Hujin Pill′s antisteatosis of rat liver:evaluation of histopathology and ultrastructure

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＨｕｊｉｎＰｉｌ，ｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｒｈｉｚｏｍａｐｏｌｙｇｏｎｉｃｕｓｐｉｄａｔｉ，ｒａｄｉｘｃｕｒｃｕｍａｅ，ｒｈｉｚｏｍａａｌｉｓｍａｔｉｓ，ｒａｄｉｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ，ｆｒｕｃｔｕｓｃｚａｔａｅｇｉａｎｄｇ...

虎金方调节SIRT1/PGC1α信号通路改善代谢相关脂肪性肝病小鼠的脂质代谢研究

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)通路探讨虎金方对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常组、模型组、水飞蓟宾组(48 mg·kg^(-1))及虎金方高(21.24 g·kg^(-1))、中(10.62 g·kg^(-1))、低(5.31 g·kg^(-1))剂量组。通过给予高脂饲料连续饲喂10周复制MAFLD小鼠模型。从第11周开始,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组按上述剂量灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续给药4周。采用HE及油红O染色法观察肝脏组织病理变化;生化试剂盒检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;RT-PCR及Western Blot法检测肝脏组织SIRT1、PGC1α、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)mRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量及肝脏系数显著升高(P<0.01);NAS病理评分、脂滴面积占比显著升高(P<0.01);血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);肝脏组织中SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠的体质量、肝质量均显著降低(P<0.01),水飞蓟宾组和虎金方中、高剂量组小鼠的肝脏系数显著降低(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠的NAS病理评分、脂滴面积占比及血清TG、LDL-C、ALT、AST水平显著降低(P<0.05,P<0.01),水飞蓟宾组和虎金方低、高剂量组血清HDL-C水平显著升高(P<0.01),水飞蓟宾组和虎金方高剂量组血清TC水平显著降低(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠肝脏组织中SIRT1、TFAM mRNA表达水平显著升高(P<0.01),水飞蓟宾组和虎金方中、高剂量组小鼠肝脏组织中PGC1α、NRF1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);水飞蓟宾组和虎金方高剂量组小鼠肝脏组织中SIRT1蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),水飞蓟宾组和虎金方中、高剂量组小鼠肝脏组织中PGC1α、NRF1、TFAM蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论虎金方可能通过调控SIRT1/PGC1α通路来影响肝脏线粒体的生物发生,减少线粒体氧化应激,促进肝脏脂质代谢,减轻脂质沉积,从而发挥缓解MAFLD的作用。

虎金丸抗脂肪肝的药效学研究

虎金丸对综合致病因素造成的大鼠脂肪肝模型有显著治疗作用，能降低肝和血中胆固醇、甘油三酯含量，降低肝匀浆中丙二醛含量；同时降低血浆中分子含量，提高血浆中巯基化合物浓度，对肝损害有一定保护作用。

虎金丸对肝纤维化大鼠血清Ⅲ型前胶原、透明质酸及层粘蛋白作用的动态观察

目的：观察虎金丸对肝纤维化大鼠血清Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ，PCⅢ）、透明质酸（hyaluronicacid，HA）及层粘蛋白（laminin，LN）的动态影响。方法：采用CCl4所致肝纤维化动物模型，用放免法检测血清PCⅢ、HA、LN。结果：虎金丸能显著降低各期模型大鼠血清中HA、LN的含量，与对照组比较有显著性差异（P＜0．05，P＜0．01）。长期疗效优于秋水仙碱组。能维持血清中PCⅢ的血清含量在肝纤维化期（9、12周）基本正常，与正常对照组比较无显著性差异（P＞0．05）。结论：虎金丸能延缓肝纤维化的形成，有较好的预防和治疗效果。

虎金丸抗大鼠脂肪肝病理学和超微结构观察

目的:观察虎金丸的抗脂肪肝作用及对脂肪肝的组织病理学和超微结构的影响。方法:采用复合致病因素造成大鼠脂肪肝模型。结果:模型组大鼠肝脏脂变严重,细胞内有大量空泡形成,胞浆脂滴大量出现且积聚严重,粗面内质网断裂,线粒体变形,细胞核直径减小,呈不规则形状。结论:虎金九能显著改善上述病理改变,脂变程度明显减轻,肝细胞超微结构基本恢复正常。

