin筛选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)的细胞系;经10倍系列稀释的HCV感染后,弥散在细胞质中的点状EGFP、RFP会扩散到整个细胞或定位到细胞核中,在甲基纤维素的限制下形成明显的荧光噬斑点,通过计算荧光噬斑点数得到用Huh7.5-EGFP-IPS-1(462-540)-IRES-PURO、Huh7.5两种细胞检测的HCV滴度分别为(5.6±0.2)×10~5和(5.5±0.2)×10~5 PFU/mL,二者无显著差异。结论成功构建了含有绿色荧光或红色荧光报告系统的细胞系,建立了一种简单、快速检测HCV滴度的新方法。 展开更多
关键词 干扰素β启动刺激因子-l 丙型肝炎病毒 病毒滴度 慢病毒 荧光蛋白 huh7.5细胞
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