改良后Hulth法和Ⅱ型胶原酶注射法建立兔膝骨关节炎模型的比较研究

目的对比分析兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型两种常用造模方法的差异,为不同类型膝骨关节炎动物模型的选择提供参考。方法将9只健康新西兰大白兔随机分为3组:空白组、改良后Hulth组、胶原酶组。改良后Hulth组和胶原酶组分别给予改良后Hulth法、关节腔内注射胶原酶干预,1周后每日促使其活动,6周后进行Lequesne MG评分、X-ray、Micro-CT、Pelletier评分、Mankin评分、ELISA检测,观察膝关节大体及病理改变。结果与空白组相比,两种造模方法的兔膝关节软骨表面均出现缺损;病理结果显示软骨层出现裂隙,番红O染色减退,潮线扭曲并伴有血管通过;ELISA结果显示空白组、改良后Hulth组和胶原酶组血清内TNF-α含量分别为(624.99±17.82),(1140.56±129.81)和(1480.69±492.08)pg/mL,血清内IL-1β含量分别为(30.23±0.25),(46.67±0.71)和(46.82±1.04)pg/mL,改良后Hulth组和胶原酶组与空白组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。另外,改良后Hulth组膝关节伴有骨赘生成,股骨内髁软骨损伤更为严重,而胶原酶组损伤部位主要为胫骨内髁。结论两种造模方法均能构建理想的KOA模型。改良后Hulth法的损伤程度更严重;胶原酶诱导的模型损伤方式更接近人KOA进程与发病机制。

改良Hulth法结合戊二醛注射建立大鼠膝骨关节炎模型

目的 探讨改良Hulth法结合戊二醛注射建立大鼠膝骨关节炎模型的可行性与有效性。方法 将32只SD大鼠按照随机数字表法分为模型组和对照组,每组16只。模型组采用手术切除膝关节内侧副韧带、前交叉韧带及内侧半月板并在关节腔内注射4%戊二醛0.5μl建立膝骨关节炎动物模型;对照组不做任何干预。两组于第4周取大鼠膝关节进行Masson染色组织病理学观察,并记录膝关节软骨组织的改良Mankin评分。结果 模型组大鼠术后1周手术切口均愈合良好,活动基本正常。第4周,对照组关节软骨表面光滑平整,厚薄一致,层次清晰,滑膜未见明显炎症细胞,未见毛细血管增生、充血,以脂肪组织为主;模型组关节软骨表面明显粗糙、凹凸不平整,关节软骨层厚薄不一致,部分软骨剥脱、碎裂,细胞明显增多,滑膜组织中有中性粒细胞以及单核巨噬细胞浸润,毛细血管增多并充血,胶原纤维增多,部分增粗伴玻璃样变性。第4周大鼠膝关节软骨组织改良Mankin评分模型组明显高于对照组(P <0.05)。结论 改良Hulth法结合戊二醛注射能在4周内快速、有效地建立大鼠早中期膝骨关节炎模型。

3种不同膝骨关节炎造模方法比较

目的比较卵巢切除法、木瓜蛋白酶法、改良Hulth法3种方法在不同时间节点血清炎症因子、病理表现及关节软骨胶原蛋白(Collagen)Ⅱ的表达,了解膝骨关节炎不同造模方法的造模效果及特点。方法选取清洁级雌性SD大鼠80只,采用随机数字表法分别设立空白对照组(6 w组、10 w组)、卵巢切除法组(6 w组、10 w组)、木瓜蛋白酶法组(6 w组、10 w组)、改良Hulth法组(6 w组、10 w组),每组10只。除空白对照组外,其余组按照相应方法建立膝骨关节炎模型。分别于建模后第6周、第10周处死相应组别大鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、基质金属蛋白酶(MMP)-3含量,镜下观察大鼠膝关节形态并用改良Mankin标准进行病理评分,免疫组化法检测膝关节软骨CollagenⅡ型胶原表达。结果造模6 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及膝关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组、卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。造模10 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组及卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。与木瓜蛋白酶法组对比,改良Hulth法组血清TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显更高,关节软骨CollagenⅡ表达明显更低(P<0.05)。结论在第10周时,卵巢切除法未能成功建立膝骨关节炎模型。木瓜蛋白酶法和改良Hulth法均可在第6周时快速、有效地建立膝骨关节炎模型。而改良Hulth法随着造模时间增加,在炎症反应表现更加持久和膝关节病理改变严重程度更高。

兔骨关节炎两种动物模型的比较

[目的]探讨建立两种骨关节炎动物模型的效果及其适用条件。[方法]17只新西兰大白兔分为Hu lth模型组、韧带切除模型组及空白对照组。在手术建模后第1、3、6周取双侧股骨髁部,比较各组骨关节大体形态及病理变化。[结果]两模型组M ank in's评分显著高于对照组(P<0.05),关节软骨退变进行性加重。Hu lth模型组关节炎程度较严重,类似骨关节炎中晚期,韧带切除模型组类似骨关节炎早期或中期。[结论]Hu lth模型组和韧带切除模型组均能建立标准的骨关节炎动物模型。Hu lth模型组适用于外科手术治疗方面研究,韧带切除模型适合发病机理、药物治疗方面研究。

骨痹颗粒对大鼠骨关节炎的保护作用

目的观察骨痹颗粒对骨关节炎大鼠的保护作用,初步探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、假手术组、塞来昔布组及骨痹颗粒高、中、低3个剂量组;采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型,连续灌胃给药8周后,观察骨痹颗粒对大鼠血清中炎症因子、基质金属蛋白酶及抑制剂及病理组织学变化的影响。结果骨痹颗粒可显著抑制炎症因子IL-1及TNF-α的释放（P〈0.05-0.01）,降低MMP-1及MMP-3水平（P〈0.05-0.01）,提高TIMP-1水平（P〈0.05）,改善软骨病理变化,降低Mankin＇s评分（P〈0.05）。结论骨痹颗粒对大鼠骨关节炎具有良好的防治作用,其机制与抑制炎症因子释放、调整基质合成与代谢的平衡有关。