虎金颗粒对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤指标的影响

[目的]探讨虎金颗粒对免疫性肝纤维化模型大鼠肝功能和血清中肝纤指标的变化的影响。[方法]用猪血清腹腔注射诱导免疫性肝纤维化模型,并用不同剂量的虎金颗粒进行干预,用全自动生化分析仪测定肝功能,用放射免疫分析法测定血清肝纤指标。[结果]猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中AST、ALT、HA、LN、IV-C和PCⅢ含量均明显升高,虎金颗粒对上述指标有一定的逆转作用,并能升高血清中白蛋白含量。[结论]虎金颗粒对免疫性肝纤维化有一定的防治作用,能降低肝纤维化程度,同时有效减轻肝细胞损伤,改善肝功能。

虎金丸抗大鼠肝纤维化的免疫组化和超微结构观察

目的：观察虎金丸的抗肝纤维化作用及对肝纤维化的免疫组化和超微结构的影响。方法：采用ＣＣｌ４ 后腿皮下注射致大鼠肝纤维化模型。结果：模型组大鼠病理片呈肝纤维化变，ＦＳＣ增生活跃，有较大量的ＩＶ型胶原沉积。超微结构可见大量的胶原纤维生成和成纤维细胞。结论：虎金丸能明显改善上述组织形态学的变化，抑制肝纤维化的形成，改善肝细胞的超微结构。

虎金颗粒抗肝纤维化的光镜电镜实验研究

目的:观察虎金颗粒抗肝纤维作用及对肝纤维化的组织病理学和超微结构的影响。方法:皮下注射四氯化碳(CCl4)法复制大鼠肝纤维化模型,以虎金颗粒进行防治,用光镜观察肝脏HE、Van Gieson(VG)胶原染色的变化以及α-平滑肌(-αSMA)在肝内的表达,用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果:治疗组肝脏HE、VG胶原染色及超微结构的改善情况明显优于对照组,-αSMA表达亦较对照组弱。结论:虎金颗粒有良好的抗肝纤维化的作用。

虎金丸对CCl_4所致实验性肝损伤的保护作用

虎金丸ｉｇ小鼠，能显著降低ＣＣｌ４所致血中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＳＴ和肝中ＭＤＡ水平的升高；虎金丸ｉｇ大鼠制得药物血清后，以１０％浓度加入原代培养大鼠肝细胞培养液中，能显著降低１０ｍｍｏｌ／ＬＣＣｌ４所致培养液中ＡＬＴ和ＭＤＡ的升高，并使细胞存活率由５５．９０％提高至８２．４５％。

护津方对急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-кB mRNA表达的影响

目的探讨护津方对细菌脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB m RNA(NF-κBm RNA)表达的影响。方法40只雄性W istar大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组和护津方组,每组再分为4h和8h两个亚组;分别用地塞米松和护津方在LPS诱导急性肺损伤模型前预处理大鼠。采用免疫组化法和定量RT-PCR检测大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB m RNA的表达,光镜观察肺组织病理形态。结果与模型组相比,护津方组两个亚组大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB m RNA的表达均显著降低。病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论护津方对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机制可能与其降低内毒素致急性肺损伤大鼠NF-κB蛋白及NF-κB m RNA的表达有关。

虎金丸对肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察虎金丸对肝纤维化大鼠胶原增生及Ⅳ型胶原(ⅣC)表达的影响。方法:以CCl4复制肝纤维化大鼠动物模型,采用VG染色、免疫组化技术观察虎金丸对肝纤维化胶原增生及ⅣC表达的影响。结果:CCl4肝纤维化大鼠模型肝组织胶原纤维明显增生、ⅣC表达较正常对照组明显增强,虎金丸能抑制肝纤维化大鼠胶原增生及ⅣC在肝纤维化大鼠肝组织中的表达。结论:虎金丸有抗肝纤维化作用。

虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响

目的研究虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响,初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。方法以CCl4诱导肝纤维化大鼠动物模型,采用Masson胶原染色肝脏纤维化,分光光度法检测SOD、GSH-Px含量,免疫组化法测检Nrf2、Bach1的蛋白量。结果从Masson染色得出,虎金丸能减轻CCL4所致的肝纤维化,显著降低胶原纤维面密度;与模型组比较,虎金丸组SOD、GSH等抗氧化酶的含量显著升高(P<0.01);虎金丸药物的使用显著降低了肝细胞组织匀浆中Nrf2的表达水平、提高了Bach1的表达水平(P<0.01)。结论虎金丸可调控肝细胞组织匀浆中Nrf2/Bach1蛋白的表达,促进机体氧化应激的调整与抗肝纤维化。

护津方对急性肺损伤大鼠肺组织金属基质蛋白酶2mRNA及其抑制因子2mRNA表达的影响

目的:探讨护津方对细菌脂多糖诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织金属基质蛋白酶2mRNA(MMP-2mRNA)及其抑制因子2mRNA(TIMP-2mRNA)表达的影响。方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、LPS模型组、地塞米松组和护津方组,每组再分为4小时和8小时两个亚组。分别用地塞米松和护津方在LPS诱导ALI模型前预处理大鼠。检测大鼠肺体指数,实时荧光定量PCR检测肺组织MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表达,并光镜观察肺组织病理形态变化。结果:与模型组相比,在两个时相点护津方组大鼠肺体指数显著降低(P<0.01或P<0.05)、MMP-2mRNA表达表达明显降低(P<0.01)及TIMP-2mRNA表达明显升高(P<0.01或P<0.05)。病理学观察,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论:护津方对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机理可能与其能降低MMP-2mRNA的表达和升高TIMP-2mRNA的表达有关。

护津方对急性肺损伤大鼠弹性蛋白酶及肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的:探讨护津方对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中弹性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)及肺组织肿瘤坏死因子-αmRNA(Tumor necrosis factor-α mRNA,TNF-α mRNA)表达的影响。方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组、LPS模型组、地塞米松组、护津方组,每组再分为4h和8h两个亚组。分别用地塞米松和护津方在LPS诱导ALI模型前预处理大鼠。分别采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR检测NE及TNF-α mRNA的表达。结果:两个时相点中,与模型组相比,护津方组BALF中NE含量均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,8h组中,护津方组TNF-α mRNA表达均显著降低(P<0.01)。病理学观察,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论:护津方能减轻内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织损伤,对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机理可能与其能降低内毒素致急性肺损伤BALF中NE及肺组织TNF-α mRNA的表达有关。

李兴培教授临证经效方钩玄

介绍全国名老中医李兴培教授临证创用三方 ,以宽膈汤治疗气郁 ,凉血祛风燥湿汤治疗皮肤疾患 ,琥金通淋排石汤治疗尿路结石 ,均颇著效验。

虎金颗粒剂提取工艺的研究

【目的】探讨虎金颗粒剂的最佳提取工艺路线。【方法】采用正交设计,以总大黄素、总蒽醌含量为醇提工艺指标,考察乙醇浓度、溶媒用量、提取时间等因素的最佳工艺条件;以总多糖含量为水提工艺指标,考察浸泡时间、水的用量、提取时间等因素的最佳工艺条件。【结果】醇提最佳工艺为:245mL体积分数为70％乙醇提取2 h,共2次;水提最佳工艺为:80mL水,不用浸泡,提取1.5 h,共3次。【结论】该提取工艺合理的,可行,为选择虎金颗粒剂的提取条件提供了实验依据。

舒筋活血祛痛方熏蒸配合正骨手法治疗L_(4~5)腰椎间盘突出症合并骶髂关节功能紊乱症的效果观察

目的:观察在L_(4~5)腰椎间盘突出症合并骶髂关节功能紊乱症患者临床治疗过程中采用舒筋活血祛痛方熏蒸配合正骨手法的临床疗效。方法:选取盐亭县人民医院2021年5月-2022年5月收治的120例L_(4~5)腰椎间盘突出症合并骶髂关节功能紊乱症患者为研究对象,按照治疗方案分为对照组与观察组,各60例。对照组采用舒筋活血祛痛方熏蒸联合针灸进行治疗,观察组采用舒筋活血祛痛方熏蒸配合正骨手法进行治疗。对比两组临床指标、临床疗效及腰椎活动度。结果:治疗后,观察组VAS、JOA评分低于对照组,ODI评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组前伸、后屈、左旋、右旋活动度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒筋活血祛痛方熏蒸配合正骨手法治疗L_(4~5)腰椎间盘突出症合并骶髂关节功能紊乱症患者的效果显著,可提高其腰椎活动度。