Ⅱ型胶原注射骨关节炎时C-反应蛋白及类风湿因子的表达

背景:Ⅱ型胶原和硫酸软骨素是关节软骨的重要组成成分,不仅具有保护软骨的作用,还能抑制关节炎的病变。目的:通过检测类风湿因子和C-反应蛋白的表达评价Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素注射对骨性关节炎的疗效。方法:采用改良Hulth法制作大鼠膝关节骨性关节炎模型,造模后模型组关节腔注射生理盐水、透明质酸钠组给予透明质酸钠凝胶注射、Ⅱ型胶原组给予单纯Ⅱ型胶原注射、Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素组给予Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素注射治疗。各组动物于术后进行日常观察、称质量、血清抗体及组织病理检查。结果与结论:造模后模型组大鼠血类风湿因子和C-反应蛋白水平均有所升高,炎症加剧;而与模型组相比,各给药组大鼠类风湿因子和C-反应蛋白水平均有所下降,炎症有所减轻,其中Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素组大鼠血清中类风湿因子水平显著下降(P<0.01)。结果显示Ⅱ型胶原与透明质酸钠均具有预防和治疗骨关节炎的作用,能缓解骨关节炎病变,Ⅱ型胶原联合硫酸软骨素的疗效更明显。

大鼠骨关节炎三种动物模型的建立及比较

为探讨三种骨关节炎动物模型的建立方法、效果及其适用条件,采用Hulth手术、碘乙酸关节腔注射、前交叉韧带切除处理,对SD大鼠造骨关节炎模型,并在适当时间,取两侧膝关节进行切片,比较各组骨关节大体形态及病理变化。实验结果表明,Hulth模型组及碘乙酸模型组6周即可造模成功,损伤程度较严重,类似骨关节炎中晚期;前交叉韧带切除模型组造模需8周以上,病情类似骨关节炎早期或中期,更适合用作发病机制、药物治疗方面的研究。

基于16SrDNA基因测序探究骨碎补总黄酮对骨关节炎大鼠肠道菌群的影响

目的:探究骨碎补总黄酮对骨关节炎(OA)模型大鼠肠道菌群的影响,并分析其治疗OA的潜在机制。方法:通过Hulth法建立OA大鼠模型,使用骨碎补总黄酮干预后获取大鼠粪便及膝关节软骨。将大鼠膝关节软骨进行病理学观察并进行Mankin's评分以评估模型的建立及骨碎补总黄酮的干预效果。通过16SrDNA基因测序技术检测各组大鼠肠道菌群的变化。结果:骨碎补总黄酮进行干预后,OA大鼠软骨退变得到改善,Mankin’s评分降低(P<0.05)。LEfSe分析显示经骨碎补总黄酮治疗后,罗姆布茨菌属、瘤胃球菌属、消化链球菌科、鼠乳杆菌种等相对丰度下降,Muri菌科相对丰度显著升高。KEGG富集结果表明,相关肠道菌落调控OA与碳水化合物代谢、糖合成代谢和能量代谢密切相关。结论:骨碎补总黄酮可能通过促进肠道内有益菌生长,抑制有害菌繁殖调整大鼠肠道内微生态平衡,减轻肠道内炎症反应,发挥OA的治疗作用。

马钱子总碱对兔膝骨关节炎模型软骨损伤修复作用及机制

目的探讨马钱子总碱对兔膝骨Hulth-Telhag关节炎模型的作用及机制。方法新西兰兔随机分为正常对照组,模型组,假手术组,马钱子总碱高、中、低剂量组,玻璃酸钠组,每组8只。除正常对照组外,其余各组均以Hulth-Telhag方法造模。造模8周后,马钱子总碱高、中、低剂量组分别给予兔每个膝关节腔注射0.3、0.2、0.1mL马钱子总碱注射液,玻璃酸钠组给予兔每个膝关节腔注射0.2mL玻璃酸钠,每周2次,连续用药5周。正常对照组、模型组及假手术组常规饲养,无其他特殊处理。停药1周后光镜观察关节软骨病理改变和Mankin′s评分,血液流变仪检测全血黏度(低切、中切、高切)及血浆黏度,ELISA检测关节液NO、SOD、过氧化脂质(LPO)及尿液吡啶酚(PYD)含量。结果与正常对照组比较,模型组Mankin′s评分、全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05)。与模型组比较,马钱子总碱高、中剂量组及玻璃酸钠组Mankin′s评分降低(P<0.05);各给药组全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05)。马钱子总碱中剂量组较低剂量组中、高切变率全血黏度、SOD升高(P<0.05),NO、LPO及PYD降低(P<0.05);马钱子总碱高剂量组较中剂量组全血黏度、血浆黏度升高(P<0.05),NO、LPO及PYD降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05)。与玻璃酸钠组比较,马钱子总碱低剂量组Mankin′s评分、NO、LPO及PYD升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05);马钱子总碱中剂量组Mankin′s评分、SOD降低(P<0.05),NO、LPO及PYD升高(P<0.05);马钱子总碱高剂量组Mankin′s评分、全血黏度及血浆黏度升高(P<0.05)。结论马钱子总碱对骨关节炎的软骨损伤具有修复作用,其机制主要与通过SOD途径抑制NO介导的软骨细胞凋亡有关,还与改善软骨代谢有关